劉圓月 侯菊花 李 燦

益陽醫(yī)學高等專學校病理教研室，湖南益陽 413000

Krupple樣轉錄因子6（KLF6）屬于一種核轉錄調控因子，能夠與靶基因啟動子區(qū)域的GC盒以及CACCC盒等核心元件進行特異性地結合，從而發(fā)揮生物效應，是近年來發(fā)現(xiàn)的一種抑癌基因，具有抑制細胞生長以及殘余細胞衰老調控等功能[1-2]。P21基因是20世紀90年代發(fā)現(xiàn)對的一種全新的抑癌基因，可通過與Cyclin cdk復合物之間相結合對Rb蛋白的磷酸化過程起到一定的抑制作用，從而對細胞周期進行負調控[3]。本研究主要以口腔癌組織為研究對象，著重探討了KLF6蛋白在口腔癌中的表達及其與p21蛋白的關系，現(xiàn)報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2007年9月～2012年9月入住益陽醫(yī)學高等專學校附屬醫(yī)院的50例口腔癌組織、50例口腔癌旁組織及50例正?？谇唤M織作為研究對象?？谇话┗颊咧?，男29例，女21例；年齡19～78歲，平均（50.20±11.38）歲；口腔癌旁組織均取自于本組患者；正?？谇换颊咧校?7例，女 23例；年齡20～74歲，平均（47.09±9.39）歲。 入選標準[4]：①經病理學診斷為口腔癌；②術前患者均未進行放化療；③具有完整的臨床資料等。兩組患者均經醫(yī)院倫理委員會批準且經患者本人知情同意入組。三組患者在性別、年齡等方面差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 免疫組織化學染色

所有組織均使用10%的甲醛進行固定，使用石蠟進行包埋，4 μm厚連續(xù)進行切片，組織切片常規(guī)烤片、脫蠟、微波抗原修復以及清除內源性過氧化物酶、DAB顯色，蘇木精襯染；使用已知陽性切片作為陽性對照，使用磷酸鹽緩沖液（PBS）來代替一抗作陰性對照。染色方法具體參考說明書進行操作[5]。

1.3 結果判定標準

KLF6陽性標記部位在細胞核和細胞漿；p21陽性標記部位主要在細胞核。采用雙盲法由2名經驗豐富且不知道臨床資料的臨床病理專家分別獨立作出判斷：400倍視野隨機計數(shù)4個不同視野的陽性細胞數(shù)和細胞總數(shù)，計算陽性細胞占細胞總數(shù)的比值。參照Fromowit等的方法在高倍鏡下對著色反應作評分：a.無著色為 0分，淡黃色為 1分，棕黃色為 2分，棕褐色為3分；b.陽性范圍：無著色為0分，＞0%～10%為1分，＞10%～50%為 2分，＞50%～80%為 3分；＞80%～100%為 4 分，兩項結果相乘，0～6 分為陰性（-），7～12分為陽性（+）[6]。

1.4 統(tǒng)計學方法

采用統(tǒng)計學軟件SPSS 16.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計及分析，計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗，相關性采用線性回歸分析的方法進行分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 KLF6及p21表達與口腔癌臨床病理因素的關系

由表1可知，KLF6及p21表達在浸潤深度方面，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），但在年齡、性別、腫瘤大小、Dukes′分期及淋巴轉移等方面差異無統(tǒng)計學差異（P ＞ 0.05）。 見表1。

表1 Krupple樣轉錄因子6（KLF6）及 p21表達與口腔癌臨床病理因素的關系（n=50）

2.2 KLF6及p21蛋白在口腔癌、癌旁組織及正常口腔組織中的表達情況

由表2可知，KLF6及 p21蛋白陽性表達率大小為：口腔癌 ＞癌旁組織 ＞正?？谇唤M織，且兩種蛋白在上述三種組織中的陽性表達率相比，差異有高度統(tǒng)計學意義（P ＜ 0.001）。見表2。p21、KLF6在口腔癌組織及口腔癌旁組織中的表達見圖1。

表2 Krupple樣轉錄因子6（KLF6）及 p21蛋白在口腔癌、癌旁組織及正常口腔組織中的表達（例）

圖1 p21、KLF6在口腔癌組織及口腔癌旁組織中的表達

2.3 KLF6與p21蛋白在口腔癌組織中的關系

由表3可知，口腔癌組織中KLF6與p21具有正相關性（r=0.568，P ＜ 0.01）。 見表3。

表3 Krupple樣轉錄因子6與p21蛋白在口腔癌組織中的關系（例）

3 討論

相關研究證實，絕大多數(shù)腫瘤細胞均存在著一些細胞周期調控因子的表達異常，哺乳動物分裂與分化的主要調節(jié)事件發(fā)生在G1期，而該時期周期蛋白會出現(xiàn)異常表達可能會引起細胞周期的失調，進而引起腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[7-8]。在這其中，腫瘤的發(fā)展受到多種基因的影響，其中KLF6基因等[9]。KLF6基因編碼蛋白由283個氨基酸所組成，即82個氨基酸的鋅指DNA結合區(qū)與氨基端的2012個氨基酸的轉錄調節(jié)區(qū)所構成。KLF6參與細胞的生長、繁殖、凋亡、血管生成以及組織損傷修復等過程，同時它在腫瘤的發(fā)生與發(fā)展過程中發(fā)揮著十分重要的作用[10]。相關臨床研究表明：KLF6基因的失活與散發(fā)性口腔癌存在直接的關系，其機制可能與APC、K-RAS等基因的缺失存在一定的關聯(lián)性[11]。

有研究報道稱，KLF6與肝癌及前列腺癌的發(fā)生存在十分密切的關系[12]。該基因主要通過對腫瘤細胞的增殖產生的抑制以及促腫瘤細胞凋亡的作用，且其表達還與體內NO的合成存在一定的關系，可使得細胞內源性NO合成酶的mRNA的表達能力大大增加，有臨床研究表明，NO合成酶mRNA的表達速度會提高 4倍左右[9]。 同時，TGF-β1與 TGF-βⅠ、Ⅱ型受體以及誘生型NO合成酶等也是KLF6的靶基因。這些靶基因均能夠參與機體的細胞周期的調控以及細胞凋亡等過程之中，上述均說明了KLF6對腫瘤會產生抑制作用[13]。本研究結果表明，KLF6與口腔癌的發(fā)生、發(fā)展相關?？谇话┙M織中KLF6的表達要明顯高于正?？谇唤M織與癌旁組織，且隨著細胞分化程度地逐漸降低，細胞增殖能力會逐漸增強以及細胞腫瘤化程度增加，此時，有大量異常的 KLF5會聚集在細胞漿之中，說明了細胞漿表達的KLF6能夠作為判定腫瘤惡性程度的一個重要指標[14]。

細胞生長控制是正常組織的一個十分重要的特點，如果細胞的生長控制能力喪失了，那么就會使得腫瘤細胞的生長與繁殖。調控細胞生長的一個非常關鍵的因子就是p21蛋白，它是一種細胞周期依賴性激酶抑制物，通過阻止Rb基因的磷酸化而對轉錄因子E2F的活性加以調節(jié)[4]。具體的調節(jié)過程為：當Rb基因處于磷酸化狀態(tài)的時候，調節(jié)細胞周期進展的某些關鍵基因的轉錄不能被E2F激活[15-16]。因此，p21阻止了G1期向S期的過渡過程，將細胞周期阻止在二者之間，從而對細胞的生長產生抑制性作用。劉圓月等[16]推測p21基因的失活是口腔癌發(fā)生過程中的早期分子事件。

本研究觀察指標為：KLF6及p21蛋白在口腔癌、癌旁組織及正?？谇唤M織中的表達情況及KLF6與p21蛋白在口腔癌組織中的關系。結果表明：KLF6及p21蛋白陽性表達率大小為：口腔癌 ＞癌旁組織 ＞正?？谇唤M織，且兩種蛋白在上述三種組織中的陽性表達率相比，差異有高度統(tǒng)計學意義（P＜0.001）；口腔癌組織中KLF6與p21具有正相關性（r=0.568，P＜0.01）。

綜上所述，KLF6與p21蛋白在口腔癌的發(fā)生與發(fā)展中可能具有非常重要的作用，且兩者在口腔癌組織中呈現(xiàn)正相關關系。

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