汪濤胡衛(wèi)東劉一佳李育芳曾凡波

(1.解放軍武漢療養(yǎng)院，430074；2.第二炮兵指揮學(xué)院訓(xùn)練部，430012；3.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，430030)

川丹通脈片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

汪濤1胡衛(wèi)東1劉一佳2李育芳1曾凡波3

(1.解放軍武漢療養(yǎng)院，430074；2.第二炮兵指揮學(xué)院訓(xùn)練部，430012；3.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，430030)

目的 建立川丹通脈片的質(zhì)量控制方法。方法 用TLC法對(duì)川芎、丹參進(jìn)行定性鑒別；HPLC法測(cè)定川丹通脈片中丹參所含丹參素鈉的量，選用Nova-pak ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-0.5%磷酸二氫鉀溶液(0.1%磷酸溶液調(diào)pH至4.0，15∶85)檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm。結(jié)果 TLC檢出了川芎、丹參特征斑點(diǎn)，丹參素鈉檢測(cè)濃度在10.0～100.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系(r＝1.00)，加樣回收率為98.58%，RSD為0.74%。結(jié)論 質(zhì)量控制方法簡(jiǎn)便、穩(wěn)定、可靠，可作為本品的質(zhì)量控制方法。

川丹通脈片；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；高效液相色譜法；薄層色譜法

川丹通脈片為解放軍武漢療養(yǎng)院研制開(kāi)發(fā)的純中藥制劑，于2011年取得軍隊(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑臨床研究批準(zhǔn)文號(hào)：廣L2011001，具有活血化瘀，祛痰開(kāi)竅，擴(kuò)張血管、增進(jìn)心腦動(dòng)脈血流量的作用。用于治療心絞痛，心肌梗死，腦血栓，腦卒中后的偏癱，失語(yǔ)，口眼歪斜，頭痛頭暈等癥。為更好地控制產(chǎn)品質(zhì)量，對(duì)川芎、丹參兩味藥材進(jìn)行了薄層色譜鑒別，并采用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)方中丹參所含丹參素鈉進(jìn)行了含量測(cè)定，為該制劑建立完善的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)?，F(xiàn)總結(jié)如下。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20A高效液相色譜儀(SPD-M20A紫外-可見(jiàn)光檢測(cè)器，SIL-20AC自動(dòng)進(jìn)樣器，CTO-20AC柱溫箱)；電子天平(CP225D，1/10萬(wàn))；KQ-500B型超聲波清洗器(江蘇省昆山市超聲儀器有限公司)。

丹參素鈉對(duì)照品(供含量測(cè)定用，批號(hào)：110855-200508)、丹參酮ⅡA對(duì)照品(批號(hào)：110766-200214)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。川丹通脈片 (批號(hào)為：130114、130221、130310、130403、130517)由解放軍武漢療養(yǎng)院提供。硅膠H薄層板、硅膠G薄層板均由青島海洋化工廠分廠提供。乙腈(色譜純，美國(guó)Fisher公司)；水為純水機(jī)凈化水(純水機(jī)型號(hào)Millipore Milli-Qbiocel型純水器)。其余試劑均為分析純。

2 薄層色譜鑒別

2.1 川芎 取本品20片，研細(xì)，稱(chēng)取2 g，加乙醚20 mL，加熱回流1 h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品(樣品)溶液。另取川芎對(duì)照藥材0.3 g，同法制成對(duì)照品溶液。再取缺川芎的模擬片20片，按供試品(樣品)溶液制備法制備陰性液。照薄層色譜法[1]附錄(ⅥB)34試驗(yàn)，吸取上述3種溶液各10 μL分別點(diǎn)于同一硅膠G254薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯(3∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，晾干，置紫外燈(254 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的一個(gè)熒光主斑點(diǎn)，陰性液無(wú)此斑點(diǎn)[2]。

2.2 丹參 取本品20片，研碎，稱(chēng)取粉末4 g，加乙醚5 mL，振搖，放置1 h，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴? mL使溶解，作為供試品(樣品)溶液。另取丹參酮ⅡA對(duì)照品，加乙酸乙酯制成1 mL含2 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。再取缺丹參的模擬片20片，按供試品(樣品)溶液制備法制備陰性液。照薄層色譜法[1]附錄(ⅥB)34試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5 μL分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(4∶1)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗紅色斑點(diǎn)[3]。

3 丹參素鈉的測(cè)定[4]

3.1 對(duì)照品溶液的制備 取丹參素鈉對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成濃度為50.0 μg/mL的溶液，搖勻，即得。

3.2 供試品溶液的制備 取本品20片，研碎置分液漏斗中，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50 mL，密塞，稱(chēng)重，超聲處理30 min，放冷，再稱(chēng)重，用上述溶劑補(bǔ)足失重，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

3.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方比例及工藝條件制備缺丹參的陰性樣品，按“3.2”項(xiàng)下方法制備陰性對(duì)照溶液。

3.4 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Nova-pak ODS(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-0.5%磷酸二氫鉀溶液(0.1%磷酸溶液調(diào)pH至4.0，15∶85)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；進(jìn)樣量：10 μL。理論塔板數(shù)按丹參素鈉峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。在上述色譜條件下取丹參素鈉對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液各10 μL進(jìn)樣，結(jié)果表明樣品中其他成分對(duì)丹參素鈉的測(cè)定無(wú)干擾。色譜(圖1)。

3.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱(chēng)取丹參素鈉對(duì)照品5.0 mg，置25 mL量瓶中，加50%甲醇溶解并稀釋至刻度。精密吸取上述溶液0.5、1、1.5、2、3、5 mL，置10 mL量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻。按上述色譜條件取10 μL進(jìn)樣，記錄色譜圖。以檢測(cè)濃度(X)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y＝12.127X－17.331(r＝1.00)。結(jié)果表明，丹參素鈉檢測(cè)濃度在10.0～100.0 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

圖1 高效液相色譜圖

3.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液，按照上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果，RSD＝0.89%，表明儀器精密度良好。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同批次樣品，按照“3.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，測(cè)定并計(jì)算其含量。結(jié)果，丹參素鈉平均含量為2.05 mg/粒，RSD＝2.04%，表明方法重復(fù)性良好。

3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，于室溫下放置，在不同時(shí)間段(0、2、4、8、16、24、48 h)按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果，RSD＝1.93%，表明供試品溶液在48 h穩(wěn)定性良好。

3.9 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含丹參素鈉為2.01 mg的6份川丹通脈片研碎細(xì)粉，分別精密加入不同質(zhì)量的丹參素鈉對(duì)照品，每個(gè)質(zhì)量平行2份，按照“3.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定并計(jì)算其含量和加樣回收率，結(jié)果(表1)。

3.10 樣品含量測(cè)定 取5批樣品，分別按照“3.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定并計(jì)算其含量，結(jié)果(表2)。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

4 討論

本制劑中丹參是經(jīng)水提取干燥后制成片劑，因此用超聲提取方法進(jìn)行含量測(cè)定操作簡(jiǎn)便，經(jīng)與回流提取比較，提取效果無(wú)差別；提取溶劑選擇了提取效果較好的50%乙醇。

采用薄層色譜法對(duì)川丹通脈片中川芎、丹參兩味藥材進(jìn)行鑒別，并采用高效液相色譜法對(duì)方中丹參所含丹參素鈉進(jìn)行含量測(cè)定，方法簡(jiǎn)便，專(zhuān)屬性、重復(fù)性好，且結(jié)果穩(wěn)定[5]，可用于川丹通脈片的質(zhì)量控制。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[Z].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]張永玲.冠心康膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2010，8(5)：44-46.

[3]崔淑云，王登旭.益肝康口服液的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)藥房，2008，19(3)：192.

[4]李華，李明，鐘雪梅，等.復(fù)方心安軟膠囊質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中國(guó)藥房，2010，21(11)：1027-1029.

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2013-08-12)

1005-619X(2014)03-0235-02

10.13517/j.cnki.ccm.2014.03.026