陳 萍，李海軍

（1.重慶市長壽區(qū)人民醫(yī)院眼科，重慶 401220；2.第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所眼科，重慶 400042）

糖尿病性視網(wǎng)膜病變（DR）是糖尿病最常見的并發(fā)癥之一，最終會導(dǎo)致雙眼不可逆性失明。DR的發(fā)病機制一直在探討之中，血管內(nèi)皮細胞生長因子（VEGF）在糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生、發(fā)展過程中所起的作用已獲得一定的認可［1］，有報道［2］認為抵抗素（Resist）能誘導(dǎo)VEGF產(chǎn)生，也有報道［3］抵抗素水平與糖尿病視網(wǎng)膜病變嚴重程度具有相關(guān)性，本研究通過探討血清抵抗素Resist與血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的關(guān)系，為闡明糖尿病性視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機制及治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2009年12月～20013年6月期間本院眼科就診且確診為糖尿病性視網(wǎng)膜病變的患者107例為實驗組，男49例，女58例，年齡（65.17±11.48）歲，診斷分期按照糖尿病性視網(wǎng)膜病變新的國際臨床分級標準（2002年）進行分級［4］，其中Ⅰ期18例35眼、Ⅱ期20例40眼、Ⅲ期17例34眼，Ⅳ期19例38眼、Ⅴ期17例34眼、Ⅵ期16例32眼，均為Ⅱ型糖尿病；另取20例無視網(wǎng)膜病變的Ⅱ型糖尿病患者為糖尿病組，男12例，女8例，年齡（64.81±12.17）歲；20例健康體檢的健康志愿者為對照組，男11例，女9例，年齡（64.02±11.86）歲。三組年齡、性別比無顯著差異（均為P＞0.05），具有可比性。所有研究對象均排除糖尿病急性并發(fā)癥、惡性腫瘤、一個月內(nèi)使用胰島素、胰島素增敏劑、影響糖代謝的藥物服用史及嚴重肝、腎功能不全者。

1.2 研究方法 三組患者均于清晨采集空腹肘靜脈血5ml，靜置30min，3000轉(zhuǎn)／分離心20min，取血清貯存在一80℃冰箱備檢。采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法檢測血清VEGF與抵抗素的水平，抵抗素試劑盒購自上海軒昊科技公司，靈敏度：0.05ng／ml，人VEGF ELISA試劑盒購自深圳晶美生物工程公司，最小可測值為30pg／ml，所有檢測步驟嚴格按照試劑盒說明書操作，采用BIO－RAD550型酶標儀檢測，在450nm處讀取OD值后按標準曲線換算成血清含量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，計量資料采用均數(shù)±標準差（）表示，多組間計量資料比較采用ANOVA方差分析，多個樣本均數(shù)的兩兩比較采用LSD－T檢驗，以Pearson相關(guān)分析的方法來分析兩組數(shù)據(jù)間的相關(guān)性，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清抵抗素與血清VEGF在各組差異 實驗組血清抵抗素與血清VEGF水平顯著高于無視網(wǎng)膜病變的糖尿病組和對照組（P＜0.05），糖尿病組高于對照組（P＜0.05），見表1。

表1 各組血清抵抗素Resist與VEGF水平的比較（）Table 1 The resist and VEGF of the patients

表1 各組血清抵抗素Resist與VEGF水平的比較（）Table 1 The resist and VEGF of the patients

注：與對照組比較①P＜0.05，與糖尿病組比較②P＜0.05

組別 n Resist（ng／ml） VEGF（pg／ml）0.00120 5.76±0.12 47.85±13.71糖尿病組 20 6.51±0.23① 59.85±14.49①實驗組 107 9.09±2.56①② 149.43±76.55①②F／p 85.74／0.001 97.61／對照組

2.2 隨著視網(wǎng)膜病變的發(fā)展，血清抵抗素Resist與VEGF水平逐漸升高，在各期間兩兩比較，有顯著差異（P＜0.05），見表2。

表2 不同分期糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者血清抵抗素Resist與VEGF水平的比較（）Table 2 The resist and VEGF of different stage of diabetic retinopathy

表2 不同分期糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者血清抵抗素Resist與VEGF水平的比較（）Table 2 The resist and VEGF of different stage of diabetic retinopathy

注：與Ⅰ期比較①P＜0.05，與Ⅱ期比較②P＜0.05，與Ⅲ期比較③P＜0.05，與Ⅳ期比較④P＜0.05，與Ⅴ期比較⑤P＜0.05

分期 n Resist（ng／ml） VEGF（pg／ml）0.00118 6.72±0.34 68.43±17.55Ⅱ期 20 7.49±0.25① 86.91±19.22①Ⅲ期 17 8.21±0.56①② 99.75±20.24①②Ⅳ期 19 9.34±0.78①②③ 131.65±34.49①②③Ⅴ期 17 9.89±1.17①②③④ 160.18±49.43①②③④Ⅵ期 16 10.11±1.53①②③④ 187.46±63.42①②③④⑤F／p 265.1／0.001 140.25／Ⅰ期

2.3 糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者血清抵抗素Resist與VEGF水平的相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析顯示，糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者血清血清抵抗素Resist與VEGF水平呈正相關(guān)（r＝0.027，P＝0.001），見圖1。

圖1 糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者血清抵抗素Resist與VEGF水平的相關(guān)性分析Figure 1 The relation of resist and VEGF

3 討論

新生血管形成使視網(wǎng)膜毛細血管功能紊亂、硬化與閉塞導(dǎo)致視網(wǎng)膜血液循環(huán)障礙，致使視網(wǎng)膜出血及滲出、神經(jīng)纖維層微小梗死是糖尿病視網(wǎng)膜病變的主要病理改變。但目前糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)病機制尚在探討之中，除了缺血、缺氧及炎癥誘導(dǎo)的血管生成因子與抑制因子之間的不平衡是導(dǎo)致眼部新生血管形成外，也有多種細胞因子在糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展中起作用，其中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）被認為是眼部最主要的促血管生成因子，有效抑制VEGF的過度分泌可以治療糖尿病視網(wǎng)膜病變，但仍有許多患者對抗VEGF治療并無強烈的反應(yīng)，這提示或許還有其它的因子參與了新生血管形成［5］，荊愛玉等［6］發(fā)現(xiàn)：空腹血漿抵抗素水平在糖尿病微血管病的發(fā)生、發(fā)展中可能起一定作用，抵抗素是一種脂肪內(nèi)分泌因子，可以引起胰島素抵抗，與糖尿病和肥胖有關(guān)［7］，但關(guān)于糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者血清抵抗素與血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的關(guān)系尚未見報道。

本研究對Ⅱ型糖尿病視網(wǎng)膜病變患者、無視網(wǎng)膜病變的Ⅱ型糖尿病患者及健康志愿者對比發(fā)現(xiàn)：糖尿病視網(wǎng)膜病變患者血清抵抗素與血清VEGF水平顯著高于無視網(wǎng)膜病變的Ⅱ型糖尿病患者和健康者，無視網(wǎng)膜病變的Ⅱ型糖尿病患者高于健康者，表明無視網(wǎng)膜病變時糖尿病患者的體內(nèi)血清抵抗素與血清VEGF已經(jīng)有了變化，糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)病隱匿而且進展緩慢［8］。Ⅰ期、Ⅱ期和Ⅲ期為單純型病變，即非增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變，非增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變發(fā)展到一定程度時由于新生血管過度增殖，在視網(wǎng)膜組織附近逐漸形成纖維條帶，視網(wǎng)膜受到牽拉，會進一步發(fā)展為形成增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變，即Ⅳ期、Ⅴ期和Ⅵ期為增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變，本研究發(fā)現(xiàn)：隨著視網(wǎng)膜病變程度的發(fā)展，Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期、Ⅴ期和Ⅵ期血清抵抗素與血清VEGF水平逐漸升高，在各期兩兩之間有顯著差異，血清抵抗素與血清VEGF隨著糖尿病性視網(wǎng)膜病變程度加重而升高，VEGF的增加主要是由視網(wǎng)膜Muller細胞分泌的［9］。VEGF是一種促新生血管形成的生長因子，且能刺激內(nèi)皮細胞基底膜，使其上有明顯血管樣管道形成，VEGF通過兩種酪氨酸激酶受體（VEGFR－1和 VEGFR－2）對血管細胞發(fā)生作用，這兩種受體是視網(wǎng)膜血管和神經(jīng)的組成成分，VEGFR－2主要存在于星形膠質(zhì)細胞、Muller細胞、神經(jīng)節(jié)細胞以及視網(wǎng)膜色素上皮細胞中，過量的VEGF促進大量的新生血管形成，導(dǎo)致了糖尿病性視網(wǎng)膜病變。本研究結(jié)果一方面驗證了糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者有過度分泌的VEGF，另一方面提示血清抵抗素與糖尿病性視網(wǎng)膜病變的發(fā)展具有某種聯(lián)系。

本研究在相關(guān)性分析中發(fā)現(xiàn)：糖尿病視網(wǎng)膜病變患者的血清抵抗素與血清VEGF水平具有正相關(guān)性，表明血清抵抗素可能通過參與新生血管形成而促進糖尿病性視網(wǎng)膜病變的進展，有研究［10］認為：抵抗素與Ⅱ型糖尿病患者的并發(fā)心血管病變密切相關(guān)，也有研究［11］認為：抵抗素可以通過促進內(nèi)皮細胞增殖和遷移，促進毛細血管樣管道形成，上調(diào)VEGF受體和MMP以及激活ERK1／2、p38MAPK途徑磷酸化作用，促進新生血管形成。由于目前相關(guān)文獻少，對血清抵抗素與血清VEGF水平在糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的作用機制未形成定論，進行需要進一步分析研究非增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變與增殖性糖尿病性視網(wǎng)膜病變患者血清抵抗素與血清VEGF水平的差異及血清抵抗素與血清VEGF在糖尿病性視網(wǎng)膜病變中的作用機制。

4 結(jié)論

血清抵抗素與血清VEGF隨著糖尿病性視網(wǎng)膜病變程度加重而升高，血清抵抗素與血清VEGF水平具有正相關(guān)性，血清抵抗素可能通過參與新生血管形成而促進糖尿病性視網(wǎng)膜病變的進展。

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