陳秀梅，申 斌，李 萌，王桂芹

（吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，吉林長(zhǎng)春 130118）

水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)蛋白質(zhì)的需求實(shí)際上就是對(duì)必需氨基酸的需求，蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)平衡實(shí)際上是氨基酸的平衡。所謂飼料必需氨基酸的平衡是指飼料中各種必需氨基酸在數(shù)量和比例上要同水產(chǎn)動(dòng)物肌肉或魚體的數(shù)量和比例相符合，一般是指與最佳生產(chǎn)水平的需要量相平衡。目前在魚粉日益短缺且廣泛利用植物蛋白源造成飼料氨基酸不平衡的問題日益突出，對(duì)于調(diào)控飼料氨基酸的平衡促進(jìn)魚體生長(zhǎng)已經(jīng)做了很多工作。 葉元土等（1999）、劉永堅(jiān)等（2002）、朱選等（2008）分別在草魚及南美白對(duì)蝦飼料中添加晶體或包膜氨基酸，顯著促進(jìn)了魚蝦的生長(zhǎng)，改善其適口性，提高對(duì)蛋白質(zhì)的利用率，同時(shí)可適當(dāng)降低飼料蛋白質(zhì)水平。為了更加明確可量化的飼料必需氨基酸平衡程度和魚類生長(zhǎng)的對(duì)應(yīng)關(guān)系，本試驗(yàn)以框鏡鯉肌肉必需氨基酸的組成和含量為參比，用灰度關(guān)聯(lián)分析來(lái)量化飼料和魚體必需氨基酸的平衡程度，探討植物蛋白質(zhì)為主要蛋白源的框鏡鯉飼料中按比例添加賴氨酸和蛋氨酸對(duì)其生長(zhǎng)和體成分的影響，為其生產(chǎn)上的應(yīng)用提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料 本試驗(yàn)選用魚粉為主要蛋白源，以魚油、大豆油、糊精和面粉為能源、纖維素為填充物配制的半精制日糧為對(duì)照組，蛋白質(zhì)含量為33%，各試驗(yàn)組以混合植物蛋白質(zhì)為蛋白源，分別添加不同水平的微囊蛋氨酸和微囊賴氨酸 （均購(gòu)自北京市星火元科技有限公司，含量各為50%），配成等氮（31%粗蛋白質(zhì)）等能（17 MJ/kg）的不同氨基酸平衡程度（0.7649、0.7048、0.7220、0.7370、0.7591、0.7780、0.8008）的六種飼料。 采用灰色關(guān)聯(lián)分析法計(jì)算必需氨基酸 （EAA）（蘇氨酸、纈氨酸、甲硫氨酸+胱氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸+酪氨酸、賴氨酸、組氨酸、色氨酸和精氨酸）的平衡關(guān)聯(lián)度，即飼料中10種EAA的模式與魚體所需的10種EAA模式的接近程度，其中框鏡鯉對(duì)10種EAA需要量以實(shí)測(cè)的框鏡鯉肌肉EAA組成為依據(jù)，飼料原料的10種EAA的組成亦為實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)（楊元昊等，1999）。

飼料原料經(jīng)粉碎過60目篩，按配方稱重、均勻混合，擠壓成直徑為1.5 mm顆粒，曬干后置于-4℃保存、備用。飼料配方及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

1.2 飼養(yǎng)管理 在試驗(yàn)前2周，挑選規(guī)格整齊的框鏡鯉魚種1000尾置于網(wǎng)箱中進(jìn)行馴養(yǎng)，全部攝食配合飼料。試驗(yàn)開始前停食24 h，從馴養(yǎng)魚中隨機(jī)取魚放置在室內(nèi)水族箱中（80 cm×60 cm×50 cm），每種飼料 3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)放養(yǎng)30尾魚，持續(xù)飼養(yǎng)8周，試驗(yàn)期間記錄死魚并稱重。在試驗(yàn)結(jié)束前停食24 h，每個(gè)重復(fù)稱重，并從中隨機(jī)取5尾魚的白肌，-20℃保存，用于營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定。

1.3 測(cè)定指標(biāo)

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.3.1 生長(zhǎng)性能指標(biāo)

平均增重率/%=100×（Wt－W0＋Wd）/W0；

式中：W0和 Wt為試驗(yàn)初始和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)的魚體總質(zhì)量，g；Wd為死魚的總質(zhì)量，g。

生長(zhǎng)離散/%=100×S/X；

式中：S為體重標(biāo)準(zhǔn)差；X為平均魚體質(zhì)量。

臟體比/%=（Wv/W）×100；

式中：Wv為內(nèi)臟質(zhì)量，g；W為每尾魚的體質(zhì)量，g。

肥滿度/（g/cm3）=（W/L3）×100；

式中：W為每尾魚的體質(zhì)量，g；L為每尾魚的體長(zhǎng)，cm。

1.3.2 營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定方法 水分測(cè)定采用105℃恒溫烘干失水法（GB/T 6435-1994），粗蛋白質(zhì)測(cè)定采用微量凱氏定氮法（GB/T 6432-1994），粗灰分測(cè)定采用550℃灼燒法 （GB/T 6438-1992），粗脂肪測(cè)定采用索氏抽提法 （GB/T 6433-1994），能量測(cè)定選用彈式熱量計(jì)，氨基酸含量測(cè)定選用氨基酸分析儀。

1.4 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，用Duncan’s多重比較分析組間差異顯著性程度。試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果

2.1 飼料氨基酸平衡程度對(duì)框鏡鯉生長(zhǎng)的影響由表2可知，隨著飼料中賴氨酸和蛋氨酸的添加，飼料必需氨基酸平衡關(guān)聯(lián)度對(duì)框鏡鯉末重、平均增重率和特定生長(zhǎng)率有相同的影響趨勢(shì)。當(dāng)飼料必需氨基酸平衡關(guān)聯(lián)度增加到0.7591（4組）時(shí)，1、2、3組平均增重率分別提高 35.86%、31.76%、19.67%（P ＜ 0.05），較對(duì)照組降低12.68%（P＜0.05），隨著飼料必需氨基酸平衡關(guān)聯(lián)度繼續(xù)增加至 0.7780（5組）和 0.8008（6組）時(shí)，末重與對(duì)照組均無(wú)顯著差異，但都顯著高于其他各試驗(yàn)組（P＜0.05）。

表2 飼料氨基酸平衡程度對(duì)框鏡鯉生長(zhǎng)性能的影響

隨著飼料氨基酸平衡程度的增大，各試驗(yàn)組生長(zhǎng)離散程度顯著降低（P＜0.05），當(dāng)飼料氨基酸平衡關(guān)聯(lián)度為0.7370（3組）時(shí)，生長(zhǎng)離散顯著高于飼料氨基酸平衡關(guān)聯(lián)度為0.7048（1組），當(dāng)增大到0.7591（4組）時(shí)，生長(zhǎng)離散顯著降低且降低3.25%，繼續(xù)升高，則差異不顯著，且與對(duì)照組差異不顯著。各試驗(yàn)組及與對(duì)照組間的肥滿度和臟體比差異不顯著。

2.2 飼料氨基酸平衡程度對(duì)框鏡鯉白肌營(yíng)養(yǎng)成分的影響 由表3可見，隨著飼料中賴氨酸和蛋氨酸的添加，飼料必需氨基酸平衡關(guān)聯(lián)度對(duì)框鏡鯉白肌水分和灰分無(wú)顯著影響（P＞0.05）。隨著飼料氨基酸平衡程度的增大，各試組白肌蛋白質(zhì)有增加的趨勢(shì)，當(dāng)飼料氨基酸平衡關(guān)聯(lián)度為0.7780（5組）和0.8008（6組）時(shí)，蛋白質(zhì)較對(duì)照組提高了3.00%和3.06%（P＜0.05）。

表3 飼料氨基酸平衡程度對(duì)框鏡鯉白肌常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的影響 %

隨著飼料氨基酸平衡程度的增大，白肌脂肪有顯著降低的趨勢(shì)。當(dāng)飼料氨基酸平衡關(guān)聯(lián)度增加到0.7370（3組）時(shí)，白肌脂肪顯著增加，當(dāng)飼料氨基酸平衡關(guān)聯(lián)度繼續(xù)增加，各組間白肌脂肪及與對(duì)照組均無(wú)顯著差異。

由表4可知，隨著飼料中賴氨酸和蛋氨酸的添加，飼料必需氨基酸平衡關(guān)聯(lián)度對(duì)框鏡鯉白肌賴氨酸和必需氨基酸有顯著影響（P＜0.05），但其他必需氨基酸無(wú)顯著差異。

隨著飼料氨基酸平衡程度的增大，各試驗(yàn)組白肌賴氨酸有增加的趨勢(shì)，但差異不顯著。

3 討論

3.1 飼料氨基酸平衡程度對(duì)框鏡鯉生長(zhǎng)的影響飼料中不同種類的氨基酸與魚體氨基酸組成比例越接近，魚類利用氨基酸的效率就越高，越有利于魚體的生長(zhǎng)。本試驗(yàn)以框鏡鯉肌肉的必需氨基酸的組成比例和含量為參照，通過灰度關(guān)聯(lián)分析，按照滿足兩個(gè)限制性氨基酸，按比例梯度降低進(jìn)行添加，量化必需氨基酸的平衡程度，同時(shí)考慮兩個(gè)半必需氨基酸的含量和比例，結(jié)果隨著平衡關(guān)聯(lián)度的增大，魚類顯著增長(zhǎng)，同時(shí)高于高蛋白的對(duì)照組，表明這種量化是可行的，生產(chǎn)上可推廣使用。有研究證明，無(wú)魚粉飼料氨基酸的平衡能促進(jìn)魚類的生長(zhǎng)。林香信等（2012）運(yùn)用氨基酸的平衡性調(diào)整無(wú)魚粉飼料配方，提高羅非魚的生長(zhǎng)性能。葉元土等（1999）在草魚飼料中使用多種飼料原料的合理配比或者在飼料中添加晶體氨基酸，使得飼料氨基酸的組成更趨平衡，從而促進(jìn)魚類的生長(zhǎng)。于海瑞（2012）在羅非魚實(shí)用飼料中添加蛋氨酸和賴氨酸。王吉橋等（2010）在以不同比例的玉米蛋白、棉籽粕和豆粕為蛋白源的花魚骨飼料中添加賴氨酸、蛋氨酸和精氨酸，使得飼料的氨基酸平衡，促進(jìn)魚類的生長(zhǎng)。譚芳芳等（2010）、王愛民等（2006）分別在草魚和異育銀鯽飼料中補(bǔ)充微囊賴氨酸和蛋氨酸均證明這一點(diǎn)。

表4 飼料氨基酸平衡程度對(duì)框鏡鯉肌肉中必需氨基酸含量的影響 %

3.2 飼料氨基酸平衡程度對(duì)框鏡鯉白肌營(yíng)養(yǎng)成分的影響 魚體的營(yíng)養(yǎng)組成反映魚類的營(yíng)養(yǎng)水平和生理狀態(tài)。魚體的營(yíng)養(yǎng)組成相對(duì)恒定，但亦隨著飼料營(yíng)養(yǎng)水平、食物組成等的變化而變化。在飼料中添加賴氨酸和蛋氨酸，隨著飼料氨基酸平衡程度的增大，各試驗(yàn)組白肌蛋白質(zhì)有增加的趨勢(shì)，當(dāng)飼料氨基酸平衡關(guān)聯(lián)度為0.7780（5組）和0.8008（6組）時(shí)，框鏡鯉的蛋白質(zhì)顯著高于對(duì)照組。表明飼料氨基酸越平衡，蛋白質(zhì)沉積越好。朱選等（2009）在羅非魚飼料中添加賴氨酸及蛋氨酸，沈曉芝等（2007）、劉永堅(jiān)等（2002）分別在鯉魚和草魚飼料中添加外源蛋氨酸或賴氨酸，都能夠提高魚肌肉中粗蛋白質(zhì)含量。但亦有Alaml等（2005）在日本對(duì)蝦日糧中同時(shí)補(bǔ)充賴氨酸和蛋氨酸、Meng和 Robinson（1998）在斑點(diǎn)叉尾的飼料中添加蛋氨酸卻沒有影響肌肉蛋白質(zhì)含量?？梢姲被岬奶砑右炕癁槠胶獾某潭炔趴杀容^。本試驗(yàn)各試驗(yàn)組隨著飼料氨基酸平衡程度的增大，白肌脂肪有顯著降低的趨勢(shì)，當(dāng)飼料氨基酸平衡關(guān)聯(lián)度增加到0.7370（3組）時(shí)，白肌脂肪顯著降低，表明平衡的氨基酸更多的用于蛋白質(zhì)的沉積。Alaml和Teshima（2005）在日本對(duì)蝦日糧中同時(shí)補(bǔ)充賴氨酸及蛋氨酸亦發(fā)現(xiàn)對(duì)蝦脂肪有顯著性下降的變化。

本試驗(yàn)對(duì)魚肌肉中氨基酸組成的分析表明，當(dāng)飼料必需氨基酸平衡關(guān)聯(lián)度增加到0.7370（3組）時(shí)，框鏡鯉的白肌賴氨酸和必需氨基酸顯著增加且與對(duì)照組差異不顯著。Tarik等（2006）在大西洋鮭飼料中添加賴氨酸可顯著增加肌肉蛋白中賴氨酸的含量。同樣Hellandl和Barbara（2006）在大西洋比目魚飼糧中以谷朊粉替代不同質(zhì)量比例魚粉，發(fā)現(xiàn)配方氨基酸組成的改變會(huì)直接影響全魚蛋白的某些氨基酸組成比例。也可能與飼糧氨基酸變化范圍有關(guān)，Hellandl和 Barbara （2006）發(fā)現(xiàn)，在配方中以谷朊粉部分替代魚粉，當(dāng)賴氨酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)從4.0降低到3.6，大西洋比目魚的全魚賴氨酸含量下降，但低劑量補(bǔ)充外源氨基酸不會(huì)對(duì)魚體相應(yīng)氨基酸產(chǎn)生明顯影響。本試驗(yàn)當(dāng)飼料中添加賴氨酸和蛋氨酸調(diào)節(jié)必需氨基酸的平衡關(guān)聯(lián)度為0.7591時(shí)，賴氨酸和必需氨基酸才顯著增加，所以，在本試驗(yàn)條件下，可適當(dāng)降低飼料的蛋白含量，降低飼料成本。

4 結(jié)論

以植物蛋白質(zhì)為主要蛋白源的框鏡鯉配合飼料，按比例添加賴氨酸和蛋氨酸，以魚體肌肉必需氨基酸的組成和比例為標(biāo)準(zhǔn)，采用灰色關(guān)聯(lián)分析法計(jì)算飼料中10種EAA的模式與魚體所需的10種EAA模式（組成和比例）的接近程度。在本試驗(yàn)的條件下，當(dāng)飼料必需氨基酸的平衡關(guān)聯(lián)度為0.7591時(shí)，框鏡鯉生長(zhǎng)率提高35.86%，生長(zhǎng)離散降低3.25%，飼料粗蛋白質(zhì)含量可降低1.56%，降低飼料成本，可在生產(chǎn)中應(yīng)用和推廣。

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