張寶彤，張 波，蕭培珍，王麗宏

（1.北京市營(yíng)養(yǎng)源研究所，北京豐臺(tái) 100069；2.北京桑普生物化學(xué)技術(shù)有限公司技術(shù)中心，北京豐臺(tái) 100069）

姜黃素是從藥用植物姜黃的根莖中分離得到的一種疏水性多酚復(fù)合物，其色澤穩(wěn)定且?guī)缀鯚o毒（沃興德等，2000）。研究表明，姜黃素是姜黃的主要活性組成部分，具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗癌的作用（Kunnumakkara等，2008）。傳統(tǒng)上常使用姜黃來治療多種疾病，目前被廣泛地用作食用色素和調(diào)味劑。本試驗(yàn)以羅非魚為試驗(yàn)對(duì)象，研究姜黃素對(duì)羅非魚生長(zhǎng)性能、血清生理生化指標(biāo)及腸道組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響，旨為姜黃素在羅非魚上的合理應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與日糧 2088尾初始體重（84.29±0.16）g的羅非魚隨機(jī)分為6個(gè)組，每個(gè)組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)58尾。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，5個(gè)試驗(yàn)組在對(duì)照組的基礎(chǔ)上分別添加10、15、30、50、100 mg/kg 的姜黃素，分別記作 S10、S15、S30、S50、S100組。試驗(yàn)時(shí)間為2011年7～10月，預(yù)飼期1周，正式期10周。

姜黃素由北京桑普生物化學(xué)技術(shù)有限公司研制，純度80%以上?；A(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平%

飼養(yǎng)試驗(yàn)在廣州和順試驗(yàn)基地進(jìn)行，所用網(wǎng)箱體積為 2 m × 2 m × 2 m。 每天于 8∶00、12∶00、16∶303次投喂，每天做好水溫、投餌量、死魚數(shù)量等記錄。水溫23～28℃，投飼率按照體重的2%～3%進(jìn)行投喂，同時(shí)根據(jù)攝食情況和水溫進(jìn)行不同比例投飼率的調(diào)節(jié)。每周測(cè)定1次水質(zhì)。6種飼料分別留樣，測(cè)定其相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)成分。

1.2 生長(zhǎng)試驗(yàn) 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，試驗(yàn)魚禁食24 h，以網(wǎng)箱為單位稱總重并記錄，用于計(jì)算存活率、增重率、特定生長(zhǎng)率和飼料系數(shù)。

存活率/%=試驗(yàn)?zāi)~尾數(shù)/試驗(yàn)魚初尾數(shù)×100；

增重率/%=（魚體終重-魚體初重）/魚體初重×100；

特定生長(zhǎng)率/%=ln（魚體終重-魚體初重）/飼養(yǎng)天數(shù)×100；

飼料系數(shù)/%=每個(gè)重復(fù)飼料消耗量/（魚體終重+死亡魚重-魚初重）×100；

肥滿度/%＝體重/體長(zhǎng)3×100；

內(nèi)臟指數(shù)/%＝內(nèi)臟重/體重×100。

1.3 樣品采集與測(cè)定 飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取10尾測(cè)量體重、體長(zhǎng)、體高，解剖取內(nèi)臟，稱量空殼重，分離肝胰臟和肌肉并分別稱重，肝胰臟及肌肉于-70℃保存。同時(shí)尾靜脈采集全血，3000 r/min、4℃離心 10 min制備血清。血清用于超氧物歧化酶（SOD）、溶菌酶活性的測(cè)定。

取肝胰臟稱重，按照 1∶9（g/mL）加入生理鹽水（4℃），迅速轉(zhuǎn)入玻璃勻漿器勻漿（冰浴），將勻漿液離心（4 ℃、3500 r/min）15 min，上清液用于丙二醛（MDA）含量、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）活性的測(cè)定。

試驗(yàn)所用試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究中心。采用凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)含量，索氏抽提法測(cè)定脂肪含量。

1.4 腸道組織切片 取體重相近樣本魚，切取中腸，均為距離前腸末端7 cm處。用波恩氏液固定，取適量大小的組織塊用生理鹽水進(jìn)行清洗、包埋固定、修塊、切片（厚度為 3 ～ 4 μm）、染色、干燥、封片、照相，進(jìn)行顯微結(jié)構(gòu)的觀察。

1.5 數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)以重復(fù)為單位進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。采用SAS 8.0統(tǒng)計(jì)軟件的GLM模型進(jìn)行單因素方差分析，以P<0.05為差異顯著水平，差異顯著的進(jìn)行Duncan’s多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 姜黃素對(duì)羅非魚生長(zhǎng)性能的影響 由表2可知，日糧添加不同水平的姜黃素顯著提高了羅非魚增重率和特定生長(zhǎng)率（P<0.05），顯著降低了飼料系數(shù)（P<0.05），其中S30組效果最好，增重率和特定生長(zhǎng)率分別較對(duì)照組提高12.56%和8.02%，飼料系數(shù)降低10.45%。

表2 姜黃素對(duì)羅非魚生長(zhǎng)性能的影響

2.2 姜黃素對(duì)羅非魚形體指標(biāo)和魚體營(yíng)養(yǎng)成分的影響 由表3可見，姜黃素對(duì)羅非魚內(nèi)臟指數(shù)無顯著影響，但S30組內(nèi)臟指數(shù)最?。籗50肥滿度組最高。全魚水分、蛋白質(zhì)含量各組間無顯著差異。10～50 mg/kg姜黃素顯著降低了全魚脂肪含量（P<0.05）。

表3 對(duì)羅非魚形體指標(biāo)和魚體營(yíng)養(yǎng)成分的影響%

2.3 姜黃素對(duì)羅非魚肝臟轉(zhuǎn)氨酶活性和丙二醛含量的影響 由表4可見，姜黃素顯著降低了肝臟丙二醛含量。10～50 mg/kg姜黃素顯著降低了肝臟谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性（P<0.05），而100 mg/kg姜黃素顯著提高了肝臟谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性（P<0.05）。

表4 姜黃素對(duì)羅非魚肝臟轉(zhuǎn)氨酶活性和丙二醛含量的影響

2.4 姜黃素對(duì)羅非魚血清生化指標(biāo)的影響 由表5可見，30 mg/kg的姜黃素顯著提高了血清SOD酶活性。隨著姜黃素添加水平的升高，溶菌酶的活力呈先升高后下降的趨勢(shì)（P<0.05）。

表5 姜黃素對(duì)羅非魚血清中SOD和溶菌酶含量的影響U/mL

2.5 姜黃素對(duì)羅非魚腸道組織結(jié)構(gòu)的影響 由表6可見，姜黃素顯著提高了腸道絨毛數(shù)，而各姜黃素添加組間絨毛個(gè)數(shù)無顯著差異。15～50 mg/kg的姜黃素顯著提高了腸道絨毛高度，其中30 mg/kg組絨毛高度最高，比對(duì)照組提高了36.53%（P<0.05）。

表6 姜黃素對(duì)羅非魚中腸絨毛數(shù)量和高度的影響

3 討論

胡忠澤等（2003）研究表明，姜黃素（30 mg/kg）顯著地提高了羅非魚的增重率和特定生長(zhǎng)率，顯著降低了飼料系數(shù)，其原因可能與添加姜黃素提高了消化酶活力有關(guān)，且隨著姜黃素用量的增加，草魚腸道淀粉酶的活力逐漸升高。而超過一定用量時(shí)，淀粉酶的活力反而下降（胡忠澤等，2003），這與本試驗(yàn)增重率變化趨勢(shì)一致。余建國(guó)與朱樓英（2010）研究認(rèn)為，日糧中添加一定量姜黃素提高機(jī)體生長(zhǎng)也可能與T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率和NK細(xì)胞活性升高有關(guān)，但需進(jìn)一步試驗(yàn)的驗(yàn)證。

肝臟是機(jī)體最大物質(zhì)的代謝和營(yíng)養(yǎng)吸收的場(chǎng)所。肝臟的健康對(duì)于機(jī)體來說至關(guān)重要。轉(zhuǎn)氨酶是催化氨基酸氧化分解時(shí)氨基轉(zhuǎn)移到α-酮酸的酶，正常情況下主要存在于肝細(xì)胞內(nèi)，在血清中的含量也很低。血清轉(zhuǎn)氨酶活力大小是判斷肝功能是否正常的重要指標(biāo)之一。本試驗(yàn)羅非魚日糧中添加10～50 mg/kg姜黃素使得肝臟谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著低于對(duì)照組，這說明添加一定劑量的姜黃素有助于肝臟健康；而高劑量（100 mg/kg）的姜黃素使得谷草轉(zhuǎn)氨酶活性升高，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生一定的副作用。據(jù)報(bào)道，高劑量的姜黃素（5%）致使大、小鼠肝臟毒性，表現(xiàn)為局部壞死或再生（Deshpande 等，1998）。

丙二醛的含量是判斷肝臟健康狀況的另一個(gè)敏感指標(biāo)。丙二醛是生物體內(nèi)自由基作用于脂質(zhì)發(fā)生過氧化反應(yīng)后的氧化終產(chǎn)物，具有細(xì)胞毒性。添加一定劑量的姜黃素降低了肝臟丙二醛含量，減輕了其對(duì)細(xì)胞的毒害作用，有利于機(jī)體的健康，直接表現(xiàn)為羅非魚生長(zhǎng)性能的提高。姜黃素是天然的抗氧化劑，具有較強(qiáng)的抗氧化作用（石晶等，1997），其對(duì)肝臟的保護(hù)作用可能與清除自由基有關(guān)，其詳細(xì)機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。

魚類屬較低等的變溫脊椎動(dòng)物，其特異性免疫應(yīng)答能力相對(duì)低下，因此非特異性免疫在其免疫防御中具有重要意義。溶菌酶是一種非特異性體液免疫因子，廣泛存在于魚類體表黏液、腸道黏液、血清和巨噬細(xì)胞中，其活性變化可以反映魚類非特異性免疫力的變化，即溶菌酶活性升高，魚類的非特異性免疫功能增強(qiáng)。本試驗(yàn)條件下日糧中添加姜黃素顯著提高了血清溶菌酶的活性。

腸上皮的完整性是保證腸道機(jī)械屏障功能正常的關(guān)鍵。魚體腸道除了是最大的消化、吸收器官外，也是最大的內(nèi)分泌器官、最大的免疫防御器官?？诜S素有40%～75%未產(chǎn)生變化而經(jīng)過胃腸道，被吸收的姜黃素主要在小腸黏膜和肝臟代謝（Deshpande等，1998）?？梢娔c道黏膜的完整性對(duì)魚體健康、生長(zhǎng)和代謝具有重要的作用。宋衛(wèi)兵等（2008）對(duì)大鼠的試驗(yàn)表明，姜黃素可以作為腸黏膜機(jī)械屏障有效的保護(hù)劑，且具有良好的抗炎作用。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)添加一定劑量的姜黃素顯著增加了腸道絨毛高度和絨毛數(shù)量，提示魚體腸道組織發(fā)育良好，姜黃素對(duì)于維護(hù)腸黏膜結(jié)構(gòu)完整具有重要意義，但其作用機(jī)理仍需進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

4.1 在本試驗(yàn)條件下，飼料中添加姜黃素有利于促進(jìn)腸道健康，能夠提高飼料轉(zhuǎn)化效率和羅非魚的生長(zhǎng)速度，降低餌料系數(shù)，最適添加量為30 mg/kg。

4.2 飼料中添加姜黃素，能降低魚體肝臟轉(zhuǎn)氨酶活性，降低脂質(zhì)過氧化物對(duì)魚體損傷的作用，提高魚體免疫力，保證魚體的健康。

[1]胡忠澤，楊久峰，譚志靜，等.姜黃素對(duì)草魚生長(zhǎng)和腸道酶活力的影響[J].糧食與飼料工業(yè)，2003，11：29 ～ 30.

[2]石晶，王中孝，田亞平，等.姜黃素對(duì)高脂血癥大鼠血漿和肝臟超氧化物歧化酶和脂質(zhì)過氧化的影響[J].中草藥，1997，28（5）：285 ～ 287.

[3]宋衛(wèi)兵，張振書，肖冰，等.姜黃素對(duì)腸粘膜損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，28（1）：119 ～ 121.

[4]沃興德，洪行球，高承賢.姜黃素最大耐受實(shí)驗(yàn)[J].浙江中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2000，24（2）：55.

[5]余建國(guó)，朱樓英.姜黃素對(duì)雛雞T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化功能的影響[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2010，6：32 ～ 33.

[6]Deshpande S S，Lalitha V S，Ingle A D，et al.Subchronic oral toxicity of turmeric and ethanolic turmeric extract in female mice and rats[J].Toxicol Lett，1998，95：183 ～ 193.

[7]Kunnumakkara A B，Diagaradjane P，Guha S，et al.Curcumin sensitizes human colorectal cancer xenografts in nude mice to gamma-radiation by targeting nuclear factor-kappaBregulated gene products[J].Clin Cancer Res，2008，14：2128 ～ 2136.■