劉紅宇，王繁，甘建玲，何蓉，鄧思媛，歐陽寧

(萍鄉(xiāng)市婦幼保健院生殖遺傳研究室，江西 萍鄉(xiāng)337055)

地中海貧血(thalassemia簡稱地貧)是人體珠蛋白基因缺失或突變而引起的一種遺傳性溶血性貧血，是我國南方最常見的遺傳性疾病[1，2]。在我國常見于廣西、海南、廣東、福建、香港、臺灣、云南、貴州、四川等地區(qū)。地貧目前尚無確切有效的治療方法，重型α-地貧多為死胎且孕婦并發(fā)妊娠高血壓綜合征，重型β-地貧需要終身依賴輸血和使用祛鐵劑，而中間型α和β地貧患者多無勞動能力或勞動力下降[3,4]，給家庭和社會帶來沉重的經濟負擔。因此，采用紅細胞平均體積MCV(mean corpuscular volume),平均紅細胞血紅蛋白量MCH(mean corpuscular hemoglobin)和血紅蛋白電泳對孕婦進行地中海貧血篩查，缺口聚合酶鏈反應(Gap-PCR)法、聚合酶鏈反應－反向斑點雜交法(PCR-RDB)對高危胎兒進行產前基因診斷進行基因檢測。是預防重型地中海貧血患兒出生的重要措施和方法[5]。

1 材料與方法

1.1 標本來源 2013年10月至2014年1月在我院婦?？飘a檢的孕婦及其丈夫共1345例，同時進行血常規(guī)和血紅蛋白電泳分析，并對164例地貧表型陽性者進行基因診斷。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 MCV和MCH測定 采用日本希森美康Xi800全自動血細胞分析儀及其配套的稀釋液和溶血素試劑測定，實驗前嚴格按照操作規(guī)程進行質控，標本為2ml EDTA-K2靜脈抗凝血。

1.2.2 血紅蛋白電泳分析 采用法國Sebia公司的全自動血紅蛋白電泳儀和按照配套的說明書進行操作。

1.3 地貧表型陽性診斷標準

1.3.1 α地貧表型篩查陽性 MCV<80 f1[6]，MCH<27pg，Hb A2<2.5%，Hb F<2%，其中一項陽性者。

1.3.2 β地貧表型篩查陽性 MCV<80f1，MCH<27pg，Hb A2>3.5%，Hb F>2%，其中一項陽性者。 對α或β地貧表型篩查陽性患者，重新抽取2ml EDTA-K2靜脈抗凝血做基因診斷。

1.4 檢測方法 地中海貧血的基因診斷α和β地貧試劑盒由亞能生物技術 (深圳)有限公司提供。PCR擴增儀為HEMA9600。

1.4.1 α地貧基因缺失型診斷采用Gap-PCR法檢測-αSEA，-α3.7和-α4.2三種α珠蛋白基因常見缺失型。α地貧點突變型診斷采用PCR斑點反向雜交法 (PCR-RDB)檢測三種點突變型，包括Hb WS:CD122(CAC→CAG),Hb QS:CD125(CTG→CCG),Hb CS:CD142(TAA→CAA)。

1.4.2 β地貧基因突變型采用PCR-RDB檢測17種β常見突變型 CD41-42(-TTCT)，IVS2nt654(C→T)，-28(A→G)，CD17(A→T)，CD71-72(+A)，-29(A→G)，βE(GAG→AAG)，CD43(G→T)，CD27/28(+C)，CD14-15(+G)，CD31(-C) ，-32(C→A) ，-30(T→C)，IVS-Ⅰ-5(G→C)，CAP[CAP+1(A→C)/nts40-43(-AAAC)]，Int(ATG→AGG)。

2 結果

2.1 地貧表型陽性檢出率 在1345例病人中檢出地貧表型陽性者共164例，陽性率占12.19%。其中α地貧表型陽性者73例，占44.51%，β地貧表型陽性者91例，占55.49%。

2.2 地中海貧血基因診斷的確診例數(shù) 164例表型陽性的孕婦及其丈夫經基因診斷后，確診為地貧患者58例，其中α地貧18例，β地貧40例。

2.3 地中海貧血基因診斷的確診率中α和β各型所占比例 在18例α地貧中--αSEA/αα雜合子16例，占 88.89%，-α3.7/αα 地貧雜合子 0例，占 0%，-α4.2/αα地貧雜合子2例，占11.11%，見表1。

表1 α地貧雜合子基因型(%)

在40例β地貧中CD41-42雜合子15例，IVS2nt654雜合子10例，CD17雜合子6例，-28(A→G)6例，CD71-72(+A)2例，-29(A→G)1例，這40例β地貧患者，共有6種類型β珠蛋白基因突變發(fā)生，見表2。

表2 β珠蛋白基因突變構成比(%)

3 討論

地中海貧血分布于世界許多地區(qū)，東南亞是高發(fā)區(qū)之一，其中中國以廣東、廣西、四川、海南多見，常見的類型α地貧和β地貧，據(jù)現(xiàn)有流行病學調查資料顯示，以上地區(qū)人群中α地貧發(fā)生率高達4～15%；β地貧約1～6%。地貧危害最嚴重的臨床類型是Hb Bart’s胎兒水腫綜合征、重型β地貧、中間型β地貧和血紅蛋白H病。

3.1 萍鄉(xiāng)地區(qū)地中海貧血的篩查 在萍鄉(xiāng)地區(qū)1345例篩查夫婦中，地貧表型陽性檢出率為12.19% ，其中α地貧表型陽性檢出率為44.51%，β地貧表型的陽性檢出率為55.49%，在我院的產檢人群當中，血常規(guī)的MCV和MCH常作為地貧篩查指標，表型陽性者再進行血紅蛋白電泳分析以定量檢測Hb A，Hb A2和Hb F，電泳陽性者再進行基因確診實驗，以減少漏診的發(fā)生。

3.2 萍鄉(xiāng)地區(qū)地中海貧血的基因診斷 經α基因缺失型分析后，在萍鄉(xiāng)市的孕婦及其丈夫中，東南亞缺失型--αSEA/αα占主導地位，基因構成比占88.89%，-α4.2/αα 地貧，即左側缺失占 11.11%，右側缺失很少出現(xiàn)。說明在中國南方地區(qū)比如江西省萍鄉(xiāng)地區(qū)α地貧缺失型主要是東南亞型占大部分，這與有關的研究報道結果相一致[7]。1996年杜傳書等人總結了中國人β地貧基因突變頻率的高低順序如下CD41-42(-TCCT)占41.6%，IVS2nt654(C→T)占 21.8%，CD17(A→T)占 18%，β-28(A→G)占 8%，CD71/72(+A)占 3.9%，β-29(A→G)占 1.2%[8]。本文在檢測出6種基因突變類型和構成比，大致與之相同。

3.3 萍鄉(xiāng)地區(qū)地中海貧血各型的分布特點及其結論 迄今為止，中國人中共發(fā)現(xiàn)了7種地貧缺失基因， 比較常見的有以下三種：-αSEA/αα，-α4.2/αα，-α3.7/αα。在萍鄉(xiāng)地區(qū)的1345例產婦及丈夫中，主要是 --αSEA/αα(88.89%)，很少部分為-α4.2/αα(11.11%)。α地貧突變型的6例患者中，無一例異常。說明，萍鄉(xiāng)地區(qū)α地貧主要以缺失型為主，突變型比較罕見。β地貧主要是突變所導致的，目前中國人群主要有34種突變，亞能生物檢測的17種突變類型包括了常見的突變類型。在6例篩查結果顯示α和β復合型患者中，無一例是α和β同時存在的。因而防治地貧的主要措施是進行篩查，并通過婚前、孕前或產前篩查出靜止型或輕型地貧夫婦，對于重型地貧高危胎兒進行產前基因診斷，阻止該病重癥患兒出生是目前國際公認的首選預防對策[9,10]。

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[3]張俊武,龍桂芳．血紅蛋白與血紅蛋白病[M].南寧:廣西科學技術出版社,2003:204-235．

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[6]Chern SR,Chen CP.Molecular prenatal diagnosis of thalassemia in Taiwan[J].Gynecol Obstet,2000,69(11):103-106.

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