劉俊慧　閭愛斌　徐士榮　徐紅珍　張善輝

【摘要】 目的 探討肝細(xì)胞癌患者檢測基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶（m-AST）的臨床意義。方法 對40例肝細(xì)胞癌（不同病情）患者（肝細(xì)胞癌組）與40例對照組血清中MMP-9、m-AST檢測結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果 肝細(xì)胞癌組與對照組血清中MMP-9、m-AST比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；肝細(xì)胞癌患者血清中MMP-9、m-AST與患者有無合并腹水、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、病理分化程度有關(guān)， 其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 MMP-9、m-AST與肝細(xì)胞癌密切相關(guān)， 可能是肝細(xì)胞癌的診斷和治療的重要線索， 其濃度水平對肝細(xì)胞癌的病情變化具有重要的價值。

【關(guān)鍵詞】 基質(zhì)金屬蛋白酶-9；天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶 ；肝細(xì)胞癌

Clinical significance of serum MMP-9 and m-AST detection in hepatocellular carcinoma LIU Jun-hui， LYU Ai-bin， XU Shi-rong， et al. Department of Clinical Laboratory， Taizhou Second Affiliated Hospital of Yangzhou University， Taizhou 225599， China

【Abstract】 Objective To investigate the clinical significance of matrix metallo preteinases-9 （MMP-9） and mitochondrial aspartic transaminase （m-AST） detection in hepatocellular carcinoma. Methods Levels of serum MMP-9 and m-AST of 40 patients of hepatocellular carcinoma with different conditions （hepatocellular carcinoma group） and 40 control cases were compared. Results The differences of serum MMP-9 and m-AST between hepatocellular carcinoma group and control group had statistical significance （P<0.05）. Levels of serum MMP-9 and m-AST of hepatocellular carcinoma cases were related with ascites， tumor quantity and size， differentiation grade， and the differences were statistically significant （P<0.05）. Conclusion MMP-9 and m-AST have close relation with hepatocellular carcinoma， and they play important roles in diagnosis and treatment of hepatocellular carcinoma. Concentration levels of MMP-9 and m-AST have important value for change of hepatocellular carcinoma.

【Key words】 Matrix metalloproteinase-9； Mitochondrial aspartic transaminase； Hepatocellular carcinoma

中國肝癌的發(fā)病率僅次于肺癌和胃癌， 而其死亡率在中國腫瘤病中列第二位[1]。肝細(xì)胞癌是原發(fā)性肝癌的主要類型， 其發(fā)病過程復(fù)雜， 很多機制尚不明確。本研究通過測定肝細(xì)胞癌患者血清中MMP-9、m-AST， 觀察這兩種酶在肝細(xì)胞癌發(fā)生、發(fā)展中所起的作用。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 40例肝細(xì)胞癌患者均來源于本院2012年2月～2014年2月腫瘤科住院的患者。其中男29例， 女11例， 年齡32～71歲， 平均年齡（52.8±15.3）歲。所有患者均經(jīng)過病理組織學(xué)確診， 且臨床分期明確。對照組40例為本院體檢中心健康體檢者。兩組一般資料比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 80例受試者均空腹12 h， 清晨采靜脈血4 ml于一次性真空采血管中， 在1 h內(nèi)以3000 r/min離心10 min分離血清置于-30℃冰箱保存待測。MMP-9用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗（ ELISA） 法檢測（ 試劑盒為深圳晶美公司產(chǎn)品） ， 用抗人單克隆抗體預(yù)包被酶聯(lián)板， 加入待測樣品及標(biāo)準(zhǔn)品， 再加酶標(biāo)抗體， 催化顯色， 使用瑞士TECAN 全自動酶聯(lián)檢測儀測光密度值， 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線測得樣品濃度。m-AST的活性用速率法原理檢測， 首先運用免疫抑制法的原理， 使用特異性抗體抑制血清中天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶細(xì)胞質(zhì)同工酶（s-AST）的活性， 而保留m-AST的活性， 然后加入底物L(fēng)-天門冬氨酸和α-酮戊二酸反應(yīng)生成草酰乙酸和L-谷氨酸。草酰乙酸再跟指示系統(tǒng)還原輔酶（NADH）反應(yīng)在340 nm處， 連續(xù)監(jiān)測NADH下降吸光度值， 通過下降速率計算m-AST濃度。

1. 3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x-±s）表示， 采用t檢驗；多組間比較用方差分析。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。endprint

2 結(jié)果

2. 1 肝細(xì)胞癌組與對照組血清中MMP-9、m-AST比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）， 見表1。

2. 2 肝細(xì)胞癌患者血清中MMP-9、m-AST水平與病情情況分析 肝細(xì)胞癌患者血清中MMP-9、m-AST與患者有無合并腹水、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、病理分化程度有關(guān)， 其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）， 見表2。

3 討論

MMP-9正常情況下主要由纖維母細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等間質(zhì)細(xì)胞合成， 以非活性酶原的形式存在于細(xì)胞周圍。無活性的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）可被其他的 MMPs 或纖溶酶激活?；罨?MMP-9 主要功能是降解破壞細(xì)胞外基質(zhì)中最主要的組份Ⅰ、Ⅳ型膠原和Ⅰ、Ⅴ型明膠。有研究表明 MMP-9 參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移主要與下面幾方面作用有關(guān)： ①降解細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）， 破壞 ECM 的完整性； ②促進(jìn)腫瘤的新生血管形成； ③調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附和生長[2， 3]。

天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase， AST）廣泛存在于人體各組織細(xì)胞中， 尤其以肝臟細(xì)胞、心肌細(xì)胞含量最為豐富， AST分為胞漿型AST（cytosolic AST， c-AST）和線粒體型AST（mitochondrial AST， m-AST）[4， 5]。正常情況下， 血清中主要存在的是 s-AST， m-AST活性在10% 以下， 但當(dāng)肝細(xì)胞壞死或線粒體崩解時， 血清中m-AST顯著升高， 則提示有活動性肝細(xì)胞損傷。

本研究證實， 肝細(xì)胞癌患者血清中MMP-9、m-AST水平明顯高于健康對照組， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。此外， 肝細(xì)胞癌患者血清中MMP-9、m-AST水平的升高還跟患者的病情情況密切相關(guān)， 它們對腫瘤的性質(zhì)和發(fā)展有重要影響， 可能共同促進(jìn)了肝細(xì)胞癌的發(fā)生和發(fā)展， 但具體機制還有待進(jìn)一步研究， 有可能是肝細(xì)胞癌的診斷和治療的重要線索。

參考文獻(xiàn)

[1] Ferlay J， Shin HR， Bray F， et al. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008. Int J Cancer， 2010， 127（12）：2893-2917.

[2] Parson SL， Watson SA， Brown PD， et al. Matrix metal lopreoteinases.Br J Surg， 1997（84）：160.

[3] Reimers N， Zafrakas K， Assmann V， et al. Expression of extracellular matrix metalloproteases inducer on micrometastatic and primary mammary carcinoma cells. Clin Cancer Res， 2004（10）：3422-3428.

[4] 魏晨玲， 張淑蘭. 天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶的應(yīng)用價值與研究進(jìn)展. 國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志， 2006， 27（12）：1102-1103.

[5] 張顯坤， 張強. 血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶、視黃醇結(jié)合蛋白濃度在肝臟疾病的臨床價值. 檢驗醫(yī)學(xué)， 2011， 26（5）：348-350.

[收稿日期：2014-06-05]endprint

2 結(jié)果

2. 1 肝細(xì)胞癌組與對照組血清中MMP-9、m-AST比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）， 見表1。

2. 2 肝細(xì)胞癌患者血清中MMP-9、m-AST水平與病情情況分析 肝細(xì)胞癌患者血清中MMP-9、m-AST與患者有無合并腹水、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、病理分化程度有關(guān)， 其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）， 見表2。

3 討論

MMP-9正常情況下主要由纖維母細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等間質(zhì)細(xì)胞合成， 以非活性酶原的形式存在于細(xì)胞周圍。無活性的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）可被其他的 MMPs 或纖溶酶激活?；罨?MMP-9 主要功能是降解破壞細(xì)胞外基質(zhì)中最主要的組份Ⅰ、Ⅳ型膠原和Ⅰ、Ⅴ型明膠。有研究表明 MMP-9 參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移主要與下面幾方面作用有關(guān)： ①降解細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）， 破壞 ECM 的完整性； ②促進(jìn)腫瘤的新生血管形成； ③調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附和生長[2， 3]。

天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase， AST）廣泛存在于人體各組織細(xì)胞中， 尤其以肝臟細(xì)胞、心肌細(xì)胞含量最為豐富， AST分為胞漿型AST（cytosolic AST， c-AST）和線粒體型AST（mitochondrial AST， m-AST）[4， 5]。正常情況下， 血清中主要存在的是 s-AST， m-AST活性在10% 以下， 但當(dāng)肝細(xì)胞壞死或線粒體崩解時， 血清中m-AST顯著升高， 則提示有活動性肝細(xì)胞損傷。

本研究證實， 肝細(xì)胞癌患者血清中MMP-9、m-AST水平明顯高于健康對照組， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。此外， 肝細(xì)胞癌患者血清中MMP-9、m-AST水平的升高還跟患者的病情情況密切相關(guān)， 它們對腫瘤的性質(zhì)和發(fā)展有重要影響， 可能共同促進(jìn)了肝細(xì)胞癌的發(fā)生和發(fā)展， 但具體機制還有待進(jìn)一步研究， 有可能是肝細(xì)胞癌的診斷和治療的重要線索。

參考文獻(xiàn)

[1] Ferlay J， Shin HR， Bray F， et al. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008. Int J Cancer， 2010， 127（12）：2893-2917.

[2] Parson SL， Watson SA， Brown PD， et al. Matrix metal lopreoteinases.Br J Surg， 1997（84）：160.

[3] Reimers N， Zafrakas K， Assmann V， et al. Expression of extracellular matrix metalloproteases inducer on micrometastatic and primary mammary carcinoma cells. Clin Cancer Res， 2004（10）：3422-3428.

[4] 魏晨玲， 張淑蘭. 天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶的應(yīng)用價值與研究進(jìn)展. 國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志， 2006， 27（12）：1102-1103.

[5] 張顯坤， 張強. 血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶、視黃醇結(jié)合蛋白濃度在肝臟疾病的臨床價值. 檢驗醫(yī)學(xué)， 2011， 26（5）：348-350.

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2 結(jié)果

2. 1 肝細(xì)胞癌組與對照組血清中MMP-9、m-AST比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）， 見表1。

2. 2 肝細(xì)胞癌患者血清中MMP-9、m-AST水平與病情情況分析 肝細(xì)胞癌患者血清中MMP-9、m-AST與患者有無合并腹水、腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、病理分化程度有關(guān)， 其差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）， 見表2。

3 討論

MMP-9正常情況下主要由纖維母細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等間質(zhì)細(xì)胞合成， 以非活性酶原的形式存在于細(xì)胞周圍。無活性的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）可被其他的 MMPs 或纖溶酶激活?；罨?MMP-9 主要功能是降解破壞細(xì)胞外基質(zhì)中最主要的組份Ⅰ、Ⅳ型膠原和Ⅰ、Ⅴ型明膠。有研究表明 MMP-9 參與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移主要與下面幾方面作用有關(guān)： ①降解細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）， 破壞 ECM 的完整性； ②促進(jìn)腫瘤的新生血管形成； ③調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附和生長[2， 3]。

天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（aspartate aminotransferase， AST）廣泛存在于人體各組織細(xì)胞中， 尤其以肝臟細(xì)胞、心肌細(xì)胞含量最為豐富， AST分為胞漿型AST（cytosolic AST， c-AST）和線粒體型AST（mitochondrial AST， m-AST）[4， 5]。正常情況下， 血清中主要存在的是 s-AST， m-AST活性在10% 以下， 但當(dāng)肝細(xì)胞壞死或線粒體崩解時， 血清中m-AST顯著升高， 則提示有活動性肝細(xì)胞損傷。

本研究證實， 肝細(xì)胞癌患者血清中MMP-9、m-AST水平明顯高于健康對照組， 差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。此外， 肝細(xì)胞癌患者血清中MMP-9、m-AST水平的升高還跟患者的病情情況密切相關(guān)， 它們對腫瘤的性質(zhì)和發(fā)展有重要影響， 可能共同促進(jìn)了肝細(xì)胞癌的發(fā)生和發(fā)展， 但具體機制還有待進(jìn)一步研究， 有可能是肝細(xì)胞癌的診斷和治療的重要線索。

參考文獻(xiàn)

[1] Ferlay J， Shin HR， Bray F， et al. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008. Int J Cancer， 2010， 127（12）：2893-2917.

[2] Parson SL， Watson SA， Brown PD， et al. Matrix metal lopreoteinases.Br J Surg， 1997（84）：160.

[3] Reimers N， Zafrakas K， Assmann V， et al. Expression of extracellular matrix metalloproteases inducer on micrometastatic and primary mammary carcinoma cells. Clin Cancer Res， 2004（10）：3422-3428.

[4] 魏晨玲， 張淑蘭. 天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶的應(yīng)用價值與研究進(jìn)展. 國際檢驗醫(yī)學(xué)雜志， 2006， 27（12）：1102-1103.

[5] 張顯坤， 張強. 血清天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶、視黃醇結(jié)合蛋白濃度在肝臟疾病的臨床價值. 檢驗醫(yī)學(xué)， 2011， 26（5）：348-350.

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