摘要：從5個(gè)不同品種藍(lán)靛果忍冬（Lonicera edulis Turcz.）果實(shí)中提取酚類物質(zhì)，利用分光光度法進(jìn)行抗氧化性能分析，并對(duì)抗氧化性綜合指標(biāo)最高的品種建立組織培養(yǎng)體系。結(jié)果表明，不同品種的藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中酚類物質(zhì)對(duì)各種氧化自由基均有不同程度的清除能力，其中選育品種C0307抗氧化能力最強(qiáng)。取藍(lán)靛果忍冬的枝條進(jìn)行水培，長(zhǎng)出的新芽作為外植體，根據(jù)芽的分化率確定誘導(dǎo)形成愈傷組織最佳培養(yǎng)基與激素配比為1/2MS+0.2 mg/L IBA+3.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA，芽分化率為85%。

關(guān)鍵詞：藍(lán)靛果忍冬；抗氧化性能；組織培養(yǎng)；酚類物質(zhì)；愈傷組織；外植體

中圖分類號(hào)： Q943.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）09-0160-02

收稿日期：2014-05-04

基金項(xiàng)目：公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項(xiàng)（編號(hào)：201103037）。

作者簡(jiǎn)介：劉桂伶（1990—），女，碩士，從事園林植物研究。E-mail：178571886@qq.com。

通信作者：閆紹鵬，博士，高級(jí)工程師，從事遺傳育種研究。E-mail：ysp_4@126.com。藍(lán)靛果忍冬（Lonicera edulis）別稱藍(lán)靛果、藍(lán)果忍冬，是忍冬科忍冬屬多年生落葉小灌木，主要分布在我國(guó)東北（吉林省長(zhǎng)白山、黑龍江省大興安嶺東部山區(qū)以及內(nèi)蒙古自治區(qū)）、華北、西北、西南（四川?。┑鹊兀送?，俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)、日本及朝鮮北部等地也都有分布[1]。藍(lán)靛果忍冬具有較強(qiáng)的抗寒能力，適應(yīng)性好，生命力強(qiáng)，果實(shí)有很高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、保健價(jià)值，是天然抗氧化劑的良好資源[2]。本研究對(duì)不同品種藍(lán)靛果忍冬果實(shí)的抗氧化性能進(jìn)行分析，建立了其優(yōu)良品種組織培養(yǎng)體系，以期為開發(fā)利用藍(lán)靛果忍冬資源提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

2012年3月從黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝分院漿果園采集了野生品種W0101以及選育品種C0102、C0305、C0307、C0407等5個(gè)藍(lán)靛果忍冬品種的枝條及果實(shí)。

1.2方法

1.2.1藍(lán)靛果忍冬果實(shí)抗氧化性能測(cè)定采用乙醇浸提法從5個(gè)藍(lán)靛果品種的凍存果實(shí)中提取酚類物質(zhì)，參照徐建國(guó)等的方法[3]，采用水楊酸鈉絡(luò)合法測(cè)定羥自由基清除能力。參照Binsan等的方法[4]，測(cè)定ABTS 自由基的清除能力。參照郭艷華等的方法[5]，采用鄰苯三酚自氧化法測(cè)定超氧陰離子清除能力。參照張建民等的方法[6]，測(cè)定DPPH·的清除能力。羥自由基、ABTS 自由基、超氧陰離子自由基、DPPH·清除率計(jì)算公式如下：

C=[1-（D1-D2）/D0]×100%。（1）

式中：C為自由基清除率；D0為未加果實(shí)酚類物質(zhì)提取液的吸光度；D1為加入果實(shí)酚類物質(zhì)提取液的吸光度；D2為空白試劑的吸光度。每個(gè)試樣重復(fù)3次，取平均值。

1.2.2外植體的選擇及材料滅菌選取抗氧化性能較強(qiáng)的藍(lán)靛果忍冬選育品種C0307為材料建立組培體系。將藍(lán)靛果忍冬C0307枝條插在水中培養(yǎng)，以萌發(fā)的嫩芽為外植體。將萌發(fā)芽用無(wú)菌水浸泡3～5 min，70%乙醇沖洗10 s，無(wú)菌水沖洗6次，0.1% HgCl2浸泡5 min，無(wú)菌水沖洗8～10次，用濾紙吸干多余水分。

1.2.3組織培養(yǎng)體系的建立

1.2.3.1誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選將經(jīng)過(guò)表面消毒的外植體分別接種到MS、1/2MS、WPM培養(yǎng)基上，用于誘導(dǎo)分化愈傷組織及繼代培養(yǎng)[7]。在培養(yǎng)基中分別添加不同濃度的6-BA、NAA、IBA（表1），每處理重復(fù)3次，每次重復(fù)接種30瓶，30 d后統(tǒng)計(jì)各處理藍(lán)靛果忍冬芽的分化率，并觀察生長(zhǎng)情況。

1.2.3.2生根培養(yǎng)以WPM+NAA 0.5 mg/L為藍(lán)靛果忍冬的生根培養(yǎng)基，移栽前將試管苗放于溫室中，打開瓶口，逐漸降低溫度，并逐漸增加光強(qiáng)，隨后移栽。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

采用DPS7.05軟件進(jìn)行方差分析及多重比較。

2結(jié)果與分析

2.1藍(lán)靛果忍冬果實(shí)抗氧化性能

具有氧化性自由基的物質(zhì)在特定波長(zhǎng)處有最大吸收峰，多酚類物質(zhì)可以清除自由基，從而使其在特定波長(zhǎng)處的吸光度發(fā)生變化。因此，可以通過(guò)測(cè)定吸光度來(lái)反映多酚類物質(zhì)對(duì)自由基的清除能力，進(jìn)而測(cè)定藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中酚類物質(zhì)的抗氧化能力。從表2可以看出，不同品種的藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中的酚類物質(zhì)均能一定程度上削弱鄰苯三酚的自氧化，對(duì)超氧陰離子都有一定的清除作用，其中野生型品種W0101、選育品種C0370對(duì)超氧陰離子清除能力較強(qiáng)，清除率分別達(dá)到37.14%、31.48%。選育品種C0307、野生型品種W0101對(duì)羥自由基清除能力也較強(qiáng)，清除率分別為44.44%、3907% 。野生型品種W0101、選育品種C0307對(duì) DPPH· 清除能力較強(qiáng)，清除率均達(dá)到50%以上；選育品種C0102對(duì)DPPH·清除能力次之；選育品種0305對(duì)DPPH·清除能力最弱。將藍(lán)靛果忍冬凍存果實(shí)酚類物質(zhì)提取液加入DPPH·溶液中，DPPH·混合液的顏色逐漸變淺，顏色越淺意味著對(duì)DPPH·清除能力越強(qiáng)。ABTS 是抗氧化試驗(yàn)中常用的自由基，不同品種藍(lán)靛果忍冬凍存果實(shí)酚類物質(zhì)提取液對(duì)ABTS自由基的抑制作用均在50%左右，選育品種C0305、C0307對(duì)ABTS自由基清除能力較強(qiáng)，清除率分別為51.77%、5036%。

2.2藍(lán)靛果忍冬組培體系建立

2.2.1基本培養(yǎng)基及激素配比對(duì)于外植體誘導(dǎo)分化的影響由表3可知，在其他組分條件相同、培養(yǎng)基條件不同的情況下，4～6組分化率大于1～3、7～9組，說(shuō)明1/2 MS培養(yǎng)基比MS培養(yǎng)基、WPM培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化形成愈傷組織效果好。在培養(yǎng)基一致情況下，5組的分化率最高，達(dá)85%，增殖倍數(shù)為7.8倍，表明1/2MS+0.2 mg/L IBA+30 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA誘導(dǎo)分化形成愈傷組織效果好，確定此為最佳誘導(dǎo)分化的培養(yǎng)基與激素配比。

2.2.2生根培養(yǎng)當(dāng)苗高1.5～2.0 cm時(shí)，切取單芽分別轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)20 d左右開始長(zhǎng)出淺綠色的根，生根率達(dá)95%以上，說(shuō)明控制藍(lán)靛果忍冬試管苗生根的主要因素是 NAA，且NAA濃度為 0.5 mg/L時(shí)，植株生根狀況最好。由于根粗壯、生根數(shù)少，生根狀況好的苗木較易成活，因此選擇培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0.5 mg/L為藍(lán)靛果忍冬的生根培養(yǎng)基。圖1為選育品種C0307藍(lán)靛果忍冬的組培體系建立過(guò)程。

3結(jié)論與討論

不同品種的藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中酚類物質(zhì)對(duì)各種自由基的清除能力不同。野生型品種W0101、選育品種C0370對(duì)超氧陰離子清除能力較強(qiáng)，清除率分別達(dá)到37.14%、31.48%。選育品種C0307、野生型品種W0101對(duì)羥自由基清除能力也較強(qiáng)，清除率分別為44.44%、39.07% 。野生型品種W0101、選育品種C0307對(duì)DPPH·清除能力較強(qiáng)，清除率均達(dá)到50%以上；選育品種C0102對(duì)DPPH·清除能力次之；選育品種0305對(duì)DPPH·清除能力最弱。綜合以上各項(xiàng)指標(biāo)，確定選擇選育品種C0307進(jìn)行藍(lán)靛果忍冬組培體系建立。根據(jù)芽分化率確定誘導(dǎo)形成愈傷組織最佳培養(yǎng)基與激素配比為1/2MS+0.2 mg/L IBA+3.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA，芽分化率為85%。用1/2MS+0.5 mg/L NAA作為藍(lán)靛果忍冬的生根培養(yǎng)基，生根效果較好。

參考文獻(xiàn)：

[1]周以良，董世林，聶紹荃. 黑龍江樹木志[M]. 哈爾濱：黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社，1986：525.

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[3]徐建國(guó)，胡青平. 決明子水提物體外清除自由基活性的研究[J]. 食品科學(xué)，2006，27（6）：73-76.

[4]Binsan W，Benjakul S，Visessanguan W，et al. Antioxidative activity of Mungoong，an extract paste，from the cephalothorax of white shrimp （Litopenaeus vannamei）[J]. Food Chemistry，2008，106（1）：185-193.

[5]郭艷華，胡思前. 荸薺皮提取物的抗氧化活性研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè)，2007，33（10）：128-130.

[6]張建民，肖小年，易醒，等. 車前草可溶性膳食纖維的提取及其對(duì)自由基清除能力的研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2007，19（4）：667-670.

[7]李桂君，李艷霞，盧慧穎，等. 俄羅斯耐寒藍(lán)靛果忍冬組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J]. 林業(yè)科技，2012，37（4）：4-6.姚嵐，周軍，崔懷飛. 沙家浜濕地公園景觀規(guī)劃設(shè)計(jì)分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（9）：162-167.

2.2.2生根培養(yǎng)當(dāng)苗高1.5～2.0 cm時(shí)，切取單芽分別轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)20 d左右開始長(zhǎng)出淺綠色的根，生根率達(dá)95%以上，說(shuō)明控制藍(lán)靛果忍冬試管苗生根的主要因素是 NAA，且NAA濃度為 0.5 mg/L時(shí)，植株生根狀況最好。由于根粗壯、生根數(shù)少，生根狀況好的苗木較易成活，因此選擇培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0.5 mg/L為藍(lán)靛果忍冬的生根培養(yǎng)基。圖1為選育品種C0307藍(lán)靛果忍冬的組培體系建立過(guò)程。

3結(jié)論與討論

不同品種的藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中酚類物質(zhì)對(duì)各種自由基的清除能力不同。野生型品種W0101、選育品種C0370對(duì)超氧陰離子清除能力較強(qiáng)，清除率分別達(dá)到37.14%、31.48%。選育品種C0307、野生型品種W0101對(duì)羥自由基清除能力也較強(qiáng)，清除率分別為44.44%、39.07% 。野生型品種W0101、選育品種C0307對(duì)DPPH·清除能力較強(qiáng)，清除率均達(dá)到50%以上；選育品種C0102對(duì)DPPH·清除能力次之；選育品種0305對(duì)DPPH·清除能力最弱。綜合以上各項(xiàng)指標(biāo)，確定選擇選育品種C0307進(jìn)行藍(lán)靛果忍冬組培體系建立。根據(jù)芽分化率確定誘導(dǎo)形成愈傷組織最佳培養(yǎng)基與激素配比為1/2MS+0.2 mg/L IBA+3.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA，芽分化率為85%。用1/2MS+0.5 mg/L NAA作為藍(lán)靛果忍冬的生根培養(yǎng)基，生根效果較好。

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[7]李桂君，李艷霞，盧慧穎，等. 俄羅斯耐寒藍(lán)靛果忍冬組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J]. 林業(yè)科技，2012，37（4）：4-6.姚嵐，周軍，崔懷飛. 沙家浜濕地公園景觀規(guī)劃設(shè)計(jì)分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（9）：162-167.

2.2.2生根培養(yǎng)當(dāng)苗高1.5～2.0 cm時(shí)，切取單芽分別轉(zhuǎn)接于生根培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)20 d左右開始長(zhǎng)出淺綠色的根，生根率達(dá)95%以上，說(shuō)明控制藍(lán)靛果忍冬試管苗生根的主要因素是 NAA，且NAA濃度為 0.5 mg/L時(shí)，植株生根狀況最好。由于根粗壯、生根數(shù)少，生根狀況好的苗木較易成活，因此選擇培養(yǎng)基1/2MS+NAA 0.5 mg/L為藍(lán)靛果忍冬的生根培養(yǎng)基。圖1為選育品種C0307藍(lán)靛果忍冬的組培體系建立過(guò)程。

3結(jié)論與討論

不同品種的藍(lán)靛果忍冬果實(shí)中酚類物質(zhì)對(duì)各種自由基的清除能力不同。野生型品種W0101、選育品種C0370對(duì)超氧陰離子清除能力較強(qiáng)，清除率分別達(dá)到37.14%、31.48%。選育品種C0307、野生型品種W0101對(duì)羥自由基清除能力也較強(qiáng)，清除率分別為44.44%、39.07% 。野生型品種W0101、選育品種C0307對(duì)DPPH·清除能力較強(qiáng)，清除率均達(dá)到50%以上；選育品種C0102對(duì)DPPH·清除能力次之；選育品種0305對(duì)DPPH·清除能力最弱。綜合以上各項(xiàng)指標(biāo)，確定選擇選育品種C0307進(jìn)行藍(lán)靛果忍冬組培體系建立。根據(jù)芽分化率確定誘導(dǎo)形成愈傷組織最佳培養(yǎng)基與激素配比為1/2MS+0.2 mg/L IBA+3.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA，芽分化率為85%。用1/2MS+0.5 mg/L NAA作為藍(lán)靛果忍冬的生根培養(yǎng)基，生根效果較好。

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[5]郭艷華，胡思前. 荸薺皮提取物的抗氧化活性研究[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè)，2007，33（10）：128-130.

[6]張建民，肖小年，易醒，等. 車前草可溶性膳食纖維的提取及其對(duì)自由基清除能力的研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2007，19（4）：667-670.

[7]李桂君，李艷霞，盧慧穎，等. 俄羅斯耐寒藍(lán)靛果忍冬組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J]. 林業(yè)科技，2012，37（4）：4-6.姚嵐，周軍，崔懷飛. 沙家浜濕地公園景觀規(guī)劃設(shè)計(jì)分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（9）：162-167.