肖志強(qiáng)，任 哲，楊建剛，郭 晨

(陜西新藥技術(shù)開發(fā)中心，陜西西安 710075)

魚金注射液屬于國家中藥二類新藥，具有清熱解毒的作用，臨床上主要用于治療急性上呼吸道感染、急性支氣管炎等［1］。該注射液以魚腥草、金銀花為主藥，采用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)性成分，經(jīng)配制而成的純中藥靜脈用注射劑。

為了研究注射液中甲基正壬酮含量在不同前處理方法的含量變化情況，我們以乙酸乙酯為溶劑，分別采用萃取法、回流法對(duì)魚金注射液進(jìn)行前處理，采用氣相色譜法［2］，用鍵合交聯(lián)聚乙二醇為固定液的毛細(xì)管柱分離，氫火焰離子化檢測(cè)器檢測(cè)，對(duì)兩種方法提取出的甲基正壬酮進(jìn)行定量分析［3-4］。以期為魚金注射液含量測(cè)定方法選擇提供可靠的依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

甲基正壬酮(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):120420);魚金注射液(陜西醫(yī)藥控股集團(tuán)山海丹藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào):13070060，13080067，13080068);乙酸乙酯、氯化鈉均為分析純。

GC7890A氣相色譜(包括Chemstation工作站，AgilentG4567A系列自動(dòng)進(jìn)樣器，F(xiàn)ID檢測(cè)器);AG-135型電子分析天平;HH-S4型電熱恒溫水浴鍋;PB3002-S型電子分析天平;揮發(fā)油提取器及冷凝裝置。

1.2 色譜條件

色譜柱為鍵合交聯(lián)聚乙二醇為固定液的毛細(xì)管柱(60 m×250μm×0.25μm)，載氣為高純度氦氣，F(xiàn)ID檢測(cè)器，載氣流速1.2 mL/min，進(jìn)樣口溫度230℃，檢測(cè)器溫度280℃，分流比為5∶1，程序升溫初始80℃，保持5 min，以5℃/min升溫速率升至220℃，保持3 min，進(jìn)樣量為1μL。

1.3 供試品溶液的制備

1.3.1 魚金注射液萃取法處理 精密量取魚金注射液25 mL，置具塞試管中，加入乙酸乙酯5 mL，氯化鈉5 g，振搖3 min。分取乙酸乙酯層，再加入乙酸乙酯5 mL，振搖3 min，分取乙酸乙酯層。合并乙酸乙酯提取液轉(zhuǎn)至10 mL量瓶中，用乙酸乙酯稀釋至刻度，搖勻。

1.3.2 魚金注射液回流法處理 精密量取魚金注射液25 mL，置圓底燒瓶中，加水25 mL，連接揮發(fā)油測(cè)定器。自測(cè)定器上端加水使充滿刻度部分，再加醋酸乙酯約3 mL，連接回流冷凝管。加熱回流2 h，停止加熱，放置片刻，分取醋酸乙酯層，測(cè)定器用醋酸乙酯洗滌3次，每次2 mL，合并洗滌液，置蒸發(fā)器中60℃水浴，通氮?dú)庹糁两桑哭D(zhuǎn)移至2 mL量瓶中，并加醋酸乙酯稀釋至刻度，搖勻。

1.4 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

取甲基正壬酮標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1 mL含甲基正壬酮41.04μg的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

1.5 樣品測(cè)定

按1.2節(jié)條件方法，分別吸取標(biāo)準(zhǔn)品溶液、供試品溶液1.0μL，進(jìn)樣于氣相色譜儀，以外標(biāo)法計(jì)算含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 保留時(shí)間的確定

將色譜純甲基正壬酮用乙酸乙酯溶解后，按1.2節(jié)條件方法進(jìn)行分析，保留時(shí)間見表1，典型色譜圖見圖1。

表1 甲基正壬酮的保留特性Table1 Retention characteristics of methylnonylketone

圖1 標(biāo)樣(a)和樣品(b)的色譜圖Fig.1 Chromatogram of standard sample(a)and typical sample(b)

2.2 兩種方法檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

在氣相色譜進(jìn)行含量測(cè)定過程中沒有采用頂空進(jìn)樣，原因是考慮到生產(chǎn)廠家檢測(cè)的快捷方便，和該種方法的適用性。在萃取過程中，劇烈的震搖會(huì)產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，可采用冰箱冷藏來消除乳化現(xiàn)象。

表2 甲基正壬酮含量Table2 Content of methylnonylketone

由表2可知，魚金注射液在回流提取條件下，同一批次含量很不穩(wěn)定，而萃取前處理?xiàng)l件下有效成分甲基正壬酮的含量更均一，有利于方法的建立。

3 結(jié)論

(1)回流法提取甲基正壬酮，采用揮發(fā)油測(cè)定器收集得到的甲基正壬酮，時(shí)間在3 h以上才能提取完全，在樣品處理中費(fèi)時(shí)，不利于樣品的快速檢測(cè)。

(2)回流法提取甲基正壬酮在樣品溶液濃縮過程中，為保證樣品穩(wěn)定不被分解，采用通氮?dú)獾姆椒?，這樣加大了樣品前處理的難度。

(3)回流法提取甲基正壬酮為國家批準(zhǔn)的生產(chǎn)用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)前處理方法，通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)每一批次因受加熱溫度的影響，含量不均一，因此結(jié)合生產(chǎn)快速檢測(cè)的要求，我們對(duì)萃取法進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)可以作為生產(chǎn)用質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，方法精密度高，耗時(shí)短，簡便、快捷［5］?，F(xiàn)在我們已經(jīng)申請(qǐng)國家藥監(jiān)局進(jìn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)升級(jí)。

［1］ 劉杰，陳海金.魚金注射液的一般藥理學(xué)研究［J］.中國藥物與臨床，2009，9(3):223-224.

［2］ 王永苗.氣相色譜法測(cè)定洗油中甲基萘的含量［J］.應(yīng)用化工，2013，42(6):1156-1158.

［3］ 韓爽，張明時(shí)，周貽兵，等.氣相色譜法測(cè)定魚腥草干品中甲基正壬酮的含量［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38(28):15606-15607.

［4］ 寧娜，韓建軍.魚腥草活性成分提取工藝研究進(jìn)展［J］.黑龍江醫(yī)藥，2013，26(4):617-619.

［5］ 田鋒賢.對(duì)魚金注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的商榷［J］.陜西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，29(4):67-68.