李卿

（廣西壯族自治區(qū)婦幼保健院藥劑科，廣西 南寧 530003 E-mail：83606449＠qq.com）

羥苯磺酸鈣（Calcium dobesilate）是一種微血管循環(huán)改善劑，臨床常用于糖尿病性視網(wǎng)膜病變、靜脈曲張綜合征等由微血管循環(huán)障礙引起的多種疾病的預(yù)防和治療[1-3]。目前，進(jìn)口和國內(nèi)生產(chǎn)的羥苯磺酸鈣主要為膠囊劑，羥苯磺酸鈣膠囊（Calcium Dobesilate Capsules）是由奧地利依比威藥品有限公司進(jìn)口國內(nèi)的眼科用藥，商品名為DOXIUM○R，為《中國藥典》2010版二部[4]收載品種。該藥溶出度研究主要參考國家標(biāo)準(zhǔn) WS1- （X-068）-2003Z，采用0.1mol／L HCl為介質(zhì)進(jìn)行的試驗。目前仿制藥溶出度研究已成為國家新藥審評中心關(guān)注內(nèi)容，現(xiàn)今仿制藥審評中心已全面引入體外溶出曲線評價模式。本文通過在0.1mol／L HCl溶液、pH＝4.5醋酸鹽緩沖液、pH＝6.8磷酸鹽緩沖液及水4種介質(zhì)[5]中羥苯磺酸鈣膠囊自制制劑與對照制劑的溶出行為對比研究，為羥苯磺酸鈣膠囊仿制藥的研究及申報提供資料。

1 儀器與試藥

ZRS-8G溶出試驗儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；UV2450型紫外-可見光分光光度計（日本島津）；AB-135-S電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）；PHS-25型pH計（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；0.45μm有機濾膜（天津津騰實驗設(shè)備有限公司）；0.45μm水相濾膜（天津津騰實驗設(shè)備有限公司）；羥苯磺酸鈣對照品（批號：100573-200401，由中國藥品生物制品檢定所提供）；羥苯磺酸鈣膠囊對照制劑（批號：18801802，奧地利依比威藥品有限公司）；羥苯磺酸鈣膠囊自制制劑1（批號：1011199）、羥苯磺酸鈣膠囊自制制劑2（批號：1009145）及空輔由國內(nèi)某制藥公司提供；醋酸銨、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、醋酸、鹽酸均為分析純，購于國藥集團化學(xué)試劑有限公司；實驗用水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶出介質(zhì)的配制 ①水：直接取純化水。②0.1mol／L HCl：按《中國藥典》2010年版二部[4]方法配制，取濃鹽酸9ml，加水稀釋至1000ml，搖勻，即得0.1mol／L HCl溶液。③pH＝4.5醋酸鹽：按《中國藥典》2010年版二部[4]方法配制，取醋酸銨7.7g加水50ml溶解后，加冰醋酸6ml，加水稀釋至100 ml，搖勻，即得pH＝4.5醋酸鹽緩沖液。④pH＝6.8磷酸鹽：按《中國藥典》2010年版二部[4]方法配制，取0.2mol／L磷酸二氫鈉溶液250ml，加0.2mol／L氫氧化鈉溶液118ml，用水稀釋至1000ml，搖勻，即得pH＝6.8磷酸鹽緩沖液。

2.2 測定方法 取羥苯磺酸鈣制劑，照溶出度測定法[6]操作。分別取“2.1”項下的溶出介質(zhì)各900ml，采用《中國藥典》2010年版二部附錄ⅩC第二法，調(diào)定轉(zhuǎn)速為50r／min，取羥苯磺酸鈣膠囊自制制劑6粒，依法操作，不同時間點分別取溶液適量，并同時補充相同溫度，相同體積的溶出介質(zhì)，濾過，濾液用相應(yīng)溶出介質(zhì)稀釋成每1ml中約含25μg的溶液，另取羥苯磺酸鈣對照品適量，加相應(yīng)介質(zhì)溶解并稀釋成每1ml中約含25μg的溶液，取上述兩種溶液按照分光光度法（《中國藥典》2010年版二部附錄ⅣA），在301nm的波長處分別測定吸光度，按二者吸光度的比值計算累計溶出量。另取羥苯磺酸鈣膠囊對照制劑，平行操作，測定其在不同溶出介質(zhì)中各對應(yīng)時間點的累計溶出量。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取干燥至恒重的羥苯磺酸鈣對照品10 mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加0.1mol／L鹽酸溶液溶解并稀釋到刻度，搖勻，配制成100μg／ml的溶液，分別吸取1 ml、2ml、2.5ml、3ml、4ml至10ml，配成濃度分別為10μg／ml、20μg／ml、25μg／ml、30μg／ml、40μg／ml的溶液，測定其在301nm處的吸光度值，以樣品的濃度（C，mg／ml）為橫坐標(biāo)，吸光度值（A）為縱坐標(biāo)，作二次回歸得到回歸方程及相關(guān)系數(shù)，回歸方程為A＝0.0159 C＋0.03，r＝0.9999，表明線性關(guān)系良好，線性范圍10.00～40.00mg／ml。

2.4 專屬性試驗 取羥苯磺酸鈣膠囊自制制劑適量，精密稱定，加0.1mol／L HCl溶液溶解并稀釋成每1ml中約含25μg的溶液，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取空輔適量，按供試品溶液配制方法配制。精密量取空輔溶液、供試品溶液及“2.2”項下對照品溶液進(jìn)行波長掃描，結(jié)果空輔溶液在301nm處無吸收干擾，表明空輔不干擾本品溶出度的測定。

2.5 重復(fù)性試驗 取羥苯磺酸鈣膠囊自制制劑6粒，照溶出度測定法（《中國藥典》2010年版二部附錄XC第二法），以0.1 mol／L HCl溶液900ml為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50r／min，依法操作，于60min時，取溶液適量，濾過，精密量取續(xù)濾液適量，用0.1mol／L鹽酸溶液稀釋成每1ml中約含25μg的樣品溶液。分別將6份樣品在301nm測定其吸光度值，計算6個樣品的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。羥苯磺酸鈣膠囊自制制劑6份樣品測定結(jié)果相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.63%，不大于2%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.6 溶液穩(wěn)定性試驗 取重復(fù)性試驗項下6號樣品液，于室溫下放置0、2、4、6、8、12h用紫外-可見分光光度法測定其在301nm處的吸光度值，計算羥苯磺酸鈣的A的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。室溫放置12h，主成分含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.56%，不大于2%，可認(rèn)為室溫放置12h內(nèi)樣品溶液穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗 回收率采用空白回收法，精密稱定9份空白輔料和羥苯磺酸鈣標(biāo)示量的80%、100%、120%裝入膠囊中，按照羥苯磺酸鈣膠囊的溶出方法，分別將膠囊投入溶出杯中，待結(jié)束時取出樣品溶液進(jìn)行測定，計算平均回收率及RSD值，結(jié)果見表1。在高、中、低三個不同濃度下，本品羥苯磺酸鈣的回收率均在98%～102%之間，且各次測得結(jié)果間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2%，表明本方法回收率良好。

表1 回收率試驗測定結(jié)果 （n＝9）

2.8 溶出度及溶出曲線測定結(jié)果 分別在4種介質(zhì)中，按“2.1”項下方法測定，得羥苯磺酸鈣膠囊自制制劑與對照制劑在4種介質(zhì)中累積溶出度曲線（見圖1）。

圖1 自制羥苯磺酸鈣膠囊和參比制劑在4種介質(zhì)中的溶出曲線

采用美國FDA推薦使用的相似因子法[7]，計算公式如下：

其中，Ti和Ri分別為各取樣時間點自制制劑和參比制劑的平均溶出率，n為取樣時間點的個數(shù)。如果50≤f2≤100，則表示兩藥的溶出曲線差異無統(tǒng)計學(xué)意義，如果f2＜50，則認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。以相似因子法來判斷自制制劑與參比制劑是否相似，結(jié)果見表2。

表2 以對照制劑為對照的自制制劑的相似因子

由表2可以看出，自制羥苯磺酸鈣膠囊在4種介質(zhì)中f2值＞50，與對照制劑的溶出曲線差異無統(tǒng)計學(xué)意義。但由于處方因素，制備工藝的不同，除了在0.1mol／L HCl介質(zhì)中，自制羥苯磺酸鈣膠囊在其他3種介質(zhì)中累積百分溶出率均優(yōu)于對照制劑。

3 討論

3.1 溶出介質(zhì)的選擇 通過飽和溶解度實驗結(jié)果證明羥苯磺酸鈣在0.1mol／L HCl、pH 4.5、pH 6.8、水中易溶。參照日本藥典第15版附錄“溶出度試驗法”，選擇0.1mol／L HCl溶液、pH＝4.5、pH＝6.8緩沖液及水4種介質(zhì)，模擬不同體質(zhì)的胃液生理環(huán)境，擴大藥物的適用人群。考慮試驗時間較長，本研究參考國家標(biāo)準(zhǔn) WS1-（X-068）-2003Z，采用0.1mol／L HCl為主要介質(zhì)及溶劑進(jìn)行的各項試驗。

3.2 溶出方法確定 目前羥苯磺酸鈣溶出度研究主要參考國家標(biāo)準(zhǔn) WS1- （X-068）-2003Z，采用0.1mol／L HCl為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為50r／min，溶出20min，依法測定，溶出量應(yīng)為標(biāo)示量的80%。筆者通過對照制劑進(jìn)行方法驗證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)溶出量并非如上標(biāo)準(zhǔn)所述20min＞80%，因此對羥苯磺酸鈣膠囊的溶出方法進(jìn)行建立及優(yōu)化，通過多次測定對照制劑的溶出曲線結(jié)果及溶出現(xiàn)象分析，最終確定本品在不同介質(zhì)中的溶出測定方法。本文對不同介質(zhì)中羥苯磺酸鈣膠囊自制制劑與對照制劑的溶出行為進(jìn)行對比研究，為羥苯磺酸鈣膠囊的溶出度試驗質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立提供了依據(jù)。

3.3 濾膜吸附試驗 本實驗采用0.45μm濾膜濾過樣品，考慮到樣品過濾時有損失，故進(jìn)行濾膜吸附試驗。按溶出度方法取出溶出液7份，將其中1份溶液在3000r／min離心機中離心10min，作為離心供試品溶液，將其中3份樣品過有機膜（0.45μm），剩余3份樣品過水膜（0.45μm），過濾體積分別為3ml、5ml、8ml。取續(xù)濾液稀釋后，即得濾過樣品溶液。水膜、有機膜（0.45mm）濾過5ml供試品溶液與離心供試品溶液測得吸光度比值在0.98～1.02之間，可認(rèn)為吸附飽和，樣品不存在濾膜吸附現(xiàn)象。因此，實驗中是將取出的溶出液，過濾，棄去5ml初濾液，再取續(xù)濾液進(jìn)行測定，濾膜吸附對本品溶出度檢測無影響。

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