何綠茵 陳業(yè)輝 李淼沅 仉 智 陳林強(qiáng) 林華欣 聶 品 江 文 徐邦牢

腎移植是終末期腎病的有效治療手段之一，術(shù)后我們常用鈣調(diào)磷酸酶類(lèi)免疫抑制(CsA及FK506)來(lái)預(yù)防受體對(duì)供腎的免疫排斥反應(yīng)。臨床使用上述兩藥過(guò)程中，我們發(fā)現(xiàn)二者會(huì)不同程度影響血象，但缺乏相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證及系統(tǒng)的臨床資料的分析。本研究就在模擬臨床上腎移植術(shù)后的用藥方案，來(lái)觀察上述兩藥對(duì)大鼠細(xì)胞的影響，進(jìn)而指導(dǎo)臨床上用藥選擇。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)源及分組

雄性清潔級(jí)近交系SD大鼠(Sprague－Dawley)18只，體重200～250 g/只，由中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供并在該中心開(kāi)展實(shí)驗(yàn)，合格證號(hào)SCXK(粵)2009－0011。實(shí)驗(yàn)前，先在實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)大鼠1周，以適應(yīng)SPF環(huán)境，飲用消毒飲用水，晝夜節(jié)律。采用隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)方式，將18只大鼠分為對(duì)照組、CsA組及FK506組3組，每組6只。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物及劑量

CsA產(chǎn)自杭州中美華東制藥有限公司，F(xiàn)K506產(chǎn)自日本大阪藤澤公司。參考大鼠與人的劑量換算公式 DW1=［(R1W21/3)/(R2Wl1/3)］DW2，其中DW是藥物的劑量，R是體型指數(shù)(大鼠和人的R值分別為0.09和0.1～0.11)，W是標(biāo)準(zhǔn)體重(大鼠和人的W值分別是200 g和60 kg)［1］。將腎移植術(shù)后首劑治療劑量換算為大鼠給藥方案為:CsA為25 mg·kg－1·d－1;FK506 為 0.8 mg·kg－1·d－1;而對(duì)照組則給予消毒飲用水1 mg·kg－1·d－1。用大鼠專(zhuān)用圓頭金屬灌胃針進(jìn)行灌胃方式給藥，每天給藥1次，稱(chēng)重2次/周，依據(jù)體重調(diào)整藥量，規(guī)律給藥4周，各組大鼠模型建立，遂處死大鼠并取血標(biāo)本。

1.3 觀察指標(biāo)

應(yīng)用日本東亞公司生產(chǎn)的sysmex系列的XN－2000血細(xì)胞分析儀及配套試劑對(duì)各組大鼠血液中WBC、RBC、HGB、PLT、HCT、MCV、MCH、MCHC、RDW 及 MPV 進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件包，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示;各組間比較采用方差分析(Analysis of Variance，ANOVA)，兩兩比較采用LSD－t檢驗(yàn)(Least Significant Difference，LSD)，α =0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體重比較

實(shí)驗(yàn)前各組大鼠之間體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。實(shí)驗(yàn)4周后，CsA組大鼠體重及體重增長(zhǎng)值較對(duì)照組及FK506組低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，見(jiàn)表1及圖1。

2.2 各組大鼠血細(xì)胞的比較

對(duì)照組、CsA組及FK506組的RBC、HCT無(wú)明顯差異，且組間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p﹥0.05)。

表1 各組大鼠實(shí)驗(yàn)前后的體重比較(±s)g

表1 各組大鼠實(shí)驗(yàn)前后的體重比較(±s)g

注:與對(duì)照組比較，1)p＜0.05;與CsA組比較，2)p＜0.05;與FK506組比較，3)p＜0.05

組別 數(shù)量 實(shí)驗(yàn)前體重(g)實(shí)驗(yàn)后體重(g)體重增長(zhǎng)值(g)對(duì)照組 6 238±23 362±372) 124±242)CsA組 6 232±18 272±171)3) 40±41)3)FK506組 6 240±16 343±362) 103±232)

圖1 各組大鼠實(shí)驗(yàn)前后的體重及體重增長(zhǎng)值的比較

CsA組WBC、PLT較對(duì)照組及FK506組明顯升高，且CsA組與后兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，而對(duì)照組與FK506組組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。

CsA及FK506組的MPV較對(duì)照組增多，且CsA增加的幅度最大，CsA及FK506分別與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，且CsA與FK506組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。

CsA組HGB、MCV、RDW 較對(duì)照組及 FK506組明顯降低，且CsA組與后兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，而對(duì)照組與FK506組組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。

CsA組MCH較對(duì)照組減少，F(xiàn)K506組較對(duì)照組增多，且CsA及FK606分別同對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。

FK506組MCHC較CsA及對(duì)照組升高，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。見(jiàn)表2及表3。

表2 各組大鼠給藥4周后血常規(guī)比較(±s)

表2 各組大鼠給藥4周后血常規(guī)比較(±s)

注:與對(duì)照組比較，1)p＜0.05;與 CsA 組比較，2)p＜0.05;與 FK506組比較，3)p＜0.05

組別 數(shù)量 WBC(109/L)RBC(1012/L)HGB(g/L)PLT(1012/L)HCT(L/L)對(duì)照組 6 4.98 ±1.862) 7.16 ±0.28 143.17 ±6.682) 975.17 ±70.712)0.40 ±0.03 CsA 組 6 11.80 ±2.071)3) 7.41 ±0.29 125.00 ±8.671)3)1190.00 ±73.701)3) 0.39 ±0.01 FK506 組 6 4.04 ±0.962) 7.11 ±0.29 147.00 ±6.072) 1010.83 ±35.072)0.40 ±0.01

表3 各組大鼠給藥4周后血常規(guī)比較(±s)

表3 各組大鼠給藥4周后血常規(guī)比較(±s)

注:與對(duì)照組比較，1)p＜0.05;與CsA組比較，2)p＜0.05;與FK506組比較，3)p＜0.05

組別 數(shù)量 MCV(fl)MCH(pg)MCHC(g/L)RDW(%)MPV(fl)對(duì)照組 6 56.30 ±2.322) 18.90 ±0.402)3) 335.33 ±7.633) 17.32 ±0.392) 6.26 ±0.352)3)CsA 組 6 52.15 ±0.791)3) 17.42 ±0.641)3) 343.33 ±13.533) 8.97 ±0.221) 7.47 ±0.191)3)FK506 組 6 56.63 ±2.292) 20.68 ±0.301)2) 365.33 ±11.641)2) 16.43 ±1.272) 7.06 ±0.131)2)

3 討論

CsA與FK506同屬CNI類(lèi)免疫抑制劑，是目前臨床上腎移植術(shù)后常用的免疫抑制，其作用機(jī)制相似，均作用與鈣調(diào)磷酸酶(CN)，阻止T細(xì)胞活化及IL－2的釋放，來(lái)發(fā)揮抗免疫排除的作用，但運(yùn)用的過(guò)程中會(huì)伴隨其他的不良反應(yīng)，如肝腎毒性［2－3］，性功能及生殖系統(tǒng)［4］的毒害，心臟毒性等，本文主要探討CsA及FK506對(duì)血細(xì)胞的影響。

血細(xì)胞存在于外周血液循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)，主要包括:①紅細(xì)胞:主要的功能是運(yùn)送氧和CO2，并在血液酸堿平衡中起到一定的緩沖作用。②白細(xì)胞:各類(lèi)白細(xì)胞(中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等)均參與機(jī)體的防御功能。③血小板:止血過(guò)程中起著重要作用，同時(shí)還有助于維持血管壁的完整性。

臨床上長(zhǎng)期應(yīng)用CsA、FK506后，血常規(guī)中某些指標(biāo)會(huì)發(fā)生一定的變化，如CsA［5］會(huì)引起白細(xì)胞、血小板減少，貧血等，F(xiàn)K506［6］可能影響白細(xì)胞數(shù)量(升高或降低)、貧血及血小板減少。

我們本研究發(fā)現(xiàn)CsA引起WBC升高，這與臨床上長(zhǎng)期用藥后WBC減少［5］不符合，雖有報(bào)道稱(chēng)有諸如硫唑嘌呤等免疫抑制劑骨髓移植導(dǎo)致白細(xì)胞減少后改用CsA后早期可升高WBC［7］，但具體機(jī)制不詳。本組實(shí)驗(yàn)大鼠體重最輕，體重增長(zhǎng)值最小，精神差，嗜睡，脫毛發(fā)，均可反映大鼠機(jī)能明顯變差，間接提示免疫系統(tǒng)相對(duì)較差。本實(shí)驗(yàn)我們考慮WBC升高可能與CsA長(zhǎng)期應(yīng)用引起機(jī)體免疫功能紊亂，導(dǎo)致機(jī)體感染有關(guān)，或與CsA刺激骨髓造血功能有關(guān)。WBC增高是否確切由感染所致，暫缺乏直接證據(jù)，還需進(jìn)一步論證。

本實(shí)驗(yàn)中CsA引起PLT及MPV增高，前者提示血小板數(shù)量增多，后者提示血小板體積增大，二者同時(shí)增加，考慮可能與CsA在早期一定程度刺激骨髓造血功能或存在感染刺激有關(guān)，但目前未有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。臨床上長(zhǎng)期應(yīng)用CsA會(huì)導(dǎo)致PLT減少，其機(jī)制是CsA長(zhǎng)期使用引發(fā)藥物免疫應(yīng)答導(dǎo)致血小板的消耗所致［8］。

本實(shí)驗(yàn)中CsA引起HBG、MCV、RDW減少，但RBC無(wú)明顯改變，我們考慮可能與長(zhǎng)期應(yīng)用CsA引起腹瀉，影響胃腸道鐵離子的吸收，進(jìn)而使得血紅蛋白合成不足，導(dǎo)致缺鐵性貧血(小細(xì)胞低色素);還有可能是CsA的長(zhǎng)期作用引起腎毒性，減少了EPO的合成，導(dǎo)致貧血［9］。

本研究中FK506對(duì)血細(xì)胞影響輕微。

腎移植術(shù)后的處理和護(hù)理對(duì)移植腎的存活和移植病人的康復(fù)非常重要［10］，我們的研究提示CsA對(duì)血細(xì)胞影響較大，因而我們?cè)谂R床上使用CsA的過(guò)程中，需定期復(fù)查血象，方能及時(shí)發(fā)現(xiàn)并處理可能合并的感染、貧血或血小板異常的情況。

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