郭毅新　唐超　高文分

摘要：目的建立高效液相色譜法測定滇柴胡中柴胡皂苷d的含量。方法采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（250mm×4.6mm，5um），流動相為乙腈-水梯度洗脫，流速：1.0mL·min-1，DAD檢測器，檢測波長：203nm。結(jié)果線性范圍0.316μg/mL～3.160μg /mL，r=0.9995；平均回收率為98.7%，RSD=0.42%（n=6）。結(jié)論該法快速、準確、可靠；可作為滇柴胡中柴胡皂苷d含量的檢測，為藥材的用量及控制提供科學依據(jù)。

關鍵詞：高效液相色譜法；滇柴胡；柴胡皂苷d；含量

中圖分類號：R284文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2014）08-0067-02

滇柴胡《中國藥典》未收載，收載于云南省中藥飲片標準第一冊[1]。為傘形科植物竹葉柴胡（Bupleurum marginatum Wall.ex DC.）、馬尾柴胡（Bupleurum microcephalum Diels.）、小柴胡（Bupleurum tenue Buch.-Ham.ex D.Don）的干燥全草。夏、秋二季花初開時采收，除去泥沙，干燥[1]。本品長50～100cm。根圓錐形或圓柱形，微有分支，直伸或稍彎曲，外表棕褐色或黃棕色，具細縱皺紋及稀疏小橫突起。莖單生或叢生，分支，圓柱形微具縱棱，基部常列存葉柄纖維，斷面實心，白色。葉易破損，脫落，完整葉展平后呈針形、線狀披針形或線形，長10 cm～16 cm，寬0.8 cm～1.4 cm，頂端具有硬尖頭，基部半抱莖，葉緣軟骨質(zhì)，具5～9脈；有基生葉基部下延呈長柄狀?；ㄐ驈蛡阈危瑐惴?～9；小總苞披針形或線狀披針形；花黃色。幼果棕色。體輕，質(zhì)稍脆。氣清香，味微苦[2]。主要產(chǎn)于云南大部地區(qū)。為考察云南滇柴胡情況，故此次試驗建立高效液相色譜法紫外檢測器測定滇柴胡中柴胡皂苷d的含量，可作為滇柴胡中柴胡皂苷d含量的檢測，為藥材的用量及控制提供科學依據(jù)。

1儀器和試藥

Agilent1200高效液相色譜儀，帶四元泵；DAD檢測器；自動進樣器；在線真空脫氣機；智能化柱溫箱及HP化學工作站；乙腈為HPLC級，水為超純水。柴胡皂苷d對照品（中國食品藥品檢定院提供；含量測定；批號：110778-201205）。此次共集到云南不同產(chǎn)地的滇柴胡樣品11批，分別來自大理、麗江、保山市及臨滄地區(qū)，批號略。

2色譜條件

色譜柱： Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（250mm×4.6mm 5um），流速：1.0mL·min-1，DAD檢測器，檢測波長：203nm。流動相：以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫。理論板數(shù)按柴胡皂苷d峰計算應不低于10000。[3]

時間（min）A%B%0～5025→7575→2550～6075→2525→753溶液的配制

3.1對照品溶液的配制精密稱取柴胡皂苷d對照品（中國食品藥品檢定院提供；含量測定；批號：110778-201205）適量，加無水乙醇制成每1 mL含柴胡皂苷d 0.3 mg的溶液，即得。

3.2供試品溶液的配制取本品粉末（過四號篩）約0.8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入含5%濃氨試液的甲醇40 mL，密塞，超聲處理40 min，過濾，用甲醇60 mL分3次洗滌容器及藥渣，洗液與濾液合并，回收溶劑至干。殘渣加無水乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.3陰性樣品溶液的配制取溶劑無水乙醇，作為陰性樣品溶液。

4方法與結(jié)果

4.1系統(tǒng)適用性分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積，即得。在此色譜條件下，柴胡皂苷d色譜峰理論塔板數(shù)應不低于10000，且陰性樣品溶液無干擾。

A. 對照品B. 樣品C.陰性樣品4.2線性關系精密稱取柴胡皂苷d對照品適量，置量瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再以無水乙醇稀釋至一系列濃度的對照品溶液，按上述色譜條件分別進樣10 uL，記錄色譜圖，以峰面積（Y）對進樣濃度（X）作回歸統(tǒng)計，得回歸方程為Y = 1.5413 X+3.1012，r= 0.9995（n=6），線性范圍為0.316μg～3.160μg。

4.3精密度試驗取“3.1”項下的對照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進樣6次，測得RSD為0.45%。表明儀器精密度良好。

4.4穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h進樣測定并按峰面積計算。測得RSD為1.63%。表明供試品溶液在制備后24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

4.5重復性試驗取同一批樣品，平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測定并計算。測得RSD為1.54%。表明方法的重現(xiàn)性良好。

4.6加樣回收率試驗稱取已知含量（按干燥品計）的同一批樣品粉末（過四號篩）約0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，共6份，分別精密加入對照品溶液1 mL（對照品溶液濃度：0.309mg·mL-1），再加入含5%濃氨試液的甲醇40 mL，密塞，超聲處理40 min，過濾，用甲醇60 mL分3次洗滌容器及藥渣，洗液與濾液合并，回收溶劑至干。殘渣加無水乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得，并依法測定，。

5討論

5.1色譜柱的選擇選擇Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（250mm×4.6mm 5um）為色譜柱，其鍵合相能與柴胡皂苷d選擇性作用，達到分離檢測的結(jié)果，同時選擇乙腈-水（25：75）為流動相進行梯度洗脫，使柴胡皂苷d得到較好的分離及較高的理論塔板數(shù)。

5.2提取溶劑的選擇根據(jù)柴胡皂苷d易溶于有機相甲醇、乙醇、無水乙醇?？疾炝瞬煌瑵舛鹊募状?、乙醇和無水乙醇為溶劑的提取結(jié)果，結(jié)果表明無水乙醇中柴胡皂苷d提取率最高。故選擇無水乙醇作為提取溶劑。

5.3樣品提取方法和超聲時間的選擇本次試驗分別考察了以無水乙醇為溶劑的兩種提取方法，分別為加熱回流法，超聲法。這兩種提取方法中柴胡皂苷d的含量無顯著性差別?？紤]到超聲法與加熱回流法相比，超聲法更簡單，易行，快捷，故采用超聲法。此外，本次試驗對超聲時間進行了考察，依次測定了超聲提取10、20、130、40以及60 min柴胡皂苷d含量測定的結(jié)果。結(jié)果表明采用無水乙醇為溶劑，超聲提取40 min時，柴胡皂苷d成分已經(jīng)提取完全。

5.4檢測器的選擇試驗采用紫外可見分光光度計對柴胡皂苷d的無水乙醇溶液于190 nm～400 nm波長范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果203 nm波長處有最大吸收，屬末端吸收化合物，故此次試驗選取吸收波長203 nm為樣品檢測波長。

5.5《中國藥典》柴胡中未收載滇柴胡，并對柴胡進行了柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量總和的控制[3]。此次試驗，同時對滇柴胡也進行了柴胡皂苷a的測定，試驗結(jié)果表明滇柴胡中基本不含柴胡皂苷a，故沒有進行含量控制，而柴胡皂苷d的含量跟藥典柴胡基本相當。通過對11批不同地區(qū)滇柴胡的檢測，建立了高效液相色譜法測定滇柴胡中柴胡皂苷d的含量，可作為滇柴胡中柴胡皂苷d含量的檢測，為藥材的用量及控制提供科學依據(jù)。

參考文獻：

[1] 云南省食品藥品監(jiān)督管理局.云南省中藥飲片標準[M].第一冊.昆明：云南美術出版社，2005：249～250.

[2]云南省衛(wèi)生廳.云南省藥品標準[M].昆明：云南大學出版社，1996：47～48.

[3] ChP（中國藥典）2010.Vol Ⅰ（一部）：263～264.

（收稿日期：2014-06-10）

摘要：目的建立高效液相色譜法測定滇柴胡中柴胡皂苷d的含量。方法采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（250mm×4.6mm，5um），流動相為乙腈-水梯度洗脫，流速：1.0mL·min-1，DAD檢測器，檢測波長：203nm。結(jié)果線性范圍0.316μg/mL～3.160μg /mL，r=0.9995；平均回收率為98.7%，RSD=0.42%（n=6）。結(jié)論該法快速、準確、可靠；可作為滇柴胡中柴胡皂苷d含量的檢測，為藥材的用量及控制提供科學依據(jù)。

關鍵詞：高效液相色譜法；滇柴胡；柴胡皂苷d；含量

中圖分類號：R284文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2014）08-0067-02

滇柴胡《中國藥典》未收載，收載于云南省中藥飲片標準第一冊[1]。為傘形科植物竹葉柴胡（Bupleurum marginatum Wall.ex DC.）、馬尾柴胡（Bupleurum microcephalum Diels.）、小柴胡（Bupleurum tenue Buch.-Ham.ex D.Don）的干燥全草。夏、秋二季花初開時采收，除去泥沙，干燥[1]。本品長50～100cm。根圓錐形或圓柱形，微有分支，直伸或稍彎曲，外表棕褐色或黃棕色，具細縱皺紋及稀疏小橫突起。莖單生或叢生，分支，圓柱形微具縱棱，基部常列存葉柄纖維，斷面實心，白色。葉易破損，脫落，完整葉展平后呈針形、線狀披針形或線形，長10 cm～16 cm，寬0.8 cm～1.4 cm，頂端具有硬尖頭，基部半抱莖，葉緣軟骨質(zhì)，具5～9脈；有基生葉基部下延呈長柄狀?；ㄐ驈蛡阈危瑐惴?～9；小總苞披針形或線狀披針形；花黃色。幼果棕色。體輕，質(zhì)稍脆。氣清香，味微苦[2]。主要產(chǎn)于云南大部地區(qū)。為考察云南滇柴胡情況，故此次試驗建立高效液相色譜法紫外檢測器測定滇柴胡中柴胡皂苷d的含量，可作為滇柴胡中柴胡皂苷d含量的檢測，為藥材的用量及控制提供科學依據(jù)。

1儀器和試藥

Agilent1200高效液相色譜儀，帶四元泵；DAD檢測器；自動進樣器；在線真空脫氣機；智能化柱溫箱及HP化學工作站；乙腈為HPLC級，水為超純水。柴胡皂苷d對照品（中國食品藥品檢定院提供；含量測定；批號：110778-201205）。此次共集到云南不同產(chǎn)地的滇柴胡樣品11批，分別來自大理、麗江、保山市及臨滄地區(qū)，批號略。

2色譜條件

色譜柱： Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（250mm×4.6mm 5um），流速：1.0mL·min-1，DAD檢測器，檢測波長：203nm。流動相：以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫。理論板數(shù)按柴胡皂苷d峰計算應不低于10000。[3]

時間（min）A%B%0～5025→7575→2550～6075→2525→753溶液的配制

3.1對照品溶液的配制精密稱取柴胡皂苷d對照品（中國食品藥品檢定院提供；含量測定；批號：110778-201205）適量，加無水乙醇制成每1 mL含柴胡皂苷d 0.3 mg的溶液，即得。

3.2供試品溶液的配制取本品粉末（過四號篩）約0.8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入含5%濃氨試液的甲醇40 mL，密塞，超聲處理40 min，過濾，用甲醇60 mL分3次洗滌容器及藥渣，洗液與濾液合并，回收溶劑至干。殘渣加無水乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.3陰性樣品溶液的配制取溶劑無水乙醇，作為陰性樣品溶液。

4方法與結(jié)果

4.1系統(tǒng)適用性分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積，即得。在此色譜條件下，柴胡皂苷d色譜峰理論塔板數(shù)應不低于10000，且陰性樣品溶液無干擾。

A. 對照品B. 樣品C.陰性樣品4.2線性關系精密稱取柴胡皂苷d對照品適量，置量瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再以無水乙醇稀釋至一系列濃度的對照品溶液，按上述色譜條件分別進樣10 uL，記錄色譜圖，以峰面積（Y）對進樣濃度（X）作回歸統(tǒng)計，得回歸方程為Y = 1.5413 X+3.1012，r= 0.9995（n=6），線性范圍為0.316μg～3.160μg。

4.3精密度試驗取“3.1”項下的對照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進樣6次，測得RSD為0.45%。表明儀器精密度良好。

4.4穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h進樣測定并按峰面積計算。測得RSD為1.63%。表明供試品溶液在制備后24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

4.5重復性試驗取同一批樣品，平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測定并計算。測得RSD為1.54%。表明方法的重現(xiàn)性良好。

4.6加樣回收率試驗稱取已知含量（按干燥品計）的同一批樣品粉末（過四號篩）約0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，共6份，分別精密加入對照品溶液1 mL（對照品溶液濃度：0.309mg·mL-1），再加入含5%濃氨試液的甲醇40 mL，密塞，超聲處理40 min，過濾，用甲醇60 mL分3次洗滌容器及藥渣，洗液與濾液合并，回收溶劑至干。殘渣加無水乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得，并依法測定，。

5討論

5.1色譜柱的選擇選擇Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（250mm×4.6mm 5um）為色譜柱，其鍵合相能與柴胡皂苷d選擇性作用，達到分離檢測的結(jié)果，同時選擇乙腈-水（25：75）為流動相進行梯度洗脫，使柴胡皂苷d得到較好的分離及較高的理論塔板數(shù)。

5.2提取溶劑的選擇根據(jù)柴胡皂苷d易溶于有機相甲醇、乙醇、無水乙醇。考察了不同濃度的甲醇、乙醇和無水乙醇為溶劑的提取結(jié)果，結(jié)果表明無水乙醇中柴胡皂苷d提取率最高。故選擇無水乙醇作為提取溶劑。

5.3樣品提取方法和超聲時間的選擇本次試驗分別考察了以無水乙醇為溶劑的兩種提取方法，分別為加熱回流法，超聲法。這兩種提取方法中柴胡皂苷d的含量無顯著性差別。考慮到超聲法與加熱回流法相比，超聲法更簡單，易行，快捷，故采用超聲法。此外，本次試驗對超聲時間進行了考察，依次測定了超聲提取10、20、130、40以及60 min柴胡皂苷d含量測定的結(jié)果。結(jié)果表明采用無水乙醇為溶劑，超聲提取40 min時，柴胡皂苷d成分已經(jīng)提取完全。

5.4檢測器的選擇試驗采用紫外可見分光光度計對柴胡皂苷d的無水乙醇溶液于190 nm～400 nm波長范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果203 nm波長處有最大吸收，屬末端吸收化合物，故此次試驗選取吸收波長203 nm為樣品檢測波長。

5.5《中國藥典》柴胡中未收載滇柴胡，并對柴胡進行了柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量總和的控制[3]。此次試驗，同時對滇柴胡也進行了柴胡皂苷a的測定，試驗結(jié)果表明滇柴胡中基本不含柴胡皂苷a，故沒有進行含量控制，而柴胡皂苷d的含量跟藥典柴胡基本相當。通過對11批不同地區(qū)滇柴胡的檢測，建立了高效液相色譜法測定滇柴胡中柴胡皂苷d的含量，可作為滇柴胡中柴胡皂苷d含量的檢測，為藥材的用量及控制提供科學依據(jù)。

參考文獻：

[1] 云南省食品藥品監(jiān)督管理局.云南省中藥飲片標準[M].第一冊.昆明：云南美術出版社，2005：249～250.

[2]云南省衛(wèi)生廳.云南省藥品標準[M].昆明：云南大學出版社，1996：47～48.

[3] ChP（中國藥典）2010.Vol Ⅰ（一部）：263～264.

（收稿日期：2014-06-10）

摘要：目的建立高效液相色譜法測定滇柴胡中柴胡皂苷d的含量。方法采用Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（250mm×4.6mm，5um），流動相為乙腈-水梯度洗脫，流速：1.0mL·min-1，DAD檢測器，檢測波長：203nm。結(jié)果線性范圍0.316μg/mL～3.160μg /mL，r=0.9995；平均回收率為98.7%，RSD=0.42%（n=6）。結(jié)論該法快速、準確、可靠；可作為滇柴胡中柴胡皂苷d含量的檢測，為藥材的用量及控制提供科學依據(jù)。

關鍵詞：高效液相色譜法；滇柴胡；柴胡皂苷d；含量

中圖分類號：R284文獻標志碼：A文章編號：1007-2349（2014）08-0067-02

滇柴胡《中國藥典》未收載，收載于云南省中藥飲片標準第一冊[1]。為傘形科植物竹葉柴胡（Bupleurum marginatum Wall.ex DC.）、馬尾柴胡（Bupleurum microcephalum Diels.）、小柴胡（Bupleurum tenue Buch.-Ham.ex D.Don）的干燥全草。夏、秋二季花初開時采收，除去泥沙，干燥[1]。本品長50～100cm。根圓錐形或圓柱形，微有分支，直伸或稍彎曲，外表棕褐色或黃棕色，具細縱皺紋及稀疏小橫突起。莖單生或叢生，分支，圓柱形微具縱棱，基部常列存葉柄纖維，斷面實心，白色。葉易破損，脫落，完整葉展平后呈針形、線狀披針形或線形，長10 cm～16 cm，寬0.8 cm～1.4 cm，頂端具有硬尖頭，基部半抱莖，葉緣軟骨質(zhì)，具5～9脈；有基生葉基部下延呈長柄狀?；ㄐ驈蛡阈?，傘幅3～9；小總苞披針形或線狀披針形；花黃色。幼果棕色。體輕，質(zhì)稍脆。氣清香，味微苦[2]。主要產(chǎn)于云南大部地區(qū)。為考察云南滇柴胡情況，故此次試驗建立高效液相色譜法紫外檢測器測定滇柴胡中柴胡皂苷d的含量，可作為滇柴胡中柴胡皂苷d含量的檢測，為藥材的用量及控制提供科學依據(jù)。

1儀器和試藥

Agilent1200高效液相色譜儀，帶四元泵；DAD檢測器；自動進樣器；在線真空脫氣機；智能化柱溫箱及HP化學工作站；乙腈為HPLC級，水為超純水。柴胡皂苷d對照品（中國食品藥品檢定院提供；含量測定；批號：110778-201205）。此次共集到云南不同產(chǎn)地的滇柴胡樣品11批，分別來自大理、麗江、保山市及臨滄地區(qū)，批號略。

2色譜條件

色譜柱： Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（250mm×4.6mm 5um），流速：1.0mL·min-1，DAD檢測器，檢測波長：203nm。流動相：以乙腈為流動相A，以水為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫。理論板數(shù)按柴胡皂苷d峰計算應不低于10000。[3]

時間（min）A%B%0～5025→7575→2550～6075→2525→753溶液的配制

3.1對照品溶液的配制精密稱取柴胡皂苷d對照品（中國食品藥品檢定院提供；含量測定；批號：110778-201205）適量，加無水乙醇制成每1 mL含柴胡皂苷d 0.3 mg的溶液，即得。

3.2供試品溶液的配制取本品粉末（過四號篩）約0.8 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入含5%濃氨試液的甲醇40 mL，密塞，超聲處理40 min，過濾，用甲醇60 mL分3次洗滌容器及藥渣，洗液與濾液合并，回收溶劑至干。殘渣加無水乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.3陰性樣品溶液的配制取溶劑無水乙醇，作為陰性樣品溶液。

4方法與結(jié)果

4.1系統(tǒng)適用性分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測定峰面積，即得。在此色譜條件下，柴胡皂苷d色譜峰理論塔板數(shù)應不低于10000，且陰性樣品溶液無干擾。

A. 對照品B. 樣品C.陰性樣品4.2線性關系精密稱取柴胡皂苷d對照品適量，置量瓶中，用無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，再以無水乙醇稀釋至一系列濃度的對照品溶液，按上述色譜條件分別進樣10 uL，記錄色譜圖，以峰面積（Y）對進樣濃度（X）作回歸統(tǒng)計，得回歸方程為Y = 1.5413 X+3.1012，r= 0.9995（n=6），線性范圍為0.316μg～3.160μg。

4.3精密度試驗取“3.1”項下的對照品溶液，按上述色譜條件，連續(xù)進樣6次，測得RSD為0.45%。表明儀器精密度良好。

4.4穩(wěn)定性試驗取同一供試品溶液，分別于0，2，4，8，12，24 h進樣測定并按峰面積計算。測得RSD為1.63%。表明供試品溶液在制備后24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

4.5重復性試驗取同一批樣品，平行制備6份供試品溶液，按上述色譜條件測定并計算。測得RSD為1.54%。表明方法的重現(xiàn)性良好。

4.6加樣回收率試驗稱取已知含量（按干燥品計）的同一批樣品粉末（過四號篩）約0.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，共6份，分別精密加入對照品溶液1 mL（對照品溶液濃度：0.309mg·mL-1），再加入含5%濃氨試液的甲醇40 mL，密塞，超聲處理40 min，過濾，用甲醇60 mL分3次洗滌容器及藥渣，洗液與濾液合并，回收溶劑至干。殘渣加無水乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得，并依法測定，。

5討論

5.1色譜柱的選擇選擇Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱（250mm×4.6mm 5um）為色譜柱，其鍵合相能與柴胡皂苷d選擇性作用，達到分離檢測的結(jié)果，同時選擇乙腈-水（25：75）為流動相進行梯度洗脫，使柴胡皂苷d得到較好的分離及較高的理論塔板數(shù)。

5.2提取溶劑的選擇根據(jù)柴胡皂苷d易溶于有機相甲醇、乙醇、無水乙醇?？疾炝瞬煌瑵舛鹊募状?、乙醇和無水乙醇為溶劑的提取結(jié)果，結(jié)果表明無水乙醇中柴胡皂苷d提取率最高。故選擇無水乙醇作為提取溶劑。

5.3樣品提取方法和超聲時間的選擇本次試驗分別考察了以無水乙醇為溶劑的兩種提取方法，分別為加熱回流法，超聲法。這兩種提取方法中柴胡皂苷d的含量無顯著性差別?？紤]到超聲法與加熱回流法相比，超聲法更簡單，易行，快捷，故采用超聲法。此外，本次試驗對超聲時間進行了考察，依次測定了超聲提取10、20、130、40以及60 min柴胡皂苷d含量測定的結(jié)果。結(jié)果表明采用無水乙醇為溶劑，超聲提取40 min時，柴胡皂苷d成分已經(jīng)提取完全。

5.4檢測器的選擇試驗采用紫外可見分光光度計對柴胡皂苷d的無水乙醇溶液于190 nm～400 nm波長范圍內(nèi)進行掃描，結(jié)果203 nm波長處有最大吸收，屬末端吸收化合物，故此次試驗選取吸收波長203 nm為樣品檢測波長。

5.5《中國藥典》柴胡中未收載滇柴胡，并對柴胡進行了柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量總和的控制[3]。此次試驗，同時對滇柴胡也進行了柴胡皂苷a的測定，試驗結(jié)果表明滇柴胡中基本不含柴胡皂苷a，故沒有進行含量控制，而柴胡皂苷d的含量跟藥典柴胡基本相當。通過對11批不同地區(qū)滇柴胡的檢測，建立了高效液相色譜法測定滇柴胡中柴胡皂苷d的含量，可作為滇柴胡中柴胡皂苷d含量的檢測，為藥材的用量及控制提供科學依據(jù)。

參考文獻：

[1] 云南省食品藥品監(jiān)督管理局.云南省中藥飲片標準[M].第一冊.昆明：云南美術出版社，2005：249～250.

[2]云南省衛(wèi)生廳.云南省藥品標準[M].昆明：云南大學出版社，1996：47～48.

[3] ChP（中國藥典）2010.Vol Ⅰ（一部）：263～264.

（收稿日期：2014-06-10）