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        紫外分光光度法測定發(fā)酵液中胞二磷膽堿鈉含量

        2014-10-17 09:18:52陳天來彭奇均
        應用化工 2014年7期
        關鍵詞:胞二光度法分光

        陳天來,彭奇均

        (江南大學化學與材料工程學院,江蘇無錫 214122)

        胞二磷膽堿鈉(CDPC)是卵磷脂生物合成的重要前體,對于改善腦組織代謝,促進大腦功能恢復和促進蘇醒有較好的療效,其在臨床上常用于急性顱腦外傷和腦手術后的意識障礙[1]。

        目前,主要采用生物發(fā)酵法合成胞二磷膽堿鈉[2]。生物發(fā)酵合成胞二磷膽堿鈉時,在對發(fā)酵液進行滅活和固液分離后,發(fā)酵液中除胞二磷膽堿鈉外還常含有蛋白質(zhì)等物質(zhì),常采用離子交換樹脂吸附分離其中的雜質(zhì)以純化胞二磷膽堿鈉[2-5]。

        胞二磷膽堿鈉的主要檢測方法有:HPLC法[6-7]、紫外分光光度法[8-10]。HPLC 法操作復雜,分析條件較為苛刻,不利于發(fā)酵、分離過程中胞二磷膽堿鈉的快速檢測;紫外分光光度法具有快速、簡便、易于操作等優(yōu)點。

        紫外分光光度法需將胞二磷膽堿鈉配制成含0.1 mol/L鹽酸的溶液,在280 nm的波長下測定其吸光度,而采用離子交換樹脂分離純化胞二磷膽堿鈉的過程中伴隨著溶液pH的變化,在不能確定溶液pH的情況下傳統(tǒng)的紫外分光光度法不適用于胞二磷膽堿鈉分離純化過程中的分析。

        雖然傳統(tǒng)的紫外分光光度法并不適用于分離純化過程中胞二磷膽堿鈉的分析,但可通過改進使其能分析任意pH溶液中的胞二磷膽堿鈉含量。本文基于紫外分光光度法,以有別于傳統(tǒng)紫外分光光度法在280 nm下分析,選擇不受溶液 pH影響的265 nm波長為檢測波長作為改進方向,同時研究了不同操作溫度、蛋白質(zhì)濃度等因素對該方法的影響。

        1 實驗部分

        1.1 試劑與儀器

        胞二磷膽堿鈉標準品、胞二磷膽堿鈉發(fā)酵液均由蘇州天馬醫(yī)藥集團提供;鹽酸、氫氧化鈉均為分析純;牛白蛋白,生物試劑。

        TU1901雙光束紫外可見分光光度計(帶恒溫水浴裝置);pH S-25型pH計;EL204電子分析天平。

        1.2 溶液配制

        1.2.1 不同pH的胞二磷膽堿鈉溶液 以鹽酸及氫氧化鈉為溶質(zhì),配制 pH 值分別為 0,2,4,10,12,14的溶液。精密稱取胞二磷膽堿鈉標準品500 mg于燒杯中,加入去離子水溶解并定容于100 mL容量瓶中。

        分別準確移取胞二磷膽堿鈉溶液6,10,16,20,24,30 mL于100 mL容量瓶中,分別加入10 mL不同pH溶液,定容至刻度線。最終使?jié)舛确謩e為30,50,80,100,120,150 μg/mL 的不同濃度的胞二磷膽堿鈉溶液均有 pH 分別為 2,4,6,8,10,12 的胞二磷膽堿鈉溶液。

        1.2.2 含不同濃度牛白蛋白的胞二磷膽堿鈉溶液(含胞二磷膽堿鈉2.5 mg/mL) 精密稱取2.500 g的胞二磷膽堿鈉分別以濃度為 50,75,100,125,150μg/mL的牛白蛋白溶液溶解并定容于100 mL容量瓶。

        1.2.3 胞二磷膽堿鈉標準液(0.5 mg/mL) 精密稱取胞二磷膽堿鈉標準品50 mg,加入去離子水溶解后定量轉移至100 mL容量瓶中定容,得胞二磷膽堿鈉標準液。

        1.3 標準曲線的繪制

        分別精密量取 1,2,4,6,8,10,12,16,20,30 mL的胞二磷膽堿鈉標準液至100 mL容量瓶中,并用去離子水定容,測定其在265 nm波長下的吸光度。以胞二磷膽堿鈉濃度為橫坐標,吸光度為縱坐標作圖,見圖1。

        圖1 胞二磷膽堿鈉濃度與吸光度的關系Fig.1 Absorbance curve of CDPC in different pH

        由圖1可知,胞二磷膽堿鈉溶液在0~150μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性良好,擬合直線方程為 A=0.014 3C+0.001 9,線性相關系數(shù) R2=0.999 7。

        2 結果與討論

        2.1 溶液p H對胞二磷膽堿鈉吸光度的影響

        以去離子水為參比,不同pH的胞二磷膽堿鈉溶液在210~360 nm掃描結果見圖2。

        圖2 不同濃度胞二磷膽堿鈉溶液在不同pH下的光譜掃描曲線Fig.2 Absorbance curve of CDPC in different pH

        由圖2可知:①胞二磷膽堿鈉濃度30~150 g/mL范圍內(nèi),隨pH增大,胞二磷膽堿鈉溶液的最大吸收波長減小;當pH>6時,胞二磷膽堿鈉吸光度光譜掃描曲線在210~360 nm的范圍內(nèi)基本重合,pH對胞二磷膽堿鈉吸光度的測量無影響;②在30~150 g/mL的濃度范圍內(nèi),相同濃度下,不同pH的胞二磷膽堿鈉溶液的光譜掃描曲線均相交于同一點,即在265 nm波長處不同pH的胞二磷膽堿鈉溶液吸光度均相同,即265 nm下胞二磷膽堿鈉吸光度與pH大小無關,故選擇265 nm作為胞二磷膽堿鈉的檢測波長。

        2.2 蛋白質(zhì)的干擾

        將含不同濃度牛白蛋白的胞二磷膽堿鈉溶液稀釋100倍后,以去離子水為參比液,測定其在265 nm波長下的吸光度。結果胞二磷膽堿鈉及蛋白質(zhì)在紫外光區(qū)的吸收區(qū)間幾乎重疊,即在265 nm的波長下蛋白質(zhì)可能會對胞二磷膽堿鈉分析測定產(chǎn)生干擾。

        經(jīng)分析,胞二磷膽堿鈉發(fā)酵液中蛋白質(zhì)含量約為94μg/mL,故配制蛋白質(zhì)濃度分別為 0~150μg/mL且含25 mg/mL胞二磷膽堿鈉混合溶液,測定其265 nm波長下的吸光度,結果見圖3。

        圖3 蛋白質(zhì)濃度對胞二磷膽堿鈉含量分析的影響Fig.3 Absorbance curve of CDPC in different pH

        由圖3可知,在265 nm波長測定得到吸光度的波動<1.5%,表明蛋白質(zhì)對該方法分析胞二磷膽堿鈉濃度影響小,可忽略不計。

        2.3 測定溫度的影響

        分別精密量取 2,4,8,12,16,20 mL 的胞二磷膽堿鈉標準液至100 mL容量瓶中,并用去離子水定容,分別在10,15,20,25,30 ℃的恒溫條件下測定其在265 nm波長下的吸光度,結果見圖4。

        圖4 胞二磷膽堿鈉溶液吸光度與溫度的關系Fig.4 Absorbance curve of CDPC in different pH

        由圖4可知,在10~30℃的范圍內(nèi)胞二磷膽堿鈉溶液在265 nm下的吸光度呈現(xiàn)水平,說明吸光度不受溫度的影響,故可在10~30℃的范圍內(nèi)的任意溫度下測定胞二磷膽堿鈉濃度。

        2.4 方法的精密度及加標回收率

        2.4.1 精密度 重復測定同一樣品在265 nm的吸光度,結果見表1。

        表1 精密度實驗結果Table1 Precision experimental result

        由表1可知,方法的相對標準偏差為0.178%,表明方法精密度較高。

        2.4.2 加標回收率 吸取10 mL濃度為30μg/mL的胞二磷膽堿鈉溶液8份,分別加入10 mL濃度為40,50μg/mL的胞二磷膽堿鈉溶液混合均勻,測定其吸光度,結果見表2。

        表2 加標回收率Table2 Recovery of standard addition

        由表2可知,各樣品的加標回收率均>95%,說明該方法具有較高的準確度。

        3 結論

        以265 nm作為檢測波長,建立了胞二磷膽堿鈉的紫外吸收分析法,此波長下胞二磷膽堿鈉吸光度不受溶液pH影響。由于發(fā)酵液中蛋白質(zhì)含量小,對胞二磷膽堿鈉分析影響可忽略,并且此方法在10~30℃的范圍內(nèi)不影響胞二磷膽堿鈉分析。

        胞二磷膽堿鈉濃度在一定范圍內(nèi)與吸光度呈線性相關,其線性回歸方程為A=0.014 3C+0.001 9,線性相關系數(shù) R2=0.999 7,線性范圍為 5~100μg/mL,相對標準偏差為0.178%,平均加標回收率為100.87%,重現(xiàn)性好。本法測定操作簡便、準確,適用于發(fā)酵液中胞二磷膽堿鈉含量的測定。

        [1] 顧復昌,楊亮懿.胞二磷膽堿的生產(chǎn)[J].發(fā)酵科技通訊,2007,36(1):9-11.

        [2] 侯立向,趙晜.胞二磷膽堿的發(fā)酵合成及其純化[J].生物化學與生物物理進展,1979(5):40-48.

        [3] 黃穎,邱蔚然,孫翠萍,等.發(fā)酵液中提取胞苷二磷酸膽堿的工藝改進[J].醫(yī)藥工業(yè),1985,16(1):3-5.

        [4] 蘇州天馬醫(yī)藥集團.胞磷膽堿鈉的制備方法:CN,194461A[P].2007-04-11.

        [5] 南通秋之友生物科技有限公司.一種從生物轉化或多酶反應液中分離純化胞二磷膽堿鈉的方法:CN,101096380A[P].2008-01-02.

        [6] 顧頌青.胞磷膽堿鈉及其注射液的HPLC測定[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志,2002,33(8):397-398.

        [7] 佟愛東,鄧兆勇.高效液相色譜法測定胞磷膽堿鈉及有關物質(zhì)的含量[J].中國生化藥物雜志,2001,22(1):31-32.

        [8] 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準二部:第六冊[M].北京:中華人民共和國衛(wèi)生部,1998.

        [9] 張?zhí)m存,杜增輝.胞二磷膽堿鈉紫外吸光系數(shù)的測定[J].中國生化藥物雜志,1994,15(1):30-32.

        [10]程宓,徐世清,秦建明,等.用紫外分光光度法分析胞二磷膽堿與川芎嗪的配伍[J].中國療養(yǎng)醫(yī)學,2001(5):26-28.

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