李海英

大同市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局檢驗測試所，山西大同 037000

液相色譜儀是廣泛應(yīng)用在研究所，實驗室等場所、對所研究樣品進(jìn)行分離分析的常規(guī)儀器之一。它的優(yōu)點主要有：1）可以在短時間內(nèi)把樣品分析出來；2）對于所分析樣品沒有太多要求，只要能制成液體即可；3）不需要太多的樣品就可以分析出來；4）對于各組分含量很少的樣品也能分析出來。以上優(yōu)點決定了該儀器在生物、醫(yī)藥、食品、材料等各領(lǐng)域研究工作的廣泛應(yīng)用。

1 液相色譜儀的原理

高壓泵利用高壓把流動相壓進(jìn)系統(tǒng)中，然后樣品溶液從進(jìn)入到流動相中，并跟隨流動相運動，最終進(jìn)入色譜柱中，由于樣品溶液的各個組成物質(zhì)具有不同的性質(zhì)，在色譜柱中運動時會有一定的差異，經(jīng)過一段時間的運動以后，運動速度差異會變得越來越大，這樣就被分成多個部分分別從色譜柱中流出，這樣在檢測器中就記錄下了這些樣品組分的濃度，然后以圖譜的形式呈現(xiàn)出來。

2 液相色譜儀的組成

液相色譜儀主要由加入樣品系統(tǒng)、輸送樣品系統(tǒng)、分離樣品系統(tǒng)、檢測結(jié)果系統(tǒng)和結(jié)果分析處理系統(tǒng)組成。

2.1 樣品加入系統(tǒng)

一般是用安裝有隔膜的注射器或者是利用高壓來加進(jìn)樣品，為了提高所分析樣品的重復(fù)性，要在加樣時注意使每次加入的樣品量保持相同。

2.2 樣品輸送系統(tǒng)

高壓泵、流動相貯存器和梯度儀三部分組成了輸送樣品系統(tǒng)。高壓泵的一般壓強(qiáng)為 14.7MPa～44MPa，如此高的壓強(qiáng)可以使待分析樣品液體以相當(dāng)大的速度通過層析柱，較大速度可降低樣品在層析柱中向四周擴(kuò)散。貯存器和密度梯度儀的作用是使樣品流動相隨著所用固定相和樣品的變化而變化，具體包括改變洗脫液的吸水性、陰陽離子濃度、PH值，這樣就可使各種樣品成分最終都可以實現(xiàn)有效的分離，增強(qiáng)分離的效果。

2.3 樣品分離系統(tǒng)

首先，長度一般為1dm～5dm，內(nèi)徑為0.2cm～0.5cm的色譜柱、有時候需要有連接管和保持溫度恒定的儀器等組成了樣品分離系統(tǒng)。色譜柱的材料是不銹鋼，、厚壁玻璃管、鈦合金等。色譜柱內(nèi)是半徑為2.5μm～5μm的固定相，固定相中的基質(zhì)材料是樹脂或硅膠，它們的特點是有一定的化學(xué)惰性、多孔、比表面積大，另外還通過運用各種方法偶聯(lián)上各種極性基團(tuán)。這樣就可以篩選出結(jié)構(gòu)不同的多種物質(zhì)。例如，如果上述硅膠表面被PSA偶聯(lián)以后，就可以很輕松地把成纖維細(xì)胞中產(chǎn)生的一種糖蛋白分離出來。

其次，固定相中所裝的物質(zhì)粒度小，柱床特別容易達(dá)到均勻、致密的狀態(tài)，這樣就可以極大地降低擴(kuò)散效應(yīng)。這樣就有利于縮小各個條帶的寬度、并且提高分辨率。當(dāng)然，這也正好符合了柱效理論。

最后，恒溫器可以使儀器內(nèi)的溫度使從25℃升高到60℃左右，溫度越高，樣品在層析柱中傳輸?shù)乃俣纫簿驮酱?，分析時間也就減少，從而提高液相色譜儀的分析分離效率。

3 液相色譜儀各部分的檢定方法和注意事項

液相色譜儀是高精度儀器之一，其檢定需要根據(jù)《液相色譜儀》的相關(guān)規(guī)定來進(jìn)行，這一部分內(nèi)容是國家計量檢定規(guī)程（JJG705-2002）中獨立的一部分。接下來簡單介紹一下常規(guī)檢定項目的檢定方法及注意事項。

3.1 泵流量設(shè)定量誤差Ss和流量穩(wěn)定性誤差SR

3.1.1 檢定方法

泵流量的檢測是根據(jù)液相色譜儀上標(biāo)定的流量標(biāo)準(zhǔn)來設(shè)定好標(biāo)準(zhǔn)流量，然后打開儀器，按照正確的操作步驟進(jìn)行操作，等到壓力趨于穩(wěn)定以后在規(guī)定的時間內(nèi)收集流動相于處理過可以直接使用的容量瓶中，同時由同一個人計時，在規(guī)定的時間內(nèi)收集好流動相（以上操作重復(fù)三次），然后在分析天平上稱量所收集的流動相的質(zhì)量。按照公式

3.1.2 注意事項

收集流動相和計時要由同一個人來完成，這樣就可以減少不同時而造成的計時誤差；由于甲醇是極易揮發(fā)的液體，所以在收集的過程中要密封，收集好以后立即稱重，稱重結(jié)果要換算成體積然后保留小數(shù)點后三位有效數(shù)字；這一過程要重復(fù)至少三次以減少偶然誤差，增強(qiáng)結(jié)果說服力。

3.2 色譜柱溫箱溫度的檢定

3.2.1 檢定方法

在色譜柱溫箱內(nèi)固定一個溫度計，使溫度計的探頭能夠測量色譜柱的溫度。分別選擇35℃和45℃作為檢測溫度進(jìn)行檢定。按照液相色譜儀的操作規(guī)程操作，等到溫度穩(wěn)定在一定值時，記錄下溫度計的讀數(shù)，與此同時開始用秒表計時，每隔10min記一次讀數(shù)，總共記錄7組數(shù)據(jù)，然后求出算術(shù)平均數(shù)，算數(shù)平均數(shù)與所設(shè)定的35℃或45℃的差值就是柱溫箱溫度設(shè)定值誤差ΔTs，而讀數(shù)中最高溫度與最低溫度的差值是控溫穩(wěn)定性Tc。

3.2.2 注意事項

溫度的升高在通常情況下會加大理論塔板數(shù)，峰和峰之間的距離變小，但是要保證每個峰的面積不變，所以在峰距變小的情況下，峰的高度就會增高，所以溫度升高會使保留的時間變短，而溫度降低正好相反。

3.3 基線噪聲與基線漂移的檢定

3.3.1 檢定方法

在進(jìn)行這個項目的檢定時，用C18作為色譜柱的材料，用無水甲醇作為液相色譜儀中的流動相，設(shè)定適當(dāng)?shù)母邏菏沽魉贋?.0dm3/min，并且使儀器處于最靈敏的狀態(tài)，記錄紙的移動速度設(shè)定為0.5～1cm/min。按照正確的操作步驟操作，待穩(wěn)定運行半小時后，根據(jù)檢測器的衰減倍數(shù)和對應(yīng)的標(biāo)度來算基線噪聲。所用的公式是Nd=KB?；€漂移的值是在一個小時內(nèi)檢測器基線偏離坐標(biāo)原點的距離。

3.3.2 注意事項

在進(jìn)行此項目鑒定時，儀器中不能有無水甲醇以外的其他物質(zhì)作為流動相；如果基線處于非正常狀態(tài)，那么需要排除故障使儀器處于正常工作狀態(tài)，這樣測定的值才具有真實性；在測得基本的數(shù)據(jù)以后，要注意在計算過程中換算各個數(shù)據(jù)的單位，否則所得結(jié)果將是不正確的。

3.4 最小檢測濃度的檢定

3.4.1 檢定方法

3.4.2 注意事項

在計算的時候，分母中的“20”是按照20的進(jìn)樣體積計算，而不是按照濃度來計算的。

3.5 整機(jī)性能的檢定

3.5.1 檢定方法

首先使整個儀器處于正常工作的狀態(tài)，按照儀器本身所配置的檢測器來選擇測量參數(shù)：紫外檢測器和二極管陣列檢測器用無水甲醇作為流動相，流量設(shè)定在，波長值設(shè)定為254nm，0.04的靈敏度，待基線穩(wěn)定后加入5μ～10μ的萘∕甲醇標(biāo)準(zhǔn)溶液；熒光檢測器則與上述兩個檢測器不同，它所用的流動相是85%的甲醇溶液，流量相同，兩個波長值分別是345nm、455nm，靈敏度值選擇居中的檔位，待基線穩(wěn)定后加入相同體積的硫酸奎寧/高氯酸水溶液；折光率檢測器用無水乙醇做流動相，流速值、靈敏度值選擇的選擇與熒光檢測器的相同，加入5～10μ1kg/L的丙三醇溶液。以上各檢測器的檢測值要得到六組，并記錄峰的保留時間和峰面積，按照下面的公式計算RSD。

3.5.2 注意事項

要使儀器處于正常工作中，這樣才能使得數(shù)據(jù)具有說服力。要真實記錄各組數(shù)據(jù)。

4 結(jié)論

以上只是介紹了液相色譜儀的幾個常見項目的檢定方法及注意事項，液相色譜儀的更新速度在不斷地加快，這就對檢定人員提出了更高的要求，需要他們不斷地學(xué)習(xí)新的檢定方法，多思考，多總結(jié)，提高自己的檢定水平，為更多研究人員提供更可靠的服務(wù)。

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