黃小春 蔣掬月

1.廣西方略集團龍州制藥有限公司，廣西 崇左 532400;2.廣西方略藥業(yè)集團有限公司，廣西 南寧 530221

黑老虎根系木蘭科植物厚葉五味子Kadsura coccinea(Lem.)A.C.Smith的干燥根，別名冷飯團、緋紅南五味子、過山龍?zhí)俚?，主要分布于廣西、廣東、云南、貴州等地[1]。根據(jù)文獻[2，3]，黑老虎根的主要有效成分為聯(lián)苯環(huán)辛二烯類木脂素，其中有許多成分也為五味子屬植物的共有成分，如五味子素類，戈米辛類等。其性味苦、溫，功能行氣活血、消脹止痛、祛風(fēng)活絡(luò)，民間常用于治療慢性胃炎、急性胃腸炎、風(fēng)濕痹痛、跌打損傷和骨折等。黑老虎根質(zhì)量標準收載于《中國藥典》77年版一部，項下僅有化學(xué)顯色鑒別，專屬性不強，為了更好的控制藥材質(zhì)量，本文采用薄層色譜法對不同產(chǎn)地的黑老虎根藥材進行定性鑒別研究，為提高藥材質(zhì)量標準提供依據(jù)。

1 材料及方法

1.1 實驗材料 黑老虎根，來源于廣西龍州、廣東清遠、云南文山和貴州都勻，購自玉林鑫康藥材有限公司，經(jīng)廣西中醫(yī)學(xué)院藥用植物教研室劉壽養(yǎng)副教授鑒定均為木蘭科植物厚葉五味子 Kadsura coccinea(Lem.)A.C.Smith的干燥根;黑老虎根對照藥材，批號:121438-200401，購自中國藥品生物制品檢定所;硅膠H，薄層層析用，青海海洋化工廠;實驗所用試劑均為分析純。

1.2 方法

1.2.1 供試品溶液的制備 取廣西龍州的黑老虎根藥材粉末2g，加95﹪乙醇25ml，加熱回流30min，濾過，將濾過液均分為二份:①一份濃縮至2ml，備用;②另一份將濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，備用。將這兩種方法處理得到的提取液經(jīng)薄層色譜展開，結(jié)果:方法①溶出的物質(zhì)較多，拖尾，分離效果差。方法②樣品醇提液經(jīng)三氯甲烷處理后得到了精制，斑點清晰，雜質(zhì)干擾少，無明顯拖尾，因此選擇方法②。

1.2.2 對照藥材溶液的制備 取黑老虎根對照藥材2g，加95﹪乙醇25ml，加熱回流30min，濾過，濾液按“1.2.1供試品溶液的制備”項下的方法②，同法制成對照藥材溶液。

1.2.3 展開劑的選擇 參考文獻[4]關(guān)于五味子的鑒別方法，主要試驗了①甲苯–乙酸乙酯 (9∶1)，展開后，分離出的斑點不夠圓整，比移值太小，沒有得到很好分離;②甲苯–乙酸乙酯 (6∶4)，主斑點間沒有分開，且主斑點下方有拖尾;③甲苯–乙酸乙酯 (7∶3)，展開后，分離出的斑點較圓整，且主斑點的上、下方未見明顯拖尾，比移值適中，因此選擇此組展開系統(tǒng)。

1.2.4 顯色劑的選擇 曾噴以10﹪磷鉬酸乙醇溶液，加熱顯色，因其底色過重，不好觀察，改用碘蒸氣顯色，顯清晰棕黃色斑點。

1.2.5 點樣量的選擇 對點樣量2、4、6、8μl進行考察，隨著點樣量依次增大，展開顯色后的斑點顏色逐漸加深，但點樣量增至8μl時，分離度有所下降，拖尾現(xiàn)象逐漸顯現(xiàn);采用2μl點樣量時，展開顯色后的斑點顏色淺，不易觀察;采用4、6μl點樣量，展開顯色后，斑點清晰，分離效果好，綜合考慮，確定點樣量為4～6μl。

1.2.6 樣品的檢查 分別取四個產(chǎn)地的藥材粉末，按上述方法制成供試品溶液，以黑老虎根對照藥材制成對照藥材溶液，按上述篩選出的薄層色譜條件進行檢查，觀察其薄層色譜圖。

2 結(jié)果

2.1 四個產(chǎn)地黑老虎根薄層色譜圖譜顯示，各供試品色譜中，在與對照藥材溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點，見圖1。

2.2 綜合上述實驗結(jié)果，擬定本品的薄層鑒別方法為:取黑老虎根藥材粉末2g，加95﹪乙醇25ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液水浴蒸干，殘渣加三氯甲烷2ml使溶解，作為供試品溶液，另取黑老虎根對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法 (中國藥典2010年版一部附錄ⅥB)試驗，吸取上述兩種溶液各4～6μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，以甲苯–乙酸乙酯 (7∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，置碘蒸氣中熏。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點。

3 討論

3.1 當(dāng)環(huán)境濕度小于75﹪時，斑點間界限模糊，分離不好，而濕度大于75%時，各斑點有較好的分離度，展出的斑點清晰、圓整，因此，在進行該項檢查時，要求控制相對濕度大于75%。

3.2 因為所用黑老虎根藥材來自不同產(chǎn)地，其供試液主要成分含量肯定有所差異，在實驗過程中，發(fā)現(xiàn)廣西龍州藥材的得膏率較廣東、云南和貴州三地的高，故將點樣量的范圍定在4～6μl之間，此時在薄層板上可獲得滿意的層析結(jié)果。

[1]江蘇新醫(yī)學(xué)院 .中藥大辭典 [M].上海:上海人民出版社，1977:1151.

[2]艾菁，李于善.冷飯團化學(xué)成分及其活性研究進展[J].化學(xué)與生物工程，2005，(2):7–9.

[3]陳業(yè)高，李國寶，張燕.云南產(chǎn)五味子科藥用植物化學(xué)成分研究進展[J].云南化工，2003，30(3):53-57.

[4]呂武清，龍新華.中成藥的藥材薄層色譜鑒別[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1996:124-125.