姜家書(shū)，謝其亮，李敦明，張春霞

(河南羚銳制藥股份有限公司，河南 新縣 465550)

通絡(luò)祛痛膏由10多味藥材及樟腦、薄荷腦、冰片輔以橡膠等基質(zhì)制成的橡膠膏劑，具有活血通絡(luò)、散寒除濕、消腫止痛的功效，主要用于腰部、膝部骨性關(guān)節(jié)病瘀血停滯、寒濕阻絡(luò)證，癥見(jiàn)關(guān)節(jié)刺痛或鈍痛、關(guān)節(jié)僵硬、曲伸不利、畏寒肢冷等。通絡(luò)祛痛膏質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中已有阿魏酸的含量測(cè)定，鑒于樟腦、薄荷腦及冰片是揮發(fā)性藥物，易于用氣相色譜(GC)法測(cè)定其含量，參照相關(guān)資料[1－3]，經(jīng)氣相色譜預(yù)試，分離較好，因此可用GC法的內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行含量測(cè)定。本試驗(yàn)中采用GC法測(cè)定了通絡(luò)祛痛膏中樟腦、薄荷腦和龍腦的含量，為通絡(luò)祛痛膏的質(zhì)量控制提供了快速、準(zhǔn)確的方法。

1 儀器與試藥

日本島津 GC－2014型氣相色譜儀，包括 FID檢測(cè)器、AOC－20i型自動(dòng)進(jìn)樣器、GC－Solution色譜工作站;AE200型分析天平、AG135型分析天平(梅特勒－托利多＜常州＞稱重設(shè)備系統(tǒng)有限公司)。樟腦對(duì)照品(批號(hào)為110747－201008)、薄荷腦對(duì)照品(批號(hào)為 110728－200506)、龍腦對(duì)照品(批號(hào)為110881－200706)均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供;萘(上海遠(yuǎn)航化工廠，批號(hào)為040101);乙酸乙酯(天津光復(fù)科技有限公司，批號(hào)為20110426);無(wú)水硫酸鈉(洛陽(yáng)化學(xué)試劑廠，批號(hào)為100914);通絡(luò)祛痛膏(河南羚銳制藥股份有限公司，批號(hào)為090628，090629，090630，100703，100704，100705，110602，110603，110604，110614)。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件

色譜柱:Agilent DB－WAX彈性石英毛細(xì)管色譜柱(30 m×0．32 mm，0．5 μm);檢測(cè)器:FID;載氣:高純氮?dú)?進(jìn)樣方式:分流進(jìn)樣;分流比:20∶1;進(jìn)樣量:1 μL;柱溫:140℃;進(jìn)樣口溫度:220℃;檢測(cè)器溫度:250℃。

2．2 溶液制備

稱取樟腦 113．19mg、薄荷腦 51．46mg、龍腦 30．18mg，置 10mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。精密稱取萘265．00 mg，置25 mL容量瓶中，用乙酸乙酯溶解稀釋至刻度，搖勻，作為內(nèi)標(biāo)溶液。取本品3片，剪成窄條狀，除去蓋襯，置250 mL燒瓶中，加水100 mL，照2010年版《中國(guó)藥典(一部)》附錄ⅩD[4]中揮發(fā)油測(cè)定法甲法測(cè)定，自測(cè)定器上端加水至充滿刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止，再加乙酸乙酯2 mL，加熱回流提取3 h，放冷，分取乙酸乙酯液，置鋪有無(wú)水硫酸鈉的濾紙濾過(guò)，濾液置預(yù)先精密加入5 mL內(nèi)標(biāo)溶液的50 mL容量瓶中，以適量的乙酸乙酯分次洗滌冷凝管、揮發(fā)油測(cè)定器及濾器，洗滌液并入同一容量瓶中，并加乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，續(xù)濾液過(guò)0．2 μm微孔濾膜，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

2．3 樣正因子測(cè)定

精密量取對(duì)照品貯備液1 mL，置5 mL容量瓶中;另取內(nèi)標(biāo)溶液適量稀釋1倍，精密加入稀釋后的內(nèi)標(biāo)溶液1 mL，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣，計(jì)算校正因子。

2．4 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):按通絡(luò)祛痛膏生產(chǎn)方法制備不含樟腦、薄荷腦和冰片的空白樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照品溶液;另取樣品制備用溶劑(乙酸乙酯)、對(duì)照品溶液和通絡(luò)祛痛膏供試品溶液各1 μL注入氣相色譜儀，在與樟腦、薄荷腦和冰片相應(yīng)色譜圖處，無(wú)色譜峰出現(xiàn)，見(jiàn)圖1。

圖1 氣相色譜圖

線性關(guān)系考察:精密量取樟腦、薄荷腦和龍腦混合對(duì)照品貯備溶液 0．10，0．25，0．50，1．0，2．0，3．0 mL，分別置已加入 2 mL內(nèi)標(biāo)液的10 mL容量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度。按擬訂色譜條件測(cè)定，每一質(zhì)量濃度級(jí)平行進(jìn)樣3次，進(jìn)樣量1 μL。以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)、對(duì)照品與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程，樟腦 Y=0．776 3 X+0．018，薄荷腦Y=0．805X+0．008 7，龍腦 Y=0．804 7X+0．004 9，r=0．999 9。結(jié)果表明，樟腦、薄荷腦、龍腦進(jìn)樣量分別在 0．244～6．725，0．103 ～3．088，0．060 ～1．811 μg 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一供試品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，分別以樟腦峰面積、薄荷腦峰面積、龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值計(jì)算 RSD。結(jié)果的 RSD 分別為 1．85%，3．17%，2．38%，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取同一供試品溶液1 μL，分別于0，2，4，6，8，12，24 h時(shí)依法測(cè)定，分別以樟腦峰面積、薄荷腦峰面積、龍腦峰面積與內(nèi)標(biāo)物峰面積的比值計(jì)算 RSD。結(jié)果的 RSD分別為0．19%，0．53%，0．72%，表明供試品溶液在 24 h 內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一樣品6份，按供試品制備方法制備，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果每貼中樟腦、薄荷腦和龍腦含量的平均值分別為47．33，21．28，13．14 mg。結(jié)果的 RSD 分別為 1．04% ，1．40% ，1．03%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取已知含量樣品6份，每份加入對(duì)照品適量，依法制備供試品溶液，每份供試品平行進(jìn)樣2次，并測(cè)定，計(jì)算回收率及 RSD，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樟腦、薄荷腦和龍腦加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2．5 樣品含量測(cè)定

取10批通絡(luò)祛痛膏樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂方法進(jìn)樣測(cè)定，根據(jù)色譜圖的峰面積，以內(nèi)標(biāo)校正因子計(jì)算各批樣品含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果(mg/貼)

3 討論

文獻(xiàn)報(bào)道的關(guān)于測(cè)定樟腦、薄荷腦和龍腦等含量的GC法，有使用PEG－20M填充柱等溫測(cè)定，也有使用毛細(xì)管柱以程序升溫的方法測(cè)定，本研究中采用Agilent DB－WAX毛細(xì)管色譜柱以等溫的方式進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果各目標(biāo)成分均達(dá)到了很好的分離，且分析時(shí)間快，有利于快速進(jìn)行產(chǎn)品的質(zhì)量控制，節(jié)省產(chǎn)品檢測(cè)周期。

近3年的通絡(luò)祛痛膏產(chǎn)品中樟腦、薄荷腦和龍腦的含量測(cè)定結(jié)果顯示，不同批次之間樟腦的含量存在一定的差異，可能與樟腦的性質(zhì)有關(guān)，而另2種成分含量相差較小，表明通絡(luò)祛痛膏產(chǎn)品質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定性好。本研究中以通絡(luò)祛痛膏中活性成分樟腦、薄荷腦和龍腦為定量指標(biāo)，建立了靈敏度高、重現(xiàn)性好的氣相色譜含量測(cè)定方法，為通絡(luò)祛痛膏揮發(fā)性成分的質(zhì)量控制提供了可靠方法。

[1]楊晶晶，郭堅(jiān)固，劉獻(xiàn)陽(yáng)，等．GC法測(cè)定麝香祛風(fēng)濕膏中薄荷腦、丁香酚等組分的含量[J]．食品與藥品，2008，10(9):51－53．

[2]張華林，李宗悟，楊學(xué)斌，等．氣相色譜法測(cè)定通立康膏中樟腦、異龍腦、龍腦、桂皮醛、丁香酚的含量[J]．中藥新藥與臨床藥理，2005，16(1):61－63．

[3]劉 杰，董文玲．4種中藥橡膠劑中樟腦薄荷腦冰片和水楊酸甲酯含量的氣相色譜法測(cè)定[J]．中成藥，2004，26(10):795－798．

[4]中國(guó)藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M]．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄8．