★ 王利國(guó) 唐燦 劉艷 李梅 雷燕 黃麗萍 (.瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院 四川 瀘州646000;.瀘州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 四川瀘州646000)

梔子為茜草科植物梔子的干燥成熟果實(shí)，主產(chǎn)于四川、湖北、江西、重慶、浙江、湖南、福建等省［1］，具有瀉火除煩、清熱涼血解毒之功效，適用于熱病心煩，黃疸尿赤、血淋澀痛、血熱吐衄、目赤腫痛、火毒瘡瘍等證［2］，現(xiàn)代藥理研究證明梔子具有顯著的保肝降酶、利膽退黃、解熱抗炎、抗菌等藥理作用。有報(bào)道表明巴中產(chǎn)梔子主要有效成分——梔子苷、西紅花苷－Ⅰ、熊果酸含量均遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其它產(chǎn)地(四川樂(lè)山、青川、納溪、宜賓，重慶江津、湖北棗陽(yáng)等)梔子相應(yīng)有效成分含量，從主要有效成分的含量?jī)?yōu)勢(shì)初步證明巴中產(chǎn)梔子品質(zhì)優(yōu)異、質(zhì)量穩(wěn)定［3］。建立一個(gè)品質(zhì)優(yōu)異的川產(chǎn)道地藥材——巴中產(chǎn)梔子，除上述報(bào)道檢測(cè)主要有效成分的含量外，還必須通過(guò)主要藥效學(xué)指標(biāo)與江西、江津、湖北等地產(chǎn)梔子的藥理效應(yīng)橫向比較，進(jìn)一步從藥理效應(yīng)這個(gè)方面再證明巴中產(chǎn)梔子的優(yōu)異品質(zhì)。本課題對(duì)梔子主要藥效學(xué)利膽退黃作用進(jìn)行以下研究［4］。

1 材料

1.1 藥物與試劑 巴中產(chǎn)30年生梔子成熟果實(shí)采自巴中市巴州區(qū)平梁鄉(xiāng)青包山村－－四川省梔子產(chǎn)業(yè)科技示范園區(qū)(四川省巴中市百順中藥飲片有限公司);湖北產(chǎn)梔子成熟果實(shí)(采自湖北省棗陽(yáng)市新市鎮(zhèn));江西產(chǎn)梔子成熟果實(shí)(采自江西省撫州市金溪具黃梔子GAP種植基地);江津產(chǎn)梔子(采自重慶市江津區(qū)賈嗣鎮(zhèn)紅陽(yáng)村)。經(jīng)課題組鑒定均為茜草科植物梔子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果實(shí)。梔子水溶性有效部位0.3g/mL，梔子70%乙醇溶性有效部位0.3g/mL(提取物中乙醇已除盡)?？偰懠t素(TBIL)測(cè)定試劑盒、總膽固醇(CHOL)測(cè)定試劑盒(均購(gòu)于浙江夸克生物科技有限公司)。生理鹽水(購(gòu)于四川科倫有限責(zé)任公司)。戊巴比妥鈉(購(gòu)于瀘州天根生化科技有限責(zé)任公司)。

1.2 儀器 電子天平(上海民橋精密儀器有限公司生產(chǎn)，型號(hào):FA1104W);超聲波清洗機(jī)(北京東西儀科技有限公司生產(chǎn)，型號(hào):WH96/800);電熱真空干燥箱(上海實(shí)驗(yàn)儀器廠生產(chǎn)，型號(hào):OK072);高速離心機(jī)(華辰樂(lè)天生物實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司生產(chǎn)，型號(hào):HC－2062);BECKMAN全自動(dòng)生化測(cè)定儀(美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司生產(chǎn)，型號(hào):DXC800)。

1.3 動(dòng)物 家兔，雌雄兼用，1.5～2.5kg(由瀘州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以xˉ±s表示，兩組數(shù)據(jù)間比較采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，以P＜0.05表示顯著性差異、以P＜0.01表示非常顯著性差異、以P＜0.001表示極顯著性差異。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取方法

2.1.1 水溶性有效部位提取方法 稱取干燥梔子粗30g加7倍量水浸泡30min后超聲提取15min過(guò)濾，濾渣再加4倍量水超聲提取15min過(guò)濾，最后再加4倍量水超聲提取15min過(guò)濾，合并3次提取液加入1‰苯甲酸鈉于55℃烘箱中濃縮至100mL。

2.1.2 70%醇溶性有效部位提取方法 稱取干燥梔子水提藥渣30g加入5倍量70%乙醇浸泡30min后超聲提取20min過(guò)濾，再加4倍量70%乙醇超聲提取20min過(guò)濾，最后再加入3倍量70%乙醇超聲提取20min過(guò)濾，合并3次提取液于55℃烘箱中濃縮至100mL，加入1‰苯甲酸鈉。

2.2 試驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分為9組:正常對(duì)照組(Normal)、巴中產(chǎn)梔子水溶性有效部位組(BZZZW)、江西產(chǎn)梔子水溶性有效部位組(JXZZW)、江津產(chǎn)梔子水溶性有效部位組(JJZZW)、湖北產(chǎn)梔子水溶性有效部位組(HBZZW);巴中產(chǎn)梔子70%醇溶性有效部位組(BZZZA)、江西產(chǎn)梔子70%醇溶性有效部位組(JXZZA)、江津產(chǎn)梔子70%醇溶性有效部位組(JJZZA)、湖北產(chǎn)梔子70%醇溶性有效部位組(HBZZA)。每組動(dòng)物數(shù)均為5只。于試驗(yàn)第一日開始，給藥8個(gè)組分別插管灌胃給予相應(yīng)藥物，劑量均為2.1g/kg;Normal組插管灌胃給予等量生理鹽水。每日灌胃1次，連續(xù)3天。實(shí)驗(yàn)第四天灌胃給藥一次后30min，于家兔耳緣靜脈注射戊巴比妥鈉30mg/kg(即3%戊巴比妥鈉溶液1mL/kg)，麻醉后將動(dòng)物背位固定于手術(shù)上，去毛后開腹，于家兔膽囊中抽取膽汁［5］，測(cè)定膽汁中TBIL和CHOL含量。

2.3 檢測(cè)原理 肝膽疾病和溶血性疾病膽汁中CHOL和TBIL含量都有一定程度變化，本試劑盒能定量測(cè)定人體膽汁中二者的含量，所采用的反應(yīng)原理:TBIL 反應(yīng)原理(化學(xué)氧化法)［6］。

2.4 試驗(yàn)結(jié)果 見(jiàn)表1。結(jié)果可知，四個(gè)產(chǎn)地梔子無(wú)論是水溶性有效部位，還是70%醇溶性有效部位均具有非常顯著降低正常家兔膽汁中總膽紅素TBIL和總膽固醇CHOL含量的作用，尤其是醇溶性有效部位。

巴中產(chǎn)梔子水溶性有效部位BZZZW對(duì)正常家兔膽汁中TBIL和CHOL的含量降低作用比江西、湖北、江津產(chǎn)梔子水溶性有效部位更有優(yōu)勢(shì)，但無(wú)顯著性差異(P ＞0.05)。

巴中產(chǎn)梔子70%醇溶性有效部位BZZZA對(duì)正常家兔膽汁中TBIL和CHOL的含量降低作用比江西、湖北、江津產(chǎn)梔子70%醇溶性有效部位更有優(yōu)勢(shì)，但無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。

梔子70%醇溶性有效部位對(duì)正常家兔膽汁中TBIL和CHOL的含量降低作用優(yōu)于梔子水溶性有效部位，但是無(wú)顯著性差異(P＞0.05)?？傊畯臈d子對(duì)正常家兔膽汁中總膽紅素TBIL和總膽固醇CHOL含量降低作用的研究結(jié)果證明:巴中產(chǎn)梔子品質(zhì)更優(yōu)，治療黃疸產(chǎn)生的效果更佳。巴中產(chǎn)梔子在川產(chǎn)藥材中的臨床開發(fā)和利用方面占具優(yōu)勢(shì)。

表1 梔子提取物利膽作用結(jié)果(±s，n=5)

表1 梔子提取物利膽作用結(jié)果(±s，n=5)

注:與 Normal組比較※P ＜0.05，※※P ＜0.01，※※※P ＜0.001。

組別 給藥劑量g/kg TBIL CHOL Normal － 73.17 ±11.09 1.03 ±0.49 BZZZW 2.1 37.90 ±25.27※ 0.43 ±0.34※JXZZW 2.1 65.62 ±46.76 0.54 ±0.16※JJZZW 2.1 46.50 ±25.96※ 0.55 ±0.15※HBZZW 2.1 72.07 ±53.89 0.55 ±0.18※BZZZA 2.1 30.00 ±10.07※※※ 0.34 ±0.22※JXZZA 2.1 33.98 ±20.20※※ 0.52 ±0.20※JJZZA 2.1 45.90 ±15.99※ 0.42 ±0.39※HBZZA 2.1 32.15 ±30.19※ 0.35 ±0.14※

3 討論

3.1 研究結(jié)果表明，巴中產(chǎn)梔子提取物降低正常家兔膽汁中TBIL、CHOL的效應(yīng)與江西、江津、湖北產(chǎn)梔子的比較有進(jìn)一步降低趨勢(shì)，提示巴中梔子提取物具有明顯利膽退黃作用，在臨床上黃疸發(fā)生時(shí)，可優(yōu)選巴中產(chǎn)梔子，以達(dá)到更好的治療效果。另根據(jù)傳統(tǒng)的炮制經(jīng)驗(yàn)，臨床配方用梔子多采用烘干、麩炒、清炒等方法進(jìn)行炮制后才能入藥。故其炮制品對(duì)藥效的研究有待深入。

3.2 本研究只采用梔子提取物對(duì)正常家兔膽汁中TBIL、CHOL含量的作用進(jìn)行研究，而對(duì)梔子如何利膽退黃的機(jī)制還不夠深入。下一步有待制備溶血性黃疸、肝細(xì)胞細(xì)胞性黃疸、阻塞性黃疸、膽汁淤積型黃疸等模型，再給家兔膽總管插管形成瘺管引流膽汁，觀察梔子提取物對(duì)家兔膽汁分泌量的影響，測(cè)定家兔膽汁以及血清成分，觀察梔子提取物對(duì)黃疸模型組家兔利膽退黃的效果。

3.3 梔子本身味苦、性寒，臨床上不能大劑量長(zhǎng)時(shí)間給藥，但劑量太少給藥時(shí)間太短都會(huì)影響治療效果。本研究連續(xù)同劑量給藥四天，最后各給藥組之間結(jié)果無(wú)顯著性差異，可能與給藥時(shí)間相對(duì)過(guò)短有關(guān)。有待進(jìn)一步研究給藥劑量和給藥時(shí)間對(duì)療效的影響。

［1］徐國(guó)鈞.中草藥彩色圖譜［M］.福州:福建科學(xué)技術(shù)出版社，1989:44.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典·一部［S］.北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:231.

［3］唐燦，王子雯，孫嘉婧.多指標(biāo)綜合評(píng)價(jià)巴中產(chǎn)梔子的品質(zhì)［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18(24):115.

［4］陳明，龍子江，王靚.梔子提取物保肝利膽作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中醫(yī)藥臨床雜志，2006，18(6):610 －612.

［5］陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1994:451－454.

［6］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程·第3版［S］.南京:東南大學(xué)出版社，2006.