姜家書,謝其亮,李敦明,張春霞
(河南羚銳制藥股份有限公司,河南 新縣 465550)
通絡(luò)祛痛膏由10多味藥材及樟腦、薄荷腦、冰片輔以橡膠等基質(zhì)制成的橡膠膏劑,具有活血通絡(luò)、散寒除濕、消腫止痛的功效,主要用于腰部、膝部骨性關(guān)節(jié)病瘀血停滯、寒濕阻絡(luò)證,癥見關(guān)節(jié)刺痛或鈍痛、關(guān)節(jié)僵硬、曲伸不利、畏寒肢冷等。通絡(luò)祛痛膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中已有阿魏酸的含量測定,鑒于樟腦、薄荷腦及冰片是揮發(fā)性藥物,易于用氣相色譜(GC)法測定其含量,參照相關(guān)資料[1-3],經(jīng)氣相色譜預(yù)試,分離較好,因此可用GC法的內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行含量測定。本試驗(yàn)中采用GC法測定了通絡(luò)祛痛膏中樟腦、薄荷腦和龍腦的含量,為通絡(luò)祛痛膏的質(zhì)量控制提供了快速、準(zhǔn)確的方法。
日本島津 GC-2014型氣相色譜儀,包括 FID檢測器、AOC-20i型自動(dòng)進(jìn)樣器、GC-Solution色譜工作站;AE200型分析天平、AG135型分析天平(梅特勒-托利多<常州>稱重設(shè)備系統(tǒng)有限公司)。樟腦對(duì)照品(批號(hào)為110747-201008)、薄荷腦對(duì)照品(批號(hào)為 110728-200506)、龍腦對(duì)照品(批號(hào)為110881-200706)均由中國食品藥品檢定研究院提供;萘(上海遠(yuǎn)航化工廠,批號(hào)為040101);乙酸乙酯(天津光復(fù)科技有限公司,批號(hào)為20110426);無水硫酸鈉(洛陽化學(xué)試劑廠,批號(hào)為100914);通絡(luò)祛痛膏(河南羚銳制藥股份有限公司,批號(hào)為090628,090629,090630,100703,100704,100705,110602,110603,110604,110614)。
色譜柱:Agilent DB-WAX彈性石英毛細(xì)管色譜柱(30 m×0.32 mm,0.5 μm);檢測器:FID;載氣:高純氮?dú)?進(jìn)樣方式:分流進(jìn)樣;分流比:20∶1;進(jìn)樣量:1 μL;柱溫:140℃;進(jìn)樣口溫度:220℃;檢測器溫度:250℃。
稱取樟腦 113.19mg、薄荷腦 51.46mg、龍腦 30.18mg,置 10mL容量瓶中,用乙酸乙酯溶解稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照品貯備液。精密稱取萘265.00 mg,置25 mL容量瓶中,用乙酸乙酯溶解稀釋至刻度,搖勻,作為內(nèi)標(biāo)溶液。取本品3片,剪成窄條狀,除去蓋襯,置250 mL燒瓶中,加水100 mL,照2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅩD[4]中揮發(fā)油測定法甲法測定,自測定器上端加水至充滿刻度部分,并溢流入燒瓶時(shí)為止,再加乙酸乙酯2 mL,加熱回流提取3 h,放冷,分取乙酸乙酯液,置鋪有無水硫酸鈉的濾紙濾過,濾液置預(yù)先精密加入5 mL內(nèi)標(biāo)溶液的50 mL容量瓶中,以適量的乙酸乙酯分次洗滌冷凝管、揮發(fā)油測定器及濾器,洗滌液并入同一容量瓶中,并加乙酸乙酯稀釋至刻度,搖勻,濾過,續(xù)濾液過0.2 μm微孔濾膜,取續(xù)濾液即得供試品溶液。
精密量取對(duì)照品貯備液1 mL,置5 mL容量瓶中;另取內(nèi)標(biāo)溶液適量稀釋1倍,精密加入稀釋后的內(nèi)標(biāo)溶液1 mL,用乙酸乙酯稀釋至刻度,搖勻,進(jìn)樣,計(jì)算校正因子。
專屬性試驗(yàn):按通絡(luò)祛痛膏生產(chǎn)方法制備不含樟腦、薄荷腦和冰片的空白樣品,按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照品溶液;另取樣品制備用溶劑(乙酸乙酯)、對(duì)照品溶液和通絡(luò)祛痛膏供試品溶液各1 μL注入氣相色譜儀,在與樟腦、薄荷腦和冰片相應(yīng)色譜圖處,無色譜峰出現(xiàn),見圖1。
圖1 氣相色譜圖
線性關(guān)系考察:精密量取樟腦、薄荷腦和龍腦混合對(duì)照品貯備溶液 0.10,0.25,0.50,1.0,2.0,3.0 mL,分別置已加入 2 mL內(nèi)標(biāo)液的10 mL容量瓶中,用乙酸乙酯稀釋至刻度。按擬訂色譜條件測定,每一質(zhì)量濃度級(jí)平行進(jìn)樣3次,進(jìn)樣量1 μL。以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)、對(duì)照品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得回歸方程,樟腦 Y=0.776 3 X+0.018,薄荷腦Y=0.805X+0.008 7,龍腦 Y=0.804 7X+0.004 9,r=0.999 9。結(jié)果表明,樟腦、薄荷腦、龍腦進(jìn)樣量分別在 0.244~6.725,0.103 ~3.088,0.060 ~1.811 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。
精密度試驗(yàn):取同一供試品溶液,連續(xù)進(jìn)樣6次,分別以樟腦峰面積、薄荷腦峰面積、龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值計(jì)算 RSD。結(jié)果的 RSD 分別為 1.85%,3.17%,2.38%,表明儀器精密度良好。
穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液1 μL,分別于0,2,4,6,8,12,24 h時(shí)依法測定,分別以樟腦峰面積、薄荷腦峰面積、龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值計(jì)算 RSD。結(jié)果的 RSD分別為0.19%,0.53%,0.72%,表明供試品溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定。
重復(fù)性試驗(yàn):取同一樣品6份,按供試品制備方法制備,進(jìn)樣測定。結(jié)果每貼中樟腦、薄荷腦和龍腦含量的平均值分別為47.33,21.28,13.14 mg。結(jié)果的 RSD 分別為 1.04% ,1.40% ,1.03%,表明方法重復(fù)性良好。
加樣回收試驗(yàn):取已知含量樣品6份,每份加入對(duì)照品適量,依法制備供試品溶液,每份供試品平行進(jìn)樣2次,并測定,計(jì)算回收率及 RSD,結(jié)果見表1。
表1 樟腦、薄荷腦和龍腦加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)
取10批通絡(luò)祛痛膏樣品,依法制備供試品溶液,按擬訂方法進(jìn)樣測定,根據(jù)色譜圖的峰面積,以內(nèi)標(biāo)校正因子計(jì)算各批樣品含量。結(jié)果見表2。
表2 樣品含量測定結(jié)果(mg/貼)
文獻(xiàn)報(bào)道的關(guān)于測定樟腦、薄荷腦和龍腦等含量的GC法,有使用PEG-20M填充柱等溫測定,也有使用毛細(xì)管柱以程序升溫的方法測定,本研究中采用Agilent DB-WAX毛細(xì)管色譜柱以等溫的方式進(jìn)行測定,結(jié)果各目標(biāo)成分均達(dá)到了很好的分離,且分析時(shí)間快,有利于快速進(jìn)行產(chǎn)品的質(zhì)量控制,節(jié)省產(chǎn)品檢測周期。
近3年的通絡(luò)祛痛膏產(chǎn)品中樟腦、薄荷腦和龍腦的含量測定結(jié)果顯示,不同批次之間樟腦的含量存在一定的差異,可能與樟腦的性質(zhì)有關(guān),而另2種成分含量相差較小,表明通絡(luò)祛痛膏產(chǎn)品質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定性好。本研究中以通絡(luò)祛痛膏中活性成分樟腦、薄荷腦和龍腦為定量指標(biāo),建立了靈敏度高、重現(xiàn)性好的氣相色譜含量測定方法,為通絡(luò)祛痛膏揮發(fā)性成分的質(zhì)量控制提供了可靠方法。
[1]楊晶晶,郭堅(jiān)固,劉獻(xiàn)陽,等.GC法測定麝香祛風(fēng)濕膏中薄荷腦、丁香酚等組分的含量[J].食品與藥品,2008,10(9):51-53.
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