陳丹丹，張 甦，于 泓，孫 健，胡 青，劉紹勇，季 申*

(1.中國醫(yī)藥工業(yè)研究總院上海醫(yī)藥工業(yè)研究院，上海 200040;2.上海市食品藥品檢驗(yàn)所，上海 201203;3.上海凱寶藥業(yè)股份有限公司，上海 201401)

中藥注射劑改變了傳統(tǒng)中藥給藥途徑，克服了中藥起效慢的弱點(diǎn)，在臨床中取得了良好的治療效果。但隨著應(yīng)用范圍的擴(kuò)大，其引發(fā)的不良反應(yīng)也備受關(guān)注［1-2］。目前相關(guān)研究對(duì)引發(fā)不良反應(yīng)的原因尚未有確切結(jié)論，從臨床報(bào)道的不良反應(yīng)來看，大多為速發(fā)型過敏反應(yīng)［3-4］。有研究表明注射劑中存在的高分子活性物質(zhì)如蛋白質(zhì)在進(jìn)入人體血液中易形成半抗原，容易引發(fā)過敏反應(yīng)［5］。為保證注射劑安全性，需要建立準(zhǔn)確高效的分析方法對(duì)注射劑中微量蛋白進(jìn)行檢測。

目前中藥注射劑中蛋白的檢測方法主要依據(jù)《中國藥典》2010年版一部附錄IX S有關(guān)物質(zhì)檢查法中蛋白質(zhì)的檢查項(xiàng)，該方法執(zhí)行過程中，假陽性、誤檢漏檢等問題突出，無法有效控制注射劑的安全性，急需開發(fā)專屬性強(qiáng)、靈敏度高的替代方法。

痰熱清注射液具有清熱、解毒、化痰的功效，近年來其臨床應(yīng)用的療效受到廣泛認(rèn)可［6］，同時(shí)也存在不良反應(yīng)問題［7］。分析其處方包括三味植物藥和兩味動(dòng)物藥，易產(chǎn)生動(dòng)物或植物來源蛋白等抗原性雜質(zhì)。而應(yīng)用現(xiàn)行有關(guān)物質(zhì)蛋白質(zhì)檢查時(shí)，易產(chǎn)生假陽性情況，存在一定典型性。本研究以痰熱清注射液為模板，對(duì)蛋白質(zhì)檢查方法進(jìn)行了探索，建立了適用性好、通用性強(qiáng)的蛋白檢測方法，可廣泛應(yīng)用于中藥注射劑的相關(guān)檢查。同時(shí)對(duì)工藝中間體中蛋白進(jìn)行研究，可以從生產(chǎn)工藝的角度，為研究和解決中藥注射劑的安全性問題提供參考和依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Mini-PROTEAN Tetra Electrophoresis System(美國Bio-Rad公司);凝膠成像系統(tǒng) (美國 Bio-Rad公司);Mini-PROTEAN TGX Precast Gels(美國Bio-Rad公司);高速冷凍離心機(jī) (德國Hettich 200R);Agilent 1290 Infinity高效液相色譜儀，Agilent 6550 iFunnel Q-TOF質(zhì)譜儀 (美國Agilent公司);HLB固相萃取小柱 (6 mL/200 mg，Waters公司);Sartorius stedim Vivaspin6(超濾濃縮離心管，5000 Da MWCO，德國Sartorius公司);Bio-spin P-6 gel columns(凝膠小柱，又稱凝膠滲透預(yù)裝柱，截留 6000 MW limit，美國 Bio-Rad公司)。

1.2 試劑與試藥 通用型蛋白沉淀試劑 ［含沉淀試劑 (一)、沉淀試劑 (二)，上海生工生物工程公司BSP012］;牛血清白蛋白 (BSA)(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)140619-200415);SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳低相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì) (中國科學(xué)院上海生物化學(xué)研究所);痰熱清注射液成品 (有效期內(nèi)和過期樣品共計(jì)15批)及處方 (黃芩、金銀花、連翹、山羊角、熊膽粉)工藝中間體 (包括制備工藝各關(guān)鍵步驟產(chǎn)物)，由上海凱寶藥業(yè)股份有限公司提供;其余試劑均為色譜純，來自MERCK公司。

2 方法

2.1 樣品選取 實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象首先選擇痰熱清注射液成品，包括有效期內(nèi)和過期樣品，以全面控制該品種應(yīng)用安全性，并比較存放時(shí)間對(duì)于注射劑中蛋白的影響。其次，還針對(duì)注射劑各工藝中間體中的蛋白進(jìn)行研究，以探尋工藝制法對(duì)蛋白存在的影響，從而有效指導(dǎo)注射劑生產(chǎn)關(guān)鍵步驟，從生產(chǎn)環(huán)節(jié)把控注射劑安全性。增加工藝中間體中蛋白的研究，也可作為方法陽性樣品的補(bǔ)充，以充分驗(yàn)證方法的可行性。

2.2 樣品前處理方法 目前文獻(xiàn)報(bào)道的蛋白前處理方法大致分為沉淀純化和分離純化，基本依據(jù)蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量大小、電荷差異和疏水性等特性。中藥注射液中蛋白質(zhì)具有微量、未知的特點(diǎn)，且主成分對(duì)蛋白分離干擾作用明顯，經(jīng)過綜合分析可行性和前期預(yù)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)主要針對(duì)沉淀法、超濾法、凝膠小柱及HLB固相萃取柱進(jìn)行了研究，均以十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)為檢測手段，對(duì)不同前處理方法的 效果進(jìn)行比較，見圖1。

圖1 蛋白前處理技術(shù)路線圖Fig.1 Technical routes of protein pre-treatment

2.2.1 沉淀純化法 沉淀純化法是一種廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)的富集和提取的方法，其優(yōu)勢在于富集蛋白的同時(shí)可有效除去干擾成分，主要包括鹽析與有機(jī)溶劑沉淀等方法［8］。常用的有機(jī)溶劑包括乙腈和丙酮，在前期的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)由于注射液中所含鹽類成分較多，乙腈加入后出現(xiàn)分層的現(xiàn)象，無法應(yīng)用。商品化沉淀試劑由蛋白沉淀試劑 (一)、蛋白沉淀試劑 (二)組成，為通用型蛋白沉淀試劑，與有機(jī)溶劑沉淀比較，可以實(shí)現(xiàn)低濃度蛋白的濃縮和沉淀，去除鹽類等多種雜質(zhì)，適合中藥注射液中微量蛋白的測定，操作簡便。本實(shí)驗(yàn)分別對(duì)丙酮試劑沉淀和商品化蛋白沉淀兩種方法進(jìn)行了考察。

2.2.1.1 丙酮法 取注射液及中間體5 mL，加入5倍體積丙酮 (4℃預(yù)先放冷過夜)，混勻，置于－18℃冰箱放置24 h后取出，4℃離心 (7800 r/min)15 min，去除上清液，待沉淀揮干后，加1 mL水使溶解，制得供試品溶液。

2.2.1.2 沉淀試劑法 取注射液及中間體100 μL，加入蛋白沉淀試劑 (一)300 μL，渦旋30 s，4℃放置10 min，再加入蛋白沉淀試劑 (二)300 μL，渦旋30 s，4℃ 放置15 min，于4℃離心 (14000 r/min)15 min，取出后用槍頭盡可能去除上清液，保留沉淀，再加入600 μL乙醚和乙醇混合液(1∶1，V/V)，震蕩后4℃放置10 min，再離心15 min，去除上清液，得蛋白沉淀，最終沉淀物用30 μL水溶解，制得供試品溶液。

2.2.2 分離純化法 分離純化法主要利用分子篩原理和固相萃取兩種手段進(jìn)行分離提取。根據(jù)分子篩原理的方法包括超濾和透析［9］，由于透析法前處理時(shí)間長，收率低，僅選取超濾法作為該手段的典型方法進(jìn)行研究。對(duì)于固相萃取法，由于中藥注射劑中蛋白具有未知的特點(diǎn)，無法使用特異性離子交換柱進(jìn)行處理，所以重點(diǎn)考察了凝膠小柱及反相固相萃取柱。

2.2.2.1 超濾法 取痰熱清注射液5 mL，置于超濾離心管中 (截流分子量為5000 Da)，離心(12000 r/min)60 min，取上層截留液1 mL，作為供試品溶液。

2.2.2.2 凝膠小柱法 取注射液及中間體100 μL采用bio-rad凝膠小柱對(duì)微量蛋白進(jìn)行富集除雜，操作過程取樣品100 μL上樣，將凝膠小柱在2000 r/min條件下離心4 min，取離心所得溶液作為供試品溶液。

2.2.2.3 HLB柱結(jié)合沉淀試劑法 依次用6 mL甲醇、6 mL水活化HLB柱，取注射液5 mL上樣，用10%甲醇3 mL洗脫，收集上樣后流出液及10%甲醇洗脫液混合，取上述混合液100 μL，用蛋白沉淀試劑沉淀，最終沉淀物用30 μL水溶解，作為供試品溶液。

2.3 檢測方法 蛋白檢測采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳 (SDS-PAGE)，取供試品溶液與供試品緩沖液 (3∶1)混合，于100℃水浴加熱5 min，取10 μL上樣。采用4% ～20%梯度膠分離，以SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳低相對(duì)分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)(相對(duì)分子質(zhì)量14400～97400 Da)為標(biāo)準(zhǔn)物，針對(duì)凝膠電泳的顯色和凝膠濃度進(jìn)行了相應(yīng)考察。

2.3.1 顯色方法 目前常用的染色方法為R250考馬斯亮藍(lán)染色及銀染法，實(shí)驗(yàn)對(duì)兩種顯色方法進(jìn)行了比較［10］。從檢測靈敏度看，銀染法遠(yuǎn)高于考染法，更適合注射劑中微量蛋白的檢測，故采用銀染作為顯色方法。

2.3.2 凝膠濃度考察 研究比較了12%等度膠與4%～20%梯度膠的分離效果，結(jié)果標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)中低相對(duì)分子質(zhì)量蛋白 (14400Da)在12%等度膠上的條帶接近樣品前沿，容易造成誤判;而4%～20%梯度膠上的斑點(diǎn)分布均勻，樣品前沿不存在干擾，適合該注射劑測定 (見圖2、圖3)。

圖2 12%等度膠電泳圖Fig.2 Electrophoresis of 12%gel

圖3 4%～20%梯度膠電泳圖Fig.3 Electrophoresis of 4%－20%gel

3 結(jié)果

3.1 前處理方法比較

3.1.1 沉淀純化法 丙酮沉淀對(duì)痰熱清注射液中干擾成分的去除有一定效果，但方法靈敏度低，沉淀時(shí)間長，且處理后樣品仍有較多雜質(zhì)，導(dǎo)致電泳銀染背景顏色深，干擾嚴(yán)重。

商品化沉淀試劑與丙酮法相比，操作簡便，沉淀時(shí)間明顯縮短，同時(shí)有效去除雜質(zhì)，靈敏度顯著提高，可用于注射液中間體處理。對(duì)痰熱清注射液處理后仍存少量雜質(zhì)干擾，銀染后在凝膠電泳前沿部分容易出現(xiàn)淺黃色背景，對(duì)結(jié)果判斷造成干擾，見圖4，因此需對(duì)該方法進(jìn)一步優(yōu)化。

圖4 經(jīng)商品化沉淀試劑處理的樣品電泳圖Fig.4 Electrophoresis of sample solutions with preparation by protein precipitation reagent

3.1.2 分離純化法 超濾是蛋白富集的常用方法，實(shí)驗(yàn)嘗試采用超濾法對(duì)樣品處理，結(jié)果超濾后上層截留液仍較多，且溶液黏度較大，雜質(zhì)去除效果不明顯。凝膠小柱法對(duì)注射液中干擾成分的去除有較好的效果，但在加樣試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，凝膠小柱對(duì)微量蛋白有吸附作用，不宜用于注射液中微量蛋白的檢測。

實(shí)驗(yàn)曾嘗試僅采用HLB柱對(duì)蛋白富集除雜，但效果欠佳，最終選用HLB柱結(jié)合沉淀法，即在商品化沉淀試劑基礎(chǔ)上，結(jié)合HLB柱去除部分小分子雜質(zhì)。實(shí)驗(yàn)對(duì)加樣溶液中的蛋白洗脫行為進(jìn)行考察，加樣溶液上樣后，依次采用10%、20%、30%和60%甲醇各3 mL洗脫，收集上樣流出液及各流分洗脫液，經(jīng)SDS-PAGE檢測上樣流出液及10%甲醇洗脫液中可檢測到BSA，其他體積分?jǐn)?shù)流出液均未檢測到蛋白條帶，見圖5，即10%甲醇溶液可將BSA完全洗脫，因此可收集上樣流出液及10%甲醇洗脫液，實(shí)現(xiàn)蛋白純化。該方法可去除注射液中多種雜質(zhì)，有效解決了樣品經(jīng)單一沉淀試劑處理，電泳銀染后背景干擾的問題，達(dá)到較好的效果，見圖6。

圖5 痰熱清注射液加樣后HLB柱各洗脫液電泳圖Fig.5 Electrophoresis of eluents of samples solutions with BSA

圖6 HLB固相萃取結(jié)合沉淀法的樣品圖Fig.6 Electrophoresis of sample solutions with preparation by HLB and protein precipitation reagent

綜合考慮以上結(jié)果，HLB柱結(jié)合沉淀法既可實(shí)現(xiàn)微量蛋白富集，同時(shí)又能有效去除雜質(zhì)，顯著提高電泳檢測時(shí)的靈敏度，適合于成分復(fù)雜注射液前處理，因此實(shí)驗(yàn)采用該方法對(duì)痰熱清注射液進(jìn)行前處理。對(duì)中藥注射液中間體，由于樣品均為單味藥材成分提取物，蛋白含量相對(duì)較高且未加入輔料，僅采用商品化沉淀試劑處理后，即可進(jìn)行電泳銀染顯色。

3.2 方法學(xué)考察

3.2.1 檢測限 取痰熱清注射液5 mL，分別精密加入BSA對(duì)照品溶液 (101.6 μg/mL)50、100、150、200 μL，后續(xù)操作同 “2.2.2.3”項(xiàng) HLB柱結(jié)合沉淀試劑方法，經(jīng)銀染顯色后觀察條帶，確定該方法檢出限為2.03 μg/mL。

3.2.2 專屬性 取痰熱清注射液5 mL，精密加入BSA 對(duì)照品溶液 (101.6 μg/mL)100 μL，后續(xù)操作“2.2.2.3”項(xiàng)HLB柱結(jié)合沉淀試劑方法。由于樣品均未檢出蛋白，以加樣樣品作為陽性對(duì)照，注射劑作為陰性樣品，照擬定方法操作，結(jié)果加樣樣品中有蛋白條帶，樣品中未見蛋白條帶，背景無干擾，說明該方法專屬性較強(qiáng) (見圖3)。

3.3 痰熱清注射劑檢測結(jié)果 按“2.2.2.3”項(xiàng)HLB柱結(jié)合沉淀試劑方法，對(duì)15批痰熱清注射液進(jìn)行處理，凝膠電泳檢測銀染顯色后觀察，效期內(nèi)和過期樣品均未檢測到蛋白條帶，結(jié)果表明該注射劑中未檢測到蛋白存在;且在規(guī)定的存儲(chǔ)條件下，隨著存放時(shí)間的增加，未對(duì)注射劑中蛋白的有無產(chǎn)生影響。

3.4 工藝中間體檢測結(jié)果 分別對(duì)五味藥材 (黃芩、金銀花、連翹、山羊角、熊膽粉)的工藝中間體，包括制備工藝各關(guān)鍵步驟提取物，進(jìn)行了檢測，結(jié)果除金銀花和黃芩的水提液顯蛋白條帶外，其余藥材及后續(xù)工藝均未顯蛋白條帶。

分析各處方工藝可見，植物來源藥材水提液大多可見蛋白，但經(jīng)酸或堿沉淀后，蛋白消失不見，可以說明大生產(chǎn)中沉淀法可有效去除蛋白。至于兩味動(dòng)物藥，山羊角為硫酸浸泡回流、熊膽粉回流液經(jīng)活性炭處理，經(jīng)過這些工藝步驟后，蛋白或被水解，或被吸附，故均未被檢測到。另外，每種處方提取工藝最后均經(jīng)超濾膜過濾，可有效去除大分子物質(zhì)。由此可見，沉淀、水解、活性炭吸附和超濾膜［11］過濾等工藝步驟，有助于去除藥材提取物中的蛋白，減小注射劑成品引入蛋白的可能性，有效保證中藥注射劑安全性。

同時(shí)，工藝中間體為實(shí)驗(yàn)提供了陽性樣品參照，驗(yàn)證了方法可行性，以處方黃芩和金銀花為例，酸堿沉淀前后，可明顯區(qū)別蛋白有無的實(shí)際情況，并可由對(duì)照品條帶初步推測水提液中蛋白分子量分布情況，見圖7。

圖7 工藝中間體凝膠電泳圖Fig.7 Electrophoresis of intermediates of Tanreqing Injection

4 討論

4.1 丙二醇等輔料對(duì)前處理方法的影響 中藥注射劑中除藥材提取成分對(duì)前處理造成干擾外，添加的輔料對(duì)前處理方法的選取也存在很大影響，如痰熱清注射液中，由于丙二醇黏度較大，在超濾過程中，造成超濾時(shí)間延長，且所得液體黏稠，無法繼續(xù)后續(xù)純化步驟。其他品種注射劑加聚山梨酯－80作助溶劑的情況普遍，該成分用超濾等方法均不能將其完全去除［12］，且干擾凝膠電泳顯色，進(jìn)而影響檢測結(jié)果。通過對(duì)相關(guān)特征中藥注射劑品種進(jìn)行研究，固相萃取結(jié)合沉淀法可最大限度去除輔料干擾，富集并純化蛋白質(zhì)，將前處理步驟造成蛋白的損失降到最小。

4.2 HLB柱應(yīng)用于注射液中蛋白質(zhì)純化 由于痰熱清注射液成分復(fù)雜，單一的沉淀法或分離純化法富集除雜效果欠佳，因此實(shí)驗(yàn)采用固相萃取結(jié)合沉淀法對(duì)蛋白富集除雜。

反相固相萃取法在蛋白前處理中通常起到富集作用，但由于中藥注射液中含有大量小分子物質(zhì)，這些成分在HLB柱上容易吸附，進(jìn)而競爭蛋白吸附位點(diǎn)，導(dǎo)致蛋白無法在柱上保留或保留不強(qiáng)，因此采用常規(guī)思路難以富集蛋白。針對(duì)上述現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)采用HLB柱作為除雜手段，以HLB柱吸附小分子雜質(zhì)，從而實(shí)現(xiàn)蛋白的純化，結(jié)合使用商品化沉淀試劑，可以完成對(duì)多處方、成分復(fù)雜的中藥注射液的前處理，建立適用性好、通用性強(qiáng)的蛋白檢測方法。

4.3 SDS-PAGE用于中藥注射劑蛋白檢測的優(yōu)勢 在分離復(fù)雜混合物中蛋白質(zhì)的常用方法中，聚丙烯酰胺凝膠電泳是目前最可靠的方法之一。蛋白質(zhì)與陰離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉 (SDS)按重量比結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)分子所帶的負(fù)電荷遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過天然蛋白質(zhì)分子的凈電荷，消除了不同蛋白質(zhì)分子的電荷效應(yīng)，使蛋白質(zhì)按分子大小分離，其在目標(biāo)物特異性和檢測抗干擾能力上有著其他方法難以比擬的優(yōu)勢。

也有文獻(xiàn)報(bào)道，中藥注射劑或中藥提取液中的蛋白采用基于顯色反應(yīng)的比色法進(jìn)行測定［13］。由于中藥注射劑背景顏色深，顯色法無法排除背景顏色的干擾，且靈敏度較低，無法獲得可靠結(jié)果，最終未采用該方法。實(shí)驗(yàn)采用《中國藥典》2010年版一部附錄IX S有關(guān)物質(zhì)檢查法中磺基水楊酸沉淀法對(duì)痰熱清注射液加樣 (BSA)溶液進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示該方法的檢出限約為50 μg/mL，較本研究所建方法檢出限高約25倍。研究采用樣品加樣溶液檢出限與牛血清白蛋白對(duì)照品檢出限比較的方法對(duì)操作過程中蛋白的損失進(jìn)行了考察，樣品加樣溶液凝膠電泳檢出限絕對(duì)值約為40 ng，牛血清白蛋白對(duì)照品檢出限絕對(duì)值約為35 ng，回收率約為87%。

實(shí)驗(yàn)還曾嘗試UPLC-Q-TOF對(duì)注射劑中蛋白進(jìn)行檢測，但由于反相色譜柱固定相的鍵合基團(tuán)對(duì)蛋白的吸附性較強(qiáng)，導(dǎo)致大量蛋白黏附于鍵合碳上，導(dǎo)致蛋白質(zhì)響應(yīng)會(huì)逐漸下降，另外由于蛋白質(zhì)分子量大，經(jīng)過質(zhì)核比計(jì)算轉(zhuǎn)化后，相比小分子靈敏度較差，會(huì)受到響應(yīng)強(qiáng)的小分子雜質(zhì)干擾，故質(zhì)譜不適合大分子蛋白質(zhì)的直接測定。

凝膠電泳方法可更有效避免注射劑中大量小分子雜質(zhì)對(duì)微量蛋白檢測的干擾，具有檢測靈敏度高、結(jié)果直觀、方法易于普及的優(yōu)點(diǎn)。研究將其與適當(dāng)前處理方法結(jié)合，可減少假陽性情況的發(fā)生，實(shí)現(xiàn)對(duì)注射劑中微量蛋白的檢測。

4.4 UPLC-Q-TOF的應(yīng)用 隨著研究深入，也為了驗(yàn)證凝膠電泳方法是否可以最大限度檢測出注射劑中微量蛋白，我們開發(fā)了結(jié)合目前蛋白檢測最前沿技術(shù)的方法，鎖定藥材提取物中特征蛋白，膠內(nèi)酶解后使用質(zhì)譜進(jìn)行蛋白匹配，并篩選出特征肽段，用質(zhì)譜針對(duì)性檢測注射劑中肽段含量，結(jié)果為陰性。該方法檢測限與凝膠電泳方法接近，進(jìn)一步證明凝膠電泳方法可靠，靈敏度達(dá)到微量檢測要求。后續(xù)研究仍在繼續(xù)中，依據(jù)此思路，不久將來可建立質(zhì)譜定量檢測注射劑中蛋白質(zhì)的方法。

4.5 方法對(duì)其他品種注射劑的適用性 本研究建立了固相萃取結(jié)合沉淀法分離富集、凝膠電泳檢測痰熱清注射液中微量蛋白的分析模式。為考察該模式對(duì)其他品種注射劑的適用性，實(shí)驗(yàn)選取了生脈注射劑、黃芪注射劑等多個(gè)品種進(jìn)行研究。結(jié)果表明，對(duì)于單方制劑、簡單的復(fù)方制劑以及工藝中間體，僅采用商品化沉淀試劑對(duì)樣品處理即可達(dá)到去除雜富集蛋白的目的，但對(duì)于痰熱清等成分復(fù)雜的注射劑品種，在使用沉淀試劑的同時(shí)需結(jié)合固相萃取法才可達(dá)到較好的除雜效果。因此，本研究建立的中藥注射劑中蛋白的檢測方法通用性較好，可為其他品種注射劑中蛋白的分析提供借鑒和參考。

5 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用HLB柱結(jié)合沉淀試劑的方法對(duì)痰熱清注射液中微量蛋白分離富集，使用凝膠電泳銀染法檢測。與現(xiàn)行《中國藥典》方法比較，該方法有效解決了藥典方法中假陽性率高的問題，且靈敏度提高了25倍，更適宜于中藥注射液中蛋白質(zhì)的檢測。本研究為中藥注射劑中微量蛋白的檢測提供了研究思路，并為其他中藥注射劑品種建立蛋白質(zhì)檢測方法提供了參考依據(jù)，可有效保障中藥注射劑的用藥安全。

實(shí)驗(yàn)在對(duì)注射劑中蛋白檢測的同時(shí)，增加了對(duì)工藝中間體中蛋白的研究，探尋工藝制法對(duì)蛋白的影響，有效指導(dǎo)制備工藝對(duì)蛋白存在的影響，從生產(chǎn)環(huán)節(jié)開始杜絕影響安全性物質(zhì)的存在。

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