張俊

【摘 要】目的：研究不同提取條件對(duì)決明子中黃酮提取效率的影響，確定其影響程度的大小，尋找最佳提取工藝條件。方法：本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用有機(jī)溶劑法，提取決明子中黃酮類化合物。結(jié)果：綜合考慮成本等因素乙醇濃度為75%，浸提溫度為80℃，料液比為1：30，提取時(shí)間為3.5h時(shí)為最佳提取工藝條件，提取率可達(dá)88.61%。

【關(guān)鍵詞】決明子；黃酮；提取

1前言

決明子別名草決明、馬蹄決明、假綠豆，是一種味甘苦、微寒的中藥，主要含黃酮類、蒽酮類及植物甾醇物質(zhì)，具有抑制血清膽固醇升高和動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的作用，降血脂效果顯著[1]。

決明子中的黃酮類化合物具有許多有益的生理效應(yīng)與藥理作用：抗氧化、抑制血小板凝集、抗心腦血管、抗腫瘤、抗癌等，因此越來越引起人們的重視[2]。

黃酮提取方法有很多，主要是依據(jù)黃酮化合物的來源與結(jié)構(gòu)的不同，溶解性的差異。因此，應(yīng)根據(jù)其水溶性和極性的大小挑選合適的溶劑來提取?，F(xiàn)在，對(duì)極性較大的苷元和苷類，常用些極性較大的混合溶劑進(jìn)行提取。而大多數(shù)苷元采用氯仿、乙酸乙酯、乙醚等極性較小的溶劑來提取。決明子中黃酮類化合物為極性較大的苷元，所以主要用有機(jī)溶劑提取法、微波提取法、生物酶法[3]等方法。本文應(yīng)用有機(jī)溶劑萃取方法，提取決明子中黃酮類化合物。重點(diǎn)研究不同提取條件對(duì)黃酮提取效率的影響，尋找最佳提取工藝條件。

2 材料與儀器

2.1 實(shí)驗(yàn)材料

決明子、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、95%乙醇、無水甲醇、丙酮、石油醚、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉。（標(biāo)注：所有的有機(jī)試劑均為分析純）

2.2 儀器與設(shè)備

SHB-Ⅲ循環(huán)水時(shí)多用真空泵、HHS- 2S電子恒溫不銹鋼水浴鍋、722N可見分光光度計(jì)等。

3 實(shí)驗(yàn)方法

3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制和標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制參照比色法測(cè)定枸杞袋泡茶中總黃酮含量的測(cè)定一文，得到蘆丁標(biāo)樣含量Y（μg/mL）與吸光度A間的關(guān)系，畫出標(biāo)準(zhǔn)曲線[4] 。

3.2 決明子中黃酮平均含量的提取及測(cè)定

決明子中黃酮平均含量的提取及測(cè)定決明子黃酮類化合物的提取工藝研究一文。決明子黃酮含量可按下列公式計(jì)算：

M （%） =[Y×（100/10）×（50/2）×10×10- 6×100]/w

公式中：100/10和50/2—稀釋倍數(shù)；w—決明子重（g）。

提取率（%）=（提取黃酮含量/總黃酮的平均含量）×100% [5]。

3.3 總黃酮的提取及測(cè)定

總黃酮的提取及測(cè)定參照千山?jīng)Q明子總黃酮含量的測(cè)定一文，計(jì)算黃酮提取率[6]。

3.4提取溶劑的選擇

分別用沸水、堿性水溶液（pH值9.0）、75%乙醇溶液、75%甲醇溶液、75%丙酮溶液[7]，80℃水浴下，回流浸提3.0h，料液比為1：20分別提取，測(cè)定其吸光度，分別計(jì)算其提取率。

3.5 黃酮提取單因素試驗(yàn)

3.5.1 乙醇濃度對(duì)浸提效果的影響

分別采用65%、75%、80%、85%、95%的乙醇濃度在80℃下，回流提取時(shí)間為3.0h，料液比為1：20，提取決明子中黃酮類化合物。

3.5.2 提取溫度對(duì)浸提效果的影響

分別采用50℃、60℃、70℃、80℃、90℃的提取溫度以濃度為75%的乙醇為提取劑，回流提取時(shí)間為3.0h，料液比為1：20，提取決明子中黃酮類化合物。

3.5.3 料液比對(duì)浸提效果的影響

分別采用1：10、1：20、1：25、1：30、1：35（g：mL）的料液比例以濃度為75%的乙醇為提取劑，回流提取時(shí)間為3.0h，提取溫度為80℃時(shí)，提取決明子中黃酮類化合物。

3.5.4 提取時(shí)間對(duì)浸提效果的影響

分別采用1.0h、2.0h、3.0h、3.5h、4.0h的提取溫度以濃度為75%的乙醇為提取劑，提取溫度為80℃，料液比為1：20，提取決明子中黃酮類化合物。

4 結(jié)果與分析

4.1 蘆丁曲線制作及黃酮含量測(cè)定

蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度以510nm作為測(cè)定波長，以吸光度（A）為橫坐標(biāo)，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液的濃度（mg/mL）為縱坐標(biāo)，來繪制其標(biāo)準(zhǔn)曲線，再用最小二乘法進(jìn)行線性回歸，得到吸光度（A）和蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度（Y）的回歸方程式。

用最小二乘法作線性回歸，得蘆丁濃度C與吸光度A的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程式： A=0.0115C+0.0004，相關(guān)系數(shù)R2=0.9998

4.2 提取溶劑選擇

選用不同的溶劑，按照料液比為1：20，在80℃水浴下，回流浸提3.0 h，提取黃酮，并在510 nm波長下測(cè)定其吸光值，并計(jì)算其提取率。結(jié)果見表1。

從表1可知，在提取時(shí)間，提取料液比和溫度一定的情況下，以甲醇、乙醇和丙酮作為提取劑時(shí)效果較好，且提取效率相差不大，綜合考慮沸點(diǎn)、毒性、成本、溶解度、環(huán)保等因素以乙醇提取劑為最佳。

4.3 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

4.3.1 乙醇濃度對(duì)浸提效果的影響

實(shí)驗(yàn)過程中選取乙醇提取濃度分別為65%、75%、80%、85%、95%，在80℃下，回流提取時(shí)間為3.0 h，料液比為1：20，結(jié)果見表2。

由表2可知，乙醇的體積濃度以75%最好，因此以濃度為75%的乙醇作為提取劑時(shí)，決明子中黃酮類化合物的提取率達(dá)到最高。

4.3.2 溫度對(duì)浸提效果的影響

選取60℃、70℃、80℃、90℃，4個(gè)不同提取溫度，75%的乙醇，提取時(shí)間3.0 h，料液比為1：20，結(jié)果見下表3。

由表3可知，提取溫度在60℃—80℃時(shí)，決明子中黃酮的提取率隨著溫度升高明顯增大，但溫度達(dá)到90℃，提取率略有下降。其原因是達(dá)的90℃時(shí)提取劑呈現(xiàn)沸騰狀，提取劑有一定損失，故選用80℃為最佳浸提溫度。

4.3.3 料液比對(duì)浸提效果的影響

選取60℃、70℃、80℃、90℃，4個(gè)不同提取溫度，其他提取條件選取75%的乙醇為提取劑，回流提取時(shí)間為3.0h，料液比為1：20，結(jié)果見下表4。

由表4可知，黃酮提取率隨乙醇提取劑量的增大而提高，但當(dāng)固液比達(dá)到1：20后，提取率增大不明顯，考慮生產(chǎn)成本等因素，選用l：20的固液比。

4.3.4 提取時(shí)間對(duì)浸提效果的影響

提取時(shí)間 1.0h、2.0h、3.0h、3.5h、4.0h，提取劑濃度為75%，提取溫度為75℃，料液比為1：20，結(jié)果見表5。

由表5可知，提取時(shí)間在1.0 h至3.0 h時(shí)黃酮提取率增長趨勢(shì)明顯，3.0h后提取率增長幅度不明顯?？赡茉蚴钱?dāng)提取時(shí)間達(dá)到一定程度后，黃酮浸出量基本達(dá)到飽和狀態(tài)，所以黃酮含量在3.0 h后沒有明顯變化，故選擇3.0 h為宜。

5 結(jié)論

決明子的最佳提取工藝為：75%乙醇，溫度80℃，時(shí)間3.5h，料液比1：30，黃酮提取率可達(dá)到88.61%，濃度為37.0μm/mL。

參考文獻(xiàn)：

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[2]華輝，郭勇.黃酮類化合物藥理研究進(jìn)展[J]，廣東藥學(xué)，1999，9（4）：9- 12.

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[4]陳林.比色法測(cè)定枸杞袋泡茶中總黃酮含量的測(cè)定[J].山東醫(yī)藥工業(yè)，2003，（22）2：20- 21.

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