張曉倩，張秀云，王偉楠，邱智東*

(1.長春中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，吉林 長春 130117; 2.吉林敖東延邊藥業(yè)股份有限公司，吉林 延吉 133001)

三七熱壓處理后皂苷類成分變化研究△

張曉倩1，張秀云2，王偉楠1，邱智東1*

(1.長春中醫(yī)藥大學(xué) 藥學(xué)院，吉林 長春 130117; 2.吉林敖東延邊藥業(yè)股份有限公司，吉林 延吉 133001)

目的探討熱壓滅菌對三七中皂苷類成分的影響。方法采用RP-HPLC同時檢測三七中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rd和人參皂苷Rg3在熱壓處理過程中的含量變化。結(jié)果三七皂苷R1降低35.03%，人參皂苷Rg1降低39.41%、Re降低42.62%、Rb1降低34.94%、Rd降低23.71%，而稀有皂苷人參皂苷Rg2、Rh1、Rg3都有2～5倍的提高。結(jié)論高溫使三七中部分原生苷轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的次級苷，增加了稀有皂苷的含量。

熱壓；三七；皂苷類成分

三七為五加科人參屬植物Panaxnotoginseng(Burk)F.H.Chen的根莖，主要功效有散瘀止血，消腫定痛[1]。據(jù)文獻(xiàn)報道，三七的主要功效成分為皂苷類化合物，包括三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd及稀有皂苷：人參皂苷Rg2、Rg3、Rh1等[2]。因三七藥材表面多皺縮，帶有大量細(xì)菌和其他微生物，常規(guī)的清潔方法難以達(dá)到安全使用的目的；所以，無論將三七做成注射劑還是片劑、膠囊劑，都應(yīng)對其進(jìn)行滅菌處理。常見的滅菌方式有干熱滅菌、紫外線滅菌及高壓蒸氣滅菌等，而在大工業(yè)生產(chǎn)中最常用的滅菌方式是高壓蒸氣滅菌[3]。筆者通過分析和總結(jié)三七中主要皂苷類成分的藥理活性及在高壓蒸氣滅菌過程中的含量變化，擬構(gòu)建高壓升溫過程與三七質(zhì)量之間的聯(lián)系，為以三七為原料的產(chǎn)品開發(fā)提供參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器

高效液相色譜儀(agilent 1260)，色譜柱Inertsil ODS-SP(250 mm×4.6 mm，5 μm)，YXQ-LS-50A立體壓力蒸氣滅菌器(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司)，DZF-6090真空干燥箱(上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司)。

1.2 材料

三七(吉林國安藥業(yè)有限公司)，三七皂苷R1(批號：110745-200617)、人參皂苷Rg1(批號：110703-201128)、人參皂苷Re(批號：110754-200822)、人參皂苷Rb1(批號：110704-201223)、人參皂苷Rg2(批號：111779-200801)、人參皂苷Rh1(批號：MUST-11041201)、人參皂苷Rd(批號：111818-201001)、人參皂苷Rg3(批號：110804-200603)對照品，均購于中國食品藥品檢定研究院。

2 方法與結(jié)果

取同一批三七，粉碎過60目篩，平均分成兩，其中一份置立體壓力蒸氣滅菌器中于121 ℃滅菌60 min后于真空干燥箱中干燥。

2.1 色譜條件

Inertsil ODS-SP(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流動相：乙腈-水二元梯度洗脫，0～20 min，乙腈20%；20～45 min，乙腈20%→46%；45～55 min，乙腈46%→55%；55～60 min，乙腈55%；60～65 min，乙腈55%→20%。流速：1.5 mL·min-1，檢測波長：203 nm；進(jìn)樣量：10 μL，柱溫：25 ℃。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱定三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rh1、人參皂苷Rd、人參皂苷Rg3對照品適量，用甲醇溶解稀釋成每1 mL含皂苷總量1.0 mg的溶液，0.45 μm濾膜過濾，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取三七與滅菌干燥后的粉末1.0 g，分別精密稱定，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，放置過夜，置80 ℃水浴上保持微沸2 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得[4]。

混合對照品、三七樣品、滅菌后樣品HPLC色譜圖見圖1，各皂苷之間的分離度均大于1.5。

1.三七皂苷R1 2.人參皂苷Rg1 3.人參皂苷Re 4.人參皂苷Rb1 5.人參皂苷Rg2 6.人參皂苷Rh1 7.人參皂苷Rd 8.人參皂苷Rg3A.混合對照品 B.滅菌前樣品 C.滅菌后樣品圖1 三七樣品及對照品HPLC圖

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別精密吸取上述混合對照品溶液3，6，9，12，15，18 μL進(jìn)行色譜測定[5]，按上述色譜條件測定峰面積，以峰面積(Y)對進(jìn)樣量(X，μg)進(jìn)行線性回歸，得到各組分的線性回歸方程，相關(guān)系數(shù)及線性范圍見表1。

表1 8種皂苷組分線性關(guān)系測定結(jié)果

2.4.2 精密度試驗(yàn) 取混合對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，其相對保留時間穩(wěn)定，三七皂苷R1，人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg2、Rh1、Rd、Rg3相對峰面積的RSD分別為0.39%，0.69%，0.65%，0.59%，0.72%，0.68%，0.84%，0.38%，表明此方法精密度良好[6-8]。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批次樣品依法制備供試品溶液，于室溫下每隔2 h進(jìn)樣1次，共進(jìn)6次，考察三七皂苷R1，人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg2、Rh1、Rd、Rg3在室溫下的溶液穩(wěn)定性，記錄色譜圖，以峰面積進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果RSD分別為0.45%，1.11%，1.28%，1.84%，0.95%，1.23%，1.83%，0.65%，表明供試液穩(wěn)定性良好。

2.4.4 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取同一批次樣品6份，依法進(jìn)行供試品溶液的制備和測定，考察此方法的重現(xiàn)性，結(jié)果8種皂苷的重復(fù)RSD小于3%，重現(xiàn)性良好。

2.4.5 回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的樣品6份，分別精密加入三七皂苷R1，人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg2、Rh1、Rd、Rg3對照品，依法制備供試品溶液后，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，計(jì)算回收率[9]，結(jié)果三七皂苷R1，人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rg2、Rh1、Rd、Rg3的平均回收率分別為98.54%，99.64%，99.90%，96.5%，100.09%，103.80%，98.97%，97.25%。

2.5 滅菌前后皂苷含量測定

三七皂苷R1降低35.03%、人參皂苷Rg1降低39.41%、Re降低42.62%、Rb1降低34.94%、Rd降低23.71%，而稀有皂苷人參皂苷Rg2、Rh1、Rg3都有2～5倍的提高。滅菌前后皂苷含量見表2。

表2 滅菌前后三七樣品中皂苷含量比較 /mg·g-1

3 討論

由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以及各皂苷的分子結(jié)構(gòu)式發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd與人參皂苷Rg3在結(jié)構(gòu)上不同之處是C-20位上所連的糖基不同，同樣人參皂苷Rg1與Rh1及人參皂苷Re與人參皂苷Rg2的不同之處是C-20位糖基不同，由此我們推斷達(dá)瑪烷型四環(huán)三萜皂苷C-20上所連糖基是不穩(wěn)定的，在遇熱的情況下皂苷C-20位上脫掉1個或2個糖基形成次級苷。因此可以解釋三七經(jīng)過熱壓處理后人參皂苷Rb1、人參皂苷Rd含量降低，人參皂苷Rg3含量升高；人參皂苷Rg1含量降低，人參皂苷Rh1含量升高；人參皂苷Re含量降低，人參皂苷Rg2升高。高溫容易使三七中部分一級皂苷內(nèi)的糖苷鍵斷裂生成次級苷或者構(gòu)象發(fā)生變化的次級苷。

同時據(jù)文獻(xiàn)報道，三七中三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、Rg1等皂苷是三七中改善微循環(huán)、活血化瘀、抗炎止痛的主要成分，而稀有皂苷Rh1、Rg2、Rg3等皂苷的主要活性是增強(qiáng)心肌收縮、擴(kuò)張血管、減慢心率及抗腫瘤[10]。由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以看出，經(jīng)過高壓滅菌后，三七皂苷R1、人參皂苷Rb1、Rg1等含量均有所降低，而稀有皂苷人參皂苷Rh1、Rg2、Rg3的含量也都有不同程度的顯著提高；從而我們推斷，三七在經(jīng)過高溫處理之后會降低其止血散瘀、消腫止痛的活性，同時增強(qiáng)其心臟功能、抗腫瘤的作用。

傳統(tǒng)中藥的藥效物質(zhì)研究和二次開發(fā)應(yīng)用是我國中藥領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，三七是我國傳統(tǒng)名貴中藥，具有止血、抗炎、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛等保健功效。研究表明，皂苷類成分是其主要的功效物質(zhì)基礎(chǔ)。近年來，隨著人們健康觀念的轉(zhuǎn)變和養(yǎng)生意識的提高，以三七或三七中總皂苷成分為原料進(jìn)行的產(chǎn)品研發(fā)越來越受到研究者和企業(yè)的重視。同時，對于加工過程中，三七的質(zhì)量控制和加工后產(chǎn)品的使用安全也提出了新的挑戰(zhàn)。加熱和滅菌是工業(yè)生產(chǎn)食品、藥品和保健品過程中不可避免的步驟，筆者從這個角度出發(fā)，對三七中的主要成分經(jīng)高壓高溫滅菌后產(chǎn)生的變化進(jìn)行了分析，并總結(jié)出了幾個主要皂苷成分的含量變化，以此為依據(jù)對高壓高溫滅菌后的三七質(zhì)量進(jìn)行評估，為三七產(chǎn)品的研發(fā)和安全使用提供了參考和依據(jù)。

[1] 黃文琴.三七的臨床應(yīng)用功效及藥理分析[J].醫(yī)學(xué)信息，2011，(1)：304.

[2] 喬春玲，丁艷芬，楊崇仁.三七總皂苷藥理研究進(jìn)展[J].中國現(xiàn)代中藥，2012，14(11)：25-30.

[3] 方茂水，鐘彬.對三七片原料藥材滅菌方法的探討[J].基層中藥雜志，1995，9(2)：16-17.

[4] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：11-12.

[5] 沈國芳，吳永江，程冀宇.RP-HPLC測定血栓通注射液中4種皂苷的含量[J].中國藥學(xué)雜志，2003，38(9)：698-699.

[6] 徐鵬，馮素春，趙迪，等.HPLC-ELSD法測定血塞通注射液中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd[J].中成藥，2103，35(3)：521-524.

[7] 楊軍，王玲，吳詩惠，等.HPLC法測定益心復(fù)脈顆粒中人參皂苷Rg1、Re、Rb1的含量[J].中國藥房，2008，19(30)：2386-2387.

[8] 李海燕.復(fù)方三七注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及藥效學(xué)研究[D].北京：北京中醫(yī)藥大學(xué)，2003.

[9] 唐軍，武為寶.超高效液相色譜法快速測定血栓通注射液中5種皂苷成分的含量[J].藥物分析雜志，2008，28(1)：97-99.

[10] 楊鑫寶，楊秀偉，劉建勛.人參中皂苷類化學(xué)成分的研究[J].中國現(xiàn)代中藥，2013，15(5)：349-358.

StudyonSaponinsCompositionChangesinPanaxnotoginsengafterAutoclaveSterilization

ZHANGXiaoqian1，ZHANGXiuyun2，WANGWeinan1，QIUZhidong1*

(1.ChangchunUniversityofChineseMedicine，Changchun130117，China; 2.JilinAodongYanbianPharmaceuticalCo.，Ltd.，Yanji133001，China)

Objective：The influence of autoclave sterilization on the major saponins ofPanaxnotoginsenghad been discussed in this article.MethodsThe technique of RP-HPLC was introduced to simultaneously analyze the variation of notoginsenoside R1，ginsenoside Rg1，ginsenoside Re，ginsenoside Rg2，ginsenoside Rb1，ginsenoside Rh1，ginsenoside Rd and ginsenoside Rg3during the autoclave sterilization.ResultsIt turned out the content of notoginsenoside R1，ginsenoside Rg1，Re，Rb1and Rd decreased by 35.03%，39.41%，42.62%，34.94% and 23.71% respectively，while the content of rare ginsenoside Rg2，Rh1and Rg3reversely showed 2-5 times increase after the autoclave.ConclusionHeat caused by autoclave transformed most of the proto-saponins into secondary saponins so that the content of rare saponins had been increased.

Autoclave；Panaxnotoginseng；Saponins

國家科技支撐計(jì)劃(2012BAI29B05)

*

邱智東，教授，研究方向：中藥制劑提取工藝及質(zhì)量；Tel：(0431)86172208，E-mail：qzdcczy@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.03.005

2013-10-16)