肖 芳，王賢英

(1．重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院，重慶 400014;2．重慶市中藥研究院，重慶 400065)

八珍袋泡茶是由黨參、白芍、白術、川芎等8味中藥組方的復 方制劑，收載于《衛(wèi)生部藥品標準·中藥成方制劑(第5冊)》，具有補氣益血的功效，可用于治療氣血兩虛、面色萎黃、食欲不振、四肢乏力、月經(jīng)過多等癥。處方中的川芎含有生物堿、酚類、有機酸、內酯類、脂肪酸、甘油酯類、萜和甾醇類等多種有效成分[1]，具有活血化瘀、行氣止痛的作用。其所含的川芎嗪為主要有效成分之一，有明顯的擴張冠脈、增加冠脈血流量、松弛血管平滑肌、降低血小板表面活性等藥理作用[2]。川芎中鹽酸川芎嗪的含量測定方法已見報道[3]。本研究中建立了八珍袋泡茶中鹽酸川芎嗪含量測定方法，旨在為八珍袋泡茶的質量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

LC－2010A型高效液相色譜儀(日本島津);AEG－45SM型十萬分之一電子分析天平(日本島津);AB265－S型分析天平(梅特勒);SK250LH型超聲儀(上?？茖С晝x器有限公司);D101大孔樹脂(天津市海光化工有限公司)。鹽酸川芎嗪對照品(中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，批號為110817－200305);八珍袋泡茶(重慶市中藥研究院制藥廠，國藥準字Z50020503，批號為 131001，131002，131003);甲醇為色譜純，甲醇、乙醇、鹽酸、氨水為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱:Diamonsil－ TM C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);柱溫:30℃;流動相:甲醇－水(48∶52);檢測波長:293 nm;流速:0．8 mL/min;進樣量:10 μL。按上述色譜條件，取鹽酸川芎嗪對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10 μL進樣，高效液相色譜圖見圖1?？梢姡幮詫φ掌啡芤涸邴}酸川芎嗪出峰時間區(qū)域無干擾峰出現(xiàn)，故對鹽酸川芎嗪的測定無干擾作用。

圖1 高效液相色譜圖

2．2 溶液制備

取鹽酸川芎嗪對照品，精密稱定8．55 mg，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度為0．342 g/L的鹽酸川芎嗪貯備液。取鹽酸川芎嗪貯備液，精密量取1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得鹽酸川芎嗪對照品溶液。取八珍袋泡茶約5．0 g，精密稱定，加10 mL熱水使溶解，將溶液加入已處理好的D101大孔樹脂柱(內徑1．5 cm，填充高度15 cm)，先用50 mL水洗脫，棄去水洗脫液;再用100 mL 90%乙醇洗脫，收集90%乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘渣加無水乙醇30 mL，放置過夜，超聲30 min，濾過，殘渣用無水乙醇按上法再提取2次，合并濾液;將濾液用2 moL/L的鹽酸甲醇溶液調節(jié)pH至1～2，置恒溫水浴50℃蒸干。加1 moL/L的鹽酸 9 mL溶解殘渣，濾過;濾液用濃氨水調pH至9～10后，再用二氯甲烷提取2次(每次10 mL);將二氯甲烷提取液用2 moL/L的鹽酸甲醇溶液調節(jié)pH至1～2，置恒溫水浴50℃蒸干;殘渣加甲醇溶解，轉移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按處方工藝取缺川芎的其他各味藥材，制成陰性對照品，再按供試品溶液制備方法同法制成陰性對照品溶液。

2．3 方法學考察

線性關系考察:取對照品溶液 2，4，6，8，10，12 μL，分別注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件測定峰面積。以對照品溶液的進樣量(X)為橫坐標、峰面積(Y)為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程 Y=2．144 9 ×106X+742．466 7，r=0．999 99(n=6)。結果表明，鹽酸川芎嗪進樣量在 0．068 4～0．410 4 μg范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗:取同一對照品溶液，連續(xù)進樣6次，每次10 μL，測定鹽酸川芎嗪峰面積。結果的 RSD為0．62%(n=6)，表明儀器精密度較好。

穩(wěn)定性試驗:依法制備供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，12，16 h時進樣，測定鹽酸川芎嗪的峰面積。結果的 RSD=1．14%(n=7)，表明供試品溶液在16 h內穩(wěn)定。

重復性試驗:取同一批號樣品(批號為131001)6份，取約5．0 g，精密稱定，依法制備供試品溶液，并按擬訂色譜條件進行測定，計算鹽酸川芎嗪含量。結果的 RSD=0．85%(n=6)，表明方法重復性良好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為131001，含量0．1714 mg/g)9份，分別精密加入對照品溶液(0．342 g/L)1．5，2．5，3．5 mL 各 3 份，按供試品溶液制備方法制備待測，并按擬訂色譜條件進行測定，計算回收率。結果見表1。

表1 鹽酸川芎嗪加樣回收試驗結果(n=9)

2．4 樣品含量測定

分別取不同批號樣品各約5．0 g，精密稱定，依法制備供試品溶液，分別進樣10 μL，在擬訂色譜條件下以外標法測定鹽酸川芎嗪的含量。結果批號為131001，131002，131003的3批樣品中，鹽酸川芎嗪的平均含量分別為 0．171 4，0．173 4，0．169 7 mg/g。

3 討論

試驗中曾用甲醇直接超聲提取樣品中鹽酸川芎嗪[2]、將樣品過D101大孔樹脂進行處理[4]、將樣品加80%乙醇回流提取[3]及將樣品用無水乙醇超聲提取[5]等方法，峰形均較差，雜質峰太多、太大，分離度較差。選用本試驗中的提取方法，獲得了較好的分離度，只是雜質峰較大，樣品峰峰高較小，有待進一步改進提取方法。

試驗中嘗試分別以甲醇－水(52∶48)[6]、甲醇－水(50∶50)、甲醇－水(30∶70)[7]、甲醇－1%醋酸水溶液(52∶48)[5]作為流動相，在擬訂的色譜條件下，鹽酸川芎嗪都有出峰，但峰形較差，與相鄰色譜峰的分離度較低，調整流動相為甲醇－水(48∶52)后，峰形較好，分離良好，且峰形對稱，重現(xiàn)性好。

本試驗成功建立了測定八珍袋泡茶中鹽酸川芎嗪含量的高效液相色譜法，該法操作簡便、準確，靈敏度高，重復性好，可用于八珍袋泡茶中鹽酸川芎嗪的含量測定。

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