羅文匯，畢曉黎，孫冬梅

(廣東省中醫(yī)藥工程技術研究院，廣東廣州 510095)

川楝子為楝科植物川楝Melia toosendan Sieb.et Zucc.的干燥成熟果實。味苦，性寒;有小毒。具疏肝泄熱、行氣止痛、殺蟲的功效，用于肝郁化火、胸脅、脘腹、疝氣疼痛、蟲積腹痛，被收載于《中國藥典》2010年版一部［1］。

目前，對川楝子中三萜類研究較多的是川楝素，川楝素具有驅蟲、抗癌、抗菌、影響神經肌肉及細胞、影響呼吸中樞及消炎等多種生物活性［2-3］，目前文獻報道多采用HPLC-UV方法對川楝子藥材及其制劑中的川楝素進行測定［4-12］。本實驗擬用LC-MS法對川楝子藥材中川楝素進行測定，所建立的方法簡便，快速，靈敏，為控制川楝子藥材的質量，提供了一個良好基礎。

1 儀器與試藥

Accela高效液相色譜儀、TSQ Quantum Access Max三重四極桿質譜檢測器 (美國Thermo Fisher Scientific公司);Advantage A10超純水處理系統 (美國Millipore公司);乙腈、甲醇、甲酸為色譜純 (Merck公司);高純氮氣 (純度＞99.999%)、高線氬氣 (純度＞99.999%);水為超純水;川楝子 (批號分別為YL110204、YL110309、Y120314、YL120519、TP1206003、TP120825)由廣東一方制藥有限公司提供，經本院劉法錦研究員鑒別為《中國藥典》2010年版一部收載品種;川楝素對照品 (批號111842-201001)購于中國食品藥品檢定研究院。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 Hypersil GOLD C18色譜柱 (50 mm×2.1 mm，3 μm);柱溫30℃;流動相乙腈-0.01%甲酸 (31∶69);體積流量0.2 mL/min;進樣量2 μL。

2.2 質譜條件 高溫電噴霧離子源 (HESI源);負離子選擇反應監(jiān)測 (SRM);噴霧電壓3.5 kV;噴霧溫度350℃;毛細管溫度300℃;鞘氣壓力35 psi(1 psi=6.895 kPa);輔助氣體積流量1.5 L/min;用于定量分析的離子為m/z 573(12v)。

2.3 對照品溶液的制備 精密稱取川楝素對照品12.36 mg，加甲醇溶解，定容至100 mL量瓶內，搖勻，得123.6 μg/mL的對照品貯備液，置4℃冰箱中保存，使用時用甲醇稀釋至所需質量濃度。

2.4 供試品溶液的制備［1］取本品粉末約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，再用孔徑為0.22 μm的濾膜過濾，即得。

2.5 線性關系考察 精密吸取不同體積的川楝素對照品溶液分別置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成1.24、3.71、6.18、9.89、12.36 μg/mL系列溶液，分別取2 μL，注入LC-MS聯用儀，以川楝素的兩個峰面積之和 (Y)對質量濃度 (X)進行線性回歸，得回歸方程為Y=3750X+32400，r=0.9949。川楝素在 (1.24～12.36 μg/mL)范圍內呈良好的線性關系。

2.6 精密度試驗 選取3.71 μg/mL的川楝素對照品溶液分別進樣6次，進樣量2 μL，按照“2.1”項和“2.2”項實驗條件進行測定，記錄質譜峰面積，結果川楝素兩個峰面積之和RSD為2.50%(n=6)，表明精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取川楝子樣品0.25 g，按照“2.4”項試驗方法進行制備供試品溶液，“2.1”項和“2.2”項試驗條件進行測定，分別于0、1、2、4、8、12、24 h測定，記錄質譜峰面積，考察穩(wěn)定性。結果川楝素兩個峰面積之和的RSD為2.19%，樣品在24 h內穩(wěn)定。

2.8 重復性試驗 分別稱取6份川楝子樣品各0.25 g，按照“2.4”項試驗方法進行制備供試品溶液，“2.1”項和“2.2”項試驗條件進行測定，記錄質譜峰面積，測得川楝子供試品中川楝素兩個峰面積之和的RSD為2.38%。

2.9 加樣回收率試驗 取已知量的同一批川楝子供試品9份各0.125 g，分別精密加入一定量的川楝素對照品溶液，按照“2.4”項供試品溶液制備方法進行操作，“2.1”項和“2.2”項實驗條件進行測定，測得川楝子供試品平均加樣回收率為97.96%，RSD為3.01%，見表1。

表1 川楝素回收率測定結果

2.10 樣品測定 取川楝子供試品各6份，按照“2.4”項實驗方法進行操作，“2.1”項和“2.2”項實驗條件進行測定，按外標法以川楝素兩個峰面積之和定量，代入線性回歸方程，計算川楝子中川楝素。結果川楝子供試品中川楝素的質量分數為 (0.734±0.037)mg/g，RSD為2.05%。見圖1～2。

圖1 川楝素對照品TIC圖譜

圖2 川楝子藥材TIC圖譜

3 討論

川楝素的毒性作用之一為肌無力，但在去神經骨骼肌上，川楝素則能增強直接刺激引起的收縮反應［13］。由于川楝子的廣泛生理活性和臨床應用，其存在的急性和慢性的毒性作用不應忽視，對川楝素量需要控制。川楝素結構中具有半縮醛，始終有兩個互變異構體存在［14-15］，故定量時以川楝素兩個峰面積之和計算。本實驗采用液質聯用的方法測定川楝子中川楝素的量，方法靈敏、準確，重復性好，為川楝子的質量控制提供了實驗依據。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:39.

［2］程 蕾，雷 勇，梁媛媛，等.川楝子各提取部分藥效及毒性的比較研究［J］.中藥材，2007，30(10):1276-1279.

［3］王小娟，劉妍如，肖炳坤，等.川楝素抗腫瘤作用機制研究進展［J］.科學技術與工程，2011，11(2):281-285.

［4］李潔玉，沈 力，周 濃，等.HPLC測定不同來源川楝子中川楝素［J］.光譜實驗室，2013，30(1):294-297.

［5］周樂華，李迎春，竇志英.川楝子及其炮制品中川楝素含量測定研究［J］.天津藥學，2011，23(1):20-22.

［6］胡 芳，容 偉，周 英，等.川楝韌皮和川楝子中川楝素含量比較研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2011，22(5):1115-1117.

［7］高保衛(wèi)，張 璟，馮俊濤，等.川楝樹皮中川楝素質量分數的液相色譜檢測［J］.西北農業(yè)學報，2012，21(6):178-181.

［8］陳 強，周 濃，王榮繁.HPLC測定川楝子不同采收期及不同部位中川楝素的含量［J］.資源開發(fā)與市場，2012，28(9):777-778，840.

［9］張 燁，周 濃，夏從龍.HPLC測定止痛化癥膠囊中川楝素的含量［J］.亞太傳統醫(yī)藥，2010，6(2):30-31.

［10］張 燁，周 濃，夏從龍.HPLC測定婦樂顆粒中川楝素含量［J］.遼寧中醫(yī)藥大學學報，2010，12(4):220-221.

［11］張秋蓉，周 濃，楊 敏.HPLC測定乙肝寧顆粒中川楝素［J］.中國實驗方劑學雜志，2010，16(10):78-79，82.

［12］劉紅亞，崔紅梅，周 絢.RP-HPLC法測定川楝子藥材中川楝素的含量［J］.世界科學技術—中醫(yī)藥現代化，2008，10(3):52-54.

［13］陳 兵.川楝子的現代研究進展［J］.中國中醫(yī)藥現代遠程教育，2010，8(12):259-261.

［14］鐘熾昌，謝晶曦，陳淑鳳，等.川楝素的化學結構［J］.化學學報，1975，33(1):35-47.

［15］舒國欣，梁曉天.關于川楝素化學結構的修正［J］.化學學報，1980，38(2):196-198.