裴明日，王苗苗，姜 麗

(吉林省吉林市食品藥品檢驗所，吉林 吉林 132001)

紅寶散由葛根、紅花、紫草等14味中藥制成的散劑，具有祛瘀止痛、強筋壯骨之功效[1]。該制劑為成方制劑，無含量測定方法。為有效控制藥品質(zhì)量，提高該制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，筆者采用高效液相色譜法測定葛根素的含量，結(jié)果表明，該方法準(zhǔn)確、簡便、可行，可供該制劑質(zhì)量控制參考。

1 儀器與試藥

LC-2010A型高效液相色譜儀;CLASS-VP色譜工作站;METTLER TOLEDO AG-135型電子天平。葛根素對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，純度 96．0%，批號為110752-200912);紅寶散(市售樣品，吉林市皇城股骨頭?？漆t(yī)院，批號分別為120401，120402，120403);甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱:Apollo C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動相:甲醇 -水(25 ∶75);流速:1．0 mL/min;檢測波長:250 nm;柱溫:室溫。理論板數(shù)按葛根素峰計算應(yīng)不低于4 000。

2．2 溶液制備

精密稱取葛根素對照品適量，加甲醇制成質(zhì)量濃度為0．1001g/L的溶液，即得對照品溶液[2]。取本品適量，研細(xì)，取約1．0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入30%乙醇50 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用30%乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液[2]。因?qū)嶒炇抑荒茏鲂×康臉悠罚拾刺幏搅繉⑷恿繙p量，取除葛根以外的處方中其余藥材1/10的量，依法制成散劑，再按供試品溶液制備方法，制成陰性對照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

專屬性試驗:分別精密吸取2．2項下3種溶液各5 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖1?？梢?，供試品溶液色譜中，在與對照品溶液色譜相應(yīng)位置上有相同保留時間(葛根素20．292 min)的色譜峰，陰性試驗無干擾。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密吸取對照品溶液 1，2，5，8，10 μL，注入高效液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)、進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=6 000 000 X+6 174．1，r=1．0000(n=5)。結(jié)果表明，葛根素進(jìn)樣量在 0．1001 ～1．0010μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取葛根素對照品溶液(0．100 1 g/L)，按擬訂色譜條件分別在 0，4，8，12，24 h時測定。結(jié)果的 RSD為0．8%，表明葛根素對照品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗:取同一樣品(批號為120403)共5份，依法制備供試品溶液，按擬訂方法測定。結(jié)果的 RSD為0．7%，表明該方法重現(xiàn)性較好。

精密度試驗:精密吸取葛根素對照品溶液(0．100 1 g/L)5 μL，按擬訂色譜條件重復(fù)進(jìn)樣5次測定，計算葛根素面積的 RSD為0．6%，表明儀器精密度較好。

加樣回收試驗:精密稱取已知含量的樣品(批號為120403，葛根素含量3．972 mg/g)約1 g，精密稱定，共9份，分別置具塞錐形瓶中，精密加入葛根素對照品，相當(dāng)于樣品含量的80%，100%，120%，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件測定。結(jié)果見表1。

2．4 樣品含量測定

精密稱取3個批號的樣品(每個批號2份)，依法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液與對照品溶液各5 μL，注入高效液相色譜儀，測定3批樣品中葛根素的峰面積，按外標(biāo)法計算其含量，結(jié)果批號分別為120401，120402，120403的3批樣品中葛根素含量分別為 2．983，4．207，3．972 mg/g。

表1 葛根素加樣回收試驗結(jié)果(n=9)

3 討論

3批樣品中葛根素的最高含量為4．207mg/g，最低為2．983mg/g，綜合考慮，確定限量每克含葛根素不得低于2．952 mg[3-5]。本試驗所用方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可供該制劑質(zhì)量控制參考。

[1]JLZJ-ZB-0019-2006，吉林省食品藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療機構(gòu)制劑標(biāo)準(zhǔn)[S]．

[2]國家藥典委員會．中華人民共和國藥典(一部)[M]．北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:312．

[3]江蘇新醫(yī)學(xué)院．中藥大辭典[M]．上海:上海人民出版社，1977:4 796．

[4]國家醫(yī)藥管理局中草藥情報中心站．植物藥有效成分手冊[M]．北京:人民衛(wèi)生出版社，1986:871．

[5]張 蕾，潘 楊．不同品種及產(chǎn)地的葛根中葛根素含量的比較[J]．中國中藥雜志，1995，20(7):399-400．