胡佳麗，徐煜彬，竇德強

(遼寧中醫(yī)藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600)

茯苓的脂溶性化學成分研究△

胡佳麗，徐煜彬，竇德強*

(遼寧中醫(yī)藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600)

目的對茯苓的脂溶性化學成分進行研究，尋找具有重要生物活性及藥用前景的天然產(chǎn)物。方法將茯苓干燥粉末進行水蒸氣回流提取，濃縮，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取。將石油醚及乙酸乙酯萃取物經(jīng)正相和反相硅膠柱、制備型HPLC等色譜方法進行分離純化，并根據(jù)其理化性質(zhì)和譜學數(shù)據(jù)進行結構解析及確定。結果從茯苓的石油醚及乙酸乙酯萃取物中分離得到5個化合物，分別鑒定為：鄰苯二甲酸二(2-乙基-己基)酯(1)、鄰苯二甲酸二丁酯(2)、茯苓酸(3)、豬苓酸C(4)和去氫茯苓酸(5)。結論經(jīng)查閱文獻可知，化合物1，2為首次從該植物中分離得到。

茯苓；脂溶性化學成分；鄰苯二甲酸酯；三萜

茯苓為多孔菌科真菌Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核，又名茯菟、茯靈、云苓、松苓等；味甘、淡、性平，歸心、肺、脾、腎經(jīng)；具有利水滲濕，健脾，寧心的功能。用于水腫尿少，痰飲眩悸，脾虛食少，便溏泄瀉，心神不安，驚悸失眠等[1]。茯苓始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》[2]，列為上品。云：“茯苓味甘平，主胸脅逆氣，憂恚、驚邪、恐悸，心下結痛，寒熱煩滿，咳逆口焦舌干，利小便，久服安魂養(yǎng)神，不饑延年。一名茯菟?！庇醒芯勘砻鬈蜍咧械闹饕瘜W成分為茯苓多糖、三萜、甾體、樹膠、蛋白質(zhì)、氨基酸等[3-4]。前人主要研究的是茯苓中三氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚萃取物中的化學成分[5-7]，很少有人對石油醚萃取物進行研究。筆者對茯苓石油醚及乙酸乙酯萃取物進行了更深入的研究，現(xiàn)將結果報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

BrukerAvanceDRX-500型超導核磁共振儀，HITACHI L-7100單泵高效液相色譜儀，UV L-7400檢測器，YMC C18液相色譜柱(ODS)(日本YMC公司，5 μm，9.4 mm，25 cm)，YB-1A型真空干燥箱，ZF1-Ⅱ型紫外分析儀，KQ-250DE型數(shù)控超聲波清洗器。柱色譜用硅膠(100～200，200～300目)、薄層色譜用硅膠(G，GF254)(青島海洋化工廠)。

1.2 試藥

茯苓收集于云南騰沖縣(批號：20121101)，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學康廷國教授鑒定為多孔菌科真菌Poriacocos(Schw.)Wolf的干燥菌核。

高效液相用試劑(色譜純，美國Oceanpak Alexative Chemical)，其他試劑(化學純，天津市登科化學試劑有限公司)。

2 提取分離

將干燥的茯苓藥材(8 kg)粉碎，過20目篩，以10倍量藥液比水蒸氣回流提取2次，每次2 h，提取液靜置，傾倒出上清液，底部混濁物進行抽濾，合并提取液并濃縮至1倍量，以80%的乙醇在1～4 ℃下進行醇沉，過夜，減壓回收溶劑至1倍量且無醇味，依次用石油醚和乙酸乙酯進行1∶1藥液比萃取。石油醚萃取物經(jīng)過反復硅膠柱色譜，以石油醚-乙酸乙酯(100∶0，80∶1，50∶1)系統(tǒng)進行梯度洗脫，得到流分，經(jīng)過制備型HPLC得到化合物1(16 mg)，2(195 mg)，乙酸乙酯部分經(jīng)過反復硅膠柱，以三氯甲烷-甲醇(100∶0，75∶1，50∶1)、石油醚-丙酮(20∶1，10∶1，5∶1)溶劑系統(tǒng)進行梯度洗脫，得到的流分經(jīng)過制備型HPLC得到化合物3(300 mg)，4(30 mg)，5(50 mg)，見圖1。

圖1 化合物1～5的結構式

3 結構鑒定

化合物1：淡黃色油狀液體，溶于三氯甲烷、乙醚和甲醇；TLC展開后噴霧5%香草醛濃硫酸試劑顯紫色斑點。ESI-MSm/z：391.4[M+H]+。1H-NMR(500 Hz，CDCl3)δ：7.70(2 H，dd，J=5.6，3.3 Hz)、7.52(2 H，dd，J=5.6，3.3 Hz)、4.20(2 H，dd，J=10.9，6.2 Hz)、1.68(2 H，t，J=6.2 Hz)、1.26～1.45(4 H，m)、0.92(6 H，t，J=7.5 Hz)、1.26～1.45(12 H，m)、0.90(6 H，t，J=7.0 Hz)；13C-NMR(CDCl3，125 MHz)δ：167.7(C-1)、132.5(C-2)、128.8(C-3)、130.9(C-4)、68.2(C-1′)、38.8(C-2′)、30.4(C-5′)、29.0(C-6′)、23.8(C-3′)、23.0(C-7′)、14.0(C-8′)、11.0(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的鄰苯二甲酸二(2-乙基-己基)酯(phthalic acid bis-(2-ethylhexyl)ester)基本一致[8]，故確定化合物1為鄰苯二甲酸二(2-乙基-己基)酯，為首次從茯苓中分離得到。

化合物2：淡黃色油狀液體，易溶于三氯甲烷、二氯甲烷和甲醇；TLC展開后噴霧5%香草醛濃硫酸試劑顯紫色斑點。ESI-MSm/z：279.0[M+H]+、277[M-H]-。1H-NMR(500 Hz，CDCl3)δ：7.72(2 H，dd，J=5.8，3.5 Hz)、7.52(2 H，dd，J=5.7，3.3 Hz)、4.31(4 H，t，J=6.7 Hz)、1.72(4 H，m)、1.44(4 H，m)、0.96(6 H，t，J=7.5 Hz)。13C-NMR(CDCl3，125 MHz)δ：167.7(C-1)、132.4(C-2)、130.9(C-4)、128.9(C-3)、65.6(C-1′)、30.6(C-2′)、19.2(C-3′)、13.7(C-4′)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的鄰苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate)基本一致[9]，故確定化合物2為鄰苯二甲酸二丁酯，為首次從茯苓中分離得到。

化合物3：白色針狀結晶，易溶于三氯甲烷、吡啶；TLC展開后噴霧5%香草醛濃硫酸試劑顯紫色斑點，紫外燈365 nm下無熒光，254 nm下無暗斑，碘熏顯色。TLC[CH2Cl2-MeOH(10∶1)]，Rf值為0.6。ESI-MSm/z：527.0[M-H]-。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)δ：178.8(C-21)、170.6(CH3CO)、156.1(C-24)、135.0(C-8)、134.4(C-9)、107.0(C-31)、80.7(C-3)、76.7(C-16)、57.3(C-17)、50.7(C-5)、48.8(C-14)、48.7(C-20)、46.3(C-13)、43.7(C-15)、38.0(C-4)、37.2(C-10)、35.4(C-1)、33.3(C-23)、31.6(C-22)、29.7(C-12)、28.0(C-28)、26.8(C-7)、25.4(C-30)、24.5(C-2)、22.0(C-26)、21.9(C-27)、21.1(CH3CO)、20.9(C-11)、19.2(C-19)、18.4(C-6)、17.8(C-18)、16.8(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的茯苓酸(pachymic acid)基本一致[10]，故確定化合物3為茯苓酸。

化合物4：白色針狀結晶，易溶于三氯甲烷、吡啶，不溶于二氯甲烷、甲醇；TLC展開后噴霧5%香草醛濃硫酸試劑顯色紫色斑點。ESI-MSm/z：482.0[M]+。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)δ：215.1(C-3)、178.6(C-21)、156.1(C-24)、144.8(C-9)、142.9(C-8)、120.7(C-7)、117.7(C-11)、107.1(C-31)、76.4(C-16)、57.6(C-17)、51.1(C-5)、49.4(C-14)、48.5(C-20)、47.5(C-4)、45.1(C-13)、44.4(C-15)、37.5(C-10)、36.8(C-1)、36.3(C-12)、34.9(C-2)、34.1(C-25)、33.2(C-23)、31.5(C-22)、26.4(C-30)、25.7(C-28)、23.9(C-6)、22.4(C-29)、22.0(C-26，19)、21.9(C-27)、17.6(C-18)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的豬苓酸C(polyporenic acid C)基本一致[11]，故確定化合物4為豬苓酸C。

化合物5：白色針狀結晶。溶于三氯甲烷、吡啶，紫外燈365 nm下有熒光；TLC展開后噴霧5%香草醛濃硫酸試劑顯紫色斑點。13C-NMR(C5D5N，125 MHz)δ：178.1(C-21)、170.5(CH3CO)、156.1(C-24)、145.8(C-9)、142.8(C-8)、120.7(C-7)、117.0(C-11)、107.1(C-31)、80.6(C-3)、76.4(C-16)、57.6(C-17)、49.6(C-5)、49.4(C-14)、48.5(C-20)、45.1(C-13)、44.4(C-15)、37.9(C-4)、37.6(C-10)、36.3(C-12)、35.6(C-1)、34.1(C-25)、33.2(C-23)、31.5(C-22)、28.2(C-28)、26.6(C-30)、24.6(C-2)、23.1(C-6)、22.8(C-19)、22.0(C-26)、21.9(C-27)、21.1(CH3CO)、17.6(C-18)、17.1(C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻報道的去氫茯苓酸(dehydropachymic acid)基本一致[12]，故確定化合物5為去氫茯苓酸。

4 討論

蔡明磊等[13]認為鄰苯二甲酸二(2-乙基-己基)酯是實驗材料在生產(chǎn)中的某些因素所引入的，本實驗在提取時使用的是銅制桶而不是塑料桶，其后的萃取、分離操作中也均為玻璃器具，因此可以排除化合物1和2是由實驗器材引入的可能性。古植物在深埋地下及化石形成過程中化學成分的結構可能會經(jīng)歷自身的氧化還原、降解和其他的化學反應等，但也可能會被完好無損地保留下來。趙有興[14]采用白堊紀(約1.2億年)銀杏葉化石、150年前銀杏葉和現(xiàn)代銀杏葉樣品成分進行GC-MS分析，發(fā)現(xiàn)鄰苯二甲酸二丁酯的含量分別為24.79%，2.82%和0.43%；鄰苯二甲酸二乙酯的含量分別為0.42%，1.16%，現(xiàn)代銀杏葉中含有微量鄰苯二甲酸二乙酯。綜合以上分析，可認為本實驗所分離得到的鄰苯二甲酸二丁酯和鄰苯二甲酸二(2-乙基-己基)是本身存在于茯苓植物體中。

[1] 王光忠，邵貝貝，鄧媛媛，等.RP-HPLC測定茯苓乙醇提取物中茯苓酸的含量[J].中國現(xiàn)代中藥，2012，14(1)：41-42.

[2] 王寧.茯苓的本草學研究[J].中醫(yī)文獻雜志，2007，25(3)：23-25.

[3] 楊樹東，包海鷹.茯苓中三萜類和多糖類成分的研究進展[J].菌物研究，2005，3(3)：55-61.

[4] 張思訪，劉靜涵，蔣建勤，等.茯苓的化學成分和藥理作用及開發(fā)利用[J].中華實用中西醫(yī)雜志，2005，18(2)：227-230.

[5] 王帥，姜艷艷，朱乃亮，等.茯苓化學成分分離與結構鑒定[J].北京中醫(yī)藥大學學報，2010，33(12)：841-844.

[6] 王利亞，萬惠杰，陳連喜，等.茯苓乙醚萃取物化學成分研究[J].中國中藥雜志，1993，18(10)：613-614.

[7] 何珊，張慶林，盧育新，等.茯苓乙醇提取物的分離純化及抗KBV200細胞多藥耐藥活性[J].國際藥學研究雜志，2012，39(1)：49-55.

[8] 孫奕，呂阿麗，魏嵐，等.石莼的化學成分研究(Ⅱ)[J].中國藥物化學雜志，2008，82(2)：135-137.

[9] 藍鳴生，羅超，譚昌恒，等.山風乙酸乙酯部位的化學成分研究[J].中藥材，2012，35(2)：229-231.

[10] 仲兆金，許先棟，周精華，等.茯苓三萜成分的結構及其衍生物的生物活性[J].中國藥物化學雜志，1998，8(4)：239-244.

[11] 仲兆金，劉浚.衍生法分離茯苓三萜[J].中藥材，2002，25(4)：247-250.

[12] Takaaki Tai, Tetsuro Shingu, Tohru Kikuchi,et al.Isolation of lanostane-type triterpene acids having an acetoxyl group from sclerotia of Poriacocs[J].Phytochemistory,1995，40(1)：225-229.

[13] 蔡明磊，高慧媛，黃健，等.冬凌草地上部分的化學成分研究[J].沈陽藥科大學學報，2008，25(11)：871-874.

[14] 趙友興.幾種裸子植物的古植物化學研究[D].昆明：中國科學院昆明植物研究所，2004.

LiposolubleCompoundsfromPoriacocos

HUJiali，XUYubin，DOUDeqiang*

(PharmacyCollegeofLiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine，Dalian116600，China)

Objective：To study the chemical constituents of Yun-Fu Ling，aiming at searching for bioactive natural products.MethodsPoriacocosdry power was refluxed，and then the extraction was concentrated and extracted successively with petroleum ether and ethyl acetate.Various chromatographic methods including normal phase silica gel，reversed phase ODS，and HPLC methods were used to isolate the compounds and the structure was elucidated by physicochemical properties and spectral analysis.ResultsFive compounds were isolated from the petroleum ether and ethyl acetate extracts，which were characterized as phthalic acid bis-(2-ethylhexyl)ester(1)，dibutyl phthalate(2)，pachymic acid(3)，polyporenic acid C(4)，dehydropachymic acid(5).ConclusionThe compounds1and2were isolated fromPoriacocosfor the first time.

Poriacocos；Liposoluble compound；Phthalates；Triterpene

國家重點基礎研究發(fā)展計劃(973計劃)(2013CB531803)；2013遼寧省高等學校創(chuàng)新團隊課題(LT2013020)

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竇德強，教授，博士生導師，研究方向：中藥藥效(性)物質(zhì)基礎及新藥開發(fā)研究；Tel：(0411)87406497，E-mail：deqiangdou@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.03.004

2013-09-27)