北京市藥品檢驗(yàn)所（100035）孫圓媛

1 前言

阿奇霉素為15元大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，是由紅霉素進(jìn)一步合成而得。阿奇霉素在稀酸中易溶，在水中幾乎不溶[1]，故在生產(chǎn)過程中選用酸性物質(zhì)作為其助溶劑。由于抗生素藥物生產(chǎn)技術(shù)復(fù)雜且不易控制，異物污染可能性較大，多數(shù)不穩(wěn)定，分解產(chǎn)物的帶入使其藥效降低，無效或有毒性。生產(chǎn)過程中易混入組胺、腐胺、尸胺及其他降壓物質(zhì)。因而除各國藥典均規(guī)定的注射劑常規(guī)檢查外，還應(yīng)進(jìn)行降壓物質(zhì)檢查，以確保臨床安全用藥[2]。

枸櫞酸為注射用阿奇霉素的助溶劑。截至目前，國內(nèi)尚無法定的無菌枸櫞酸的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，所以使用無菌枸櫞酸的企業(yè)，幾乎都是通過借鑒無菌粉生產(chǎn)的通用規(guī)定對(duì)普通藥用級(jí)別的枸櫞酸進(jìn)行處理，使其無菌，熱原項(xiàng)指標(biāo)符合無菌粉針劑的相應(yīng)要求[3]。因枸櫞酸酸性較強(qiáng)，且它同時(shí)也是一種鈣離子螯合劑[4]，高濃度下能完全結(jié)合去除細(xì)胞外的Ca2+，從而對(duì)血壓造成一定程度的影響，因此在試驗(yàn)中有必要對(duì)枸櫞酸進(jìn)行降壓物質(zhì)檢查。

降壓物質(zhì)檢查法系比較組胺對(duì)照品（S）與供試品（T）引起麻醉貓血壓下降的程度，以判定供試品中所含降壓物質(zhì)的限度是否符合規(guī)定。針對(duì)原料藥做降壓物質(zhì)檢查不僅可以從源頭把關(guān)而且對(duì)之后制劑生產(chǎn)有重要意義。同時(shí)對(duì)助溶劑（輔料）進(jìn)行降壓物質(zhì)檢查，可為生產(chǎn)企業(yè)開發(fā)此類品種選擇合適的助溶劑提供依據(jù)和借鑒，并為臨床安全用藥提供保障。由此我們采用《中國藥典》2010年版中降壓物質(zhì)檢查法對(duì)該品種進(jìn)行試驗(yàn)。在劑量設(shè)計(jì)過程中，我們參考“注射用阿奇霉素”的國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定劑量：2000IU/kg，和“注射用阿奇霉素”的最大臨床用量：0.5g/60kg，先進(jìn)行預(yù)試。從預(yù)試中可確定該原料藥是否與其制劑的國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定降壓物質(zhì)檢查的劑量一致。最后依據(jù)預(yù)試結(jié)果對(duì)三批阿奇霉素和枸櫞酸進(jìn)行試驗(yàn)，以確保在該劑量下所引起麻醉貓降壓幅度均小于對(duì)照品所引起的降壓幅度，根據(jù)結(jié)果可以確定注射用阿奇霉素引起降壓的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。

附圖1 批號(hào)： 120801 劑量：8000 IU/kg

附圖2 批號(hào)：120801 劑量：4000 IU/kg

附圖3 批號(hào)： 120801 劑量：2000 IU/kg

附圖4 批號(hào)： 120801 劑量：1000 IU/kg

附圖5 批號(hào)： 120801

附圖6 批號(hào)： 120802

附圖7 批號(hào)： 120803

附圖8 批號(hào)：20121001 劑量：4.2mg/kg

2 實(shí)驗(yàn)材料

2.1 供試品

2.1.1 原料藥 阿奇霉素；北京太陽藥業(yè)有限公司；批號(hào)：120801，120802，120803；規(guī)格：原料，類白色結(jié)晶性粉末；貯藏：室溫保存。

2.1.2 助溶劑：枸櫞酸；生產(chǎn)廠家：湖南爾康制藥有限公司；批號(hào)：20121001，20121005，20121007。

2.2 試劑及配制

2.2.1 苯巴比妥鈉注射液 批號(hào)：0605111；單位：天津金耀化學(xué)氨基酸有限公司。

2.2.2 戊巴比妥鈉 批號(hào)：WS20050411；生產(chǎn)單位：批號(hào)：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；稱取戊巴比妥鈉0.10g，加注射用水10ml配成1%溶液。

2.2.3 氯化鈉注射液 批號(hào)：120412403；生產(chǎn)單位：石家莊四藥有限公司。

2.2.4 肝素鈉溶液 批號(hào)：120218；常州千紅生化制藥股份有限公司；規(guī)格：2ml：12500單位；用時(shí)加氯化鈉注射液配成100 IU/ml的溶液。

2.3.5 組胺對(duì)照品溶液的配制 精密稱取磷酸組胺對(duì)照品適量，按組胺計(jì)算，加水溶解使成每1ml中含1.0mg的溶液，分裝于適宜的容器內(nèi)，4℃～8℃貯存，如無沉淀析出,可在3個(gè)月內(nèi)使用。

2.3.6 對(duì)照品稀釋液的配制 臨用前，精密量取組胺對(duì)照品溶液適量，用氯化鈉注射液配成每1ml中含組胺0.5μg的稀釋液。

2.3.7 滅菌注射用水 批號(hào)：12060431 生產(chǎn)廠家：天津藥業(yè)焦作制藥有限公司。

2.3 主要儀器及用具

2.3.1 天平 型號(hào)BS 224S；生產(chǎn)單位：梅特勒－托利多（上海）有限公司。

2.3.2 多導(dǎo)生理記錄儀 型號(hào)DC－120H；生產(chǎn)單位：日本光電工業(yè)株式會(huì)社。

2.3.3 其他用具 注射器、吸管、移液管、容量瓶、測(cè)量尺、三通開關(guān)、脫脂棉、線繩、手術(shù)器械。

2.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康無傷、體重2kg以上的貓，雌雄均可，雌者無孕。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 劑量設(shè)計(jì)

3.1.1 阿奇霉素劑量設(shè)計(jì) 阿奇霉素為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，屬于原料藥。我們根據(jù)《中國藥典》2010年版一部附錄ⅩⅧ B中降壓物質(zhì)檢查設(shè)定限值[6]和“注射用阿奇霉素”的最大臨床用量（0.5g/60kg），同時(shí)參照其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-296)-2003Z）制定試驗(yàn)劑量，選擇系列劑量為8000單位/kg、4000單位/kg、2000單位/kg、1000單位/kg，進(jìn)行試驗(yàn)。

3.1.2 枸櫞酸劑量設(shè)計(jì) 枸櫞酸為注射用阿奇霉素的助溶劑，屬于輔料。根據(jù)“注射用阿奇霉素”制劑處方中阿奇霉素與枸櫞酸的比例，可知枸櫞酸的最大人用量為2.1mg/kg。我們按《中國藥典》2010年版一部附錄ⅩⅧ B中降壓物質(zhì)檢查設(shè)定限值[6]，同時(shí)參照預(yù)試驗(yàn)劑量進(jìn)行降壓物質(zhì)檢查試驗(yàn)。選擇系列劑量為4.2mg/kg、1.05mg/kg、0.5mg/kg進(jìn)行試驗(yàn)。

附圖9 批號(hào)：20121001 劑量：1.05mg/kg

附圖10 批號(hào)：20121001 劑量：0.5mg/kg

附圖11 批號(hào)：20121001

附圖12 批號(hào)：20121005

附圖13 批號(hào)：20121007

3.2 試驗(yàn)方法 取上述動(dòng)物，選用1%戊巴比妥鈉（1ml/kg）和10%苯巴比妥鈉（1ml/kg），1∶1混合腹腔注射麻醉后，按照《中國藥典》2010年版二部附錄Ⅺ G降壓物質(zhì)檢查的方法進(jìn)行檢驗(yàn)，將阿奇霉素用枸櫞酸稀釋成4萬單位/ml、2萬單位/ml、1萬單位/ml、5000單位/ml系列濃度（溶液中阿奇霉素和枸櫞酸的比例與 “注射用阿奇霉素”制劑處方中阿奇霉素與枸櫞酸的比例一致），注入體積0.2ml/kg 。將枸櫞酸用注射用水稀釋成4.2mg/ml、1.05mg/ml、0.5mg/ml系列濃度，注入體積1.0ml/kg。將供試品降壓幅度與磷酸組胺對(duì)照品降壓幅度進(jìn)行比較。

4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

4.1 阿奇霉素降壓物質(zhì)檢查試驗(yàn)

4.1.1 預(yù)試試驗(yàn)結(jié)果 血壓圖譜見附圖1～4。預(yù)試驗(yàn)結(jié)果表明：阿奇霉素在8000單位/kg和4000單位/kg的劑量下，貓血壓的下降幅度均超過對(duì)照品所致的血壓下降；在2000單位/kg的劑量下，引起的貓血壓下降幅度均未超過對(duì)照品所致的血壓下降；在1000單位/kg的劑量，貓血壓下降幅度均未超過對(duì)照品所致的血壓下降的一半。

4.1.2 正式試驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果提示，阿奇霉素的劑量規(guī)定為：2000 IU/kg，對(duì)三批供試品進(jìn)行降壓物質(zhì)檢查試驗(yàn)，血壓圖譜見附圖5～7。結(jié)果表明，將阿奇霉素的劑量規(guī)定為：2000 IU/kg進(jìn)行降壓物質(zhì)檢查，結(jié)果三批阿奇霉素引起貓血壓下降幅度均低于對(duì)照品所致血壓下降幅度，符合《中國藥典》2010年版二部的有關(guān)規(guī)定。

4.1.3 分析 試驗(yàn)結(jié)果表明：阿奇霉素以2000單位/kg劑量，按照《中國藥典》2010年版二部附錄Ⅺ G降壓物質(zhì)檢查，結(jié)果3批樣品降壓幅度均未超過磷酸組胺對(duì)照品所致血壓下降幅度，此劑量與“注射用阿奇霉素”的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1－(X－296)－2003Z）中規(guī)定的降壓物質(zhì)檢查劑量相同。此劑量為“注射用阿奇霉素”最大人用量的1/4。

4.2 枸櫞酸降壓物質(zhì)檢查試驗(yàn)4.2.1 預(yù)試試驗(yàn)結(jié)果 預(yù)試血壓圖譜見附圖8～10。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：枸櫞酸在4.2mg/kg和1.05mg/kg的劑量下，引起的貓血壓下降幅度均超過對(duì)照品所致的血壓下降；在0.5mg/kg的劑量下，引起的貓血壓下降幅度均未超過對(duì)照品所致的血壓下降。

4.2.2 正式試驗(yàn)試驗(yàn)結(jié)果 將枸櫞酸的劑量規(guī)定為：0.5mg/kg，對(duì)三批供試品進(jìn)行降壓物質(zhì)檢查試驗(yàn)，血壓圖譜見附圖11～13。結(jié)果表明：枸櫞酸在0.5mg/kg劑量下時(shí)，3批枸櫞酸引起貓血壓下降幅度均低于磷酸組胺對(duì)照品所致血壓下降幅度。

4.2.3 分析 試驗(yàn)結(jié)果表明：枸櫞酸以0.5mg/kg劑量，按照《中國藥典》2010年版二部附錄Ⅺ G降壓物質(zhì)檢查，結(jié)果3批樣品降壓幅度均未超過磷酸組胺對(duì)照品所致血壓下降幅度，此劑量為“注射用阿奇霉素”在最大人用量時(shí)，所含枸櫞酸量的1/4。

4 結(jié)論與討論

4.1 結(jié)論 阿奇霉素（枸櫞酸溶解）在2000IU/kg（1萬IU/ml,0.2ml/kg）劑量時(shí)降壓物質(zhì)檢查符合規(guī)定；枸櫞酸 在0.5mg/kg（0.5mg/ml,1.0ml/kg）劑量時(shí)降壓物質(zhì)檢查符合規(guī)定?？梢猿醪酱_定阿奇霉素的降壓作用主要是由枸櫞酸助溶劑引起的。

4.2 討論 阿奇霉素作為新一代大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，其抗菌效果明顯，但由于生產(chǎn)過程不當(dāng)易混入組胺、腐胺、尸胺及其它降壓物質(zhì)，需要對(duì)其進(jìn)行降壓物質(zhì)檢查。枸櫞酸作為該原料藥注射用的助溶劑，其酸性較強(qiáng)且本身是一種Ca2+螯合劑對(duì)血壓有一定影響，因而也需要單獨(dú)對(duì)其進(jìn)行降壓物質(zhì)檢查。

我們根據(jù)《中國藥典》2010年版一部附錄ⅩⅧ B中降壓物質(zhì)檢查限值，參照其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-(X-296)-2003）以及“注射用阿奇霉素”制劑處方中阿奇霉素與枸櫞酸的比例制定試驗(yàn)劑量。通過預(yù)試及正式試驗(yàn)，分別對(duì)三批樣品進(jìn)行降壓物質(zhì)檢查，確定出樣品降壓幅度小于組胺對(duì)照品所致血壓下降幅度的劑量，阿奇霉素為2000IU/kg，此劑量與“注射用阿奇霉素” 國家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢查的劑量一致，相當(dāng)人用阿奇霉素最大量的1/4。枸櫞酸為0.5mg/kg，此劑量相當(dāng)于枸櫞酸最大人用量的1/4倍。

由于枸櫞酸是一種鈣離子螯合劑本身對(duì)血壓有一定影響，而阿奇霉素在稀酸中易溶，在水中幾乎不溶。通過本次試驗(yàn)可以推斷出：注射用阿奇霉素產(chǎn)生的降壓反應(yīng)主要是來自于枸櫞酸輔料。由于枸櫞酸自身具有引起血壓下降的藥理特性，輔料是否合理，劑量如何把握，都是有待解決的問題。嘗試選擇刺激性小，使用更安全，更穩(wěn)定的助溶劑，降低藥物的不良發(fā)應(yīng)，以確保人民的用藥安全。本試驗(yàn)為合理使用抗生素及助溶劑的選擇問題提供借鑒。