李春碧，伏 攀（四川省廣元市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科 628000）

血細(xì)胞分析儀已廣泛應(yīng)用于各級(jí)臨床實(shí)驗(yàn)室，但如果未對(duì)分析儀進(jìn)行嚴(yán)格的性能評(píng)價(jià)、不了解儀器性能而盲目操作，將產(chǎn)生明顯的檢驗(yàn)誤差，影響檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性［1］。對(duì)分析儀進(jìn)行全面性能評(píng)價(jià)，有助于掌握儀器的性能。本研究以國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（ICSH）和美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NCCLS）制定的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)BC－6600型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（簡(jiǎn)稱 BC－6600型分析儀）進(jìn)行了性能評(píng)價(jià)［2－3］，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 乙二胺四乙酸二鉀抗凝靜脈血標(biāo)本采集自本院門診患者。

1.2 儀器與試劑 BC－6600型分析儀、BC－5800型全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀（簡(jiǎn)稱BC－5800型分析儀）及配套檢測(cè)試劑、全血細(xì)胞質(zhì)控物（批號(hào)BC309AN）、網(wǎng)織紅細(xì)胞質(zhì)控物（批號(hào) ME073）均購自邁瑞公司。

1.3 方法 按照ICSH和NCCLS制定的血細(xì)胞分析儀性能評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RBC）、血紅蛋白（Hb）、血小板計(jì)數(shù)（PLT）、網(wǎng)織紅細(xì)胞計(jì)數(shù)（RET）檢測(cè)精密度、準(zhǔn)確度、攜帶污染率、線性范圍和可比性進(jìn)行性能評(píng)價(jià)。

1.3.1 精密度 （1）批內(nèi)精密度測(cè)定：取高、中、低值新鮮抗凝靜脈血，分別使用手動(dòng)進(jìn)樣模式和自動(dòng)進(jìn)樣模式，連續(xù)重復(fù)測(cè)定10次，計(jì)算變異系數(shù)（CV）。要求CV在廠家標(biāo)示范圍內(nèi)，未達(dá)到要求者，不能進(jìn)行余下相關(guān)試驗(yàn)。廠家標(biāo)示的BC－6600型分析儀各指標(biāo)CV要求如下：WBC＜2.5%、RBC＜1%、Hb＜1%、PLT＜4%、RET＜15%。（2）批間精密度測(cè)定：采用高、中、低值質(zhì)控品，連續(xù)測(cè)定20d，計(jì)算CV。

1.3.2 準(zhǔn)確度 選擇開放全血模式，完成BC－6600型分析儀校準(zhǔn)后，重復(fù)10次測(cè)定校準(zhǔn)品，計(jì)算實(shí)測(cè)值均值、相對(duì)偏差（Bias），Bias＝（實(shí)測(cè)值均值－靶值）／靶值×100%。要求Bias小于美國國會(huì)頒布的臨床實(shí)驗(yàn)室修正案（CLIA′88）標(biāo)準(zhǔn)的1／2。

1.3.3 攜帶污染率 取高值新鮮抗凝靜脈血，混合均勻后采用手動(dòng)進(jìn)樣模式連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為H1、H2、H3；再取低值新鮮抗凝靜脈血，混合均勻后采用手動(dòng)進(jìn)樣模式連續(xù)測(cè)定3次，測(cè)定值分別為L(zhǎng)1、L2、L3。攜帶污染率（%）＝（L1－L3）／（H3－L3）×100%。

1.3.4 可比性 采用校準(zhǔn)品對(duì)BC－5800型分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)，并以其為靶機(jī)；隨機(jī)選擇經(jīng)BC－5800型分析儀檢測(cè)的新鮮抗凝靜脈血50例，采用BC－6600型分析儀進(jìn)行檢測(cè)。2臺(tái)分析儀均采用自動(dòng)全血模式進(jìn)行WBC、RBC、Hb、PLT檢測(cè)。對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸分析，計(jì)算相關(guān)系數(shù)的平方值（r2）及線性回歸方程。

1.3.5 線性范圍 選擇 WBC、RBC、Hb、PLT、RET 高值標(biāo)本，按100%、80%、60%、40%、20%、10%的比例制備稀釋標(biāo)本，計(jì)算理論值，理論值＝實(shí)際值×稀釋倍數(shù)。開放全血模式下，采用BC－6600型分析儀對(duì)所有標(biāo)本分別連續(xù)測(cè)定3次，計(jì)算實(shí)測(cè)值。對(duì)各指標(biāo)實(shí)測(cè)值與理論值進(jìn)行線性回歸分析。

1.3.6 WBC分類計(jì)數(shù)評(píng)價(jià) 隨機(jī)選擇20例經(jīng)BC－6600型分析儀檢測(cè)的標(biāo)本（排除采集自血液系統(tǒng)疾病患者的標(biāo)本），每例標(biāo)本制作血涂片2張，采用瑞氏－吉姆沙染液進(jìn)行染色，由高年資、經(jīng)驗(yàn)豐富的檢驗(yàn)醫(yī)師進(jìn)行WBC分類計(jì)數(shù)，Bias＝（儀器測(cè)定結(jié)果均值－手工測(cè)定結(jié)果均值）／手工測(cè)定結(jié)果均值×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS11.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料以（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)?；貧w分析采用線性回歸分析。P＜0.05為比較差異或分析參數(shù)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 精密度分析結(jié)果 BC－6600型分析儀各指標(biāo)檢測(cè)精密度分析結(jié)果見表1。手動(dòng)進(jìn)樣模式及自動(dòng)進(jìn)樣模式各指標(biāo)檢測(cè)精密度均在廠家標(biāo)示范圍內(nèi)。采用相同進(jìn)樣模式時(shí)，批內(nèi)精密度優(yōu)于批間精密度，手動(dòng)進(jìn)樣模式精密度優(yōu)于自動(dòng)進(jìn)樣模式精密度。

表1 BC－6600型分析儀精密度分析結(jié)果（CV，%）

2.2 準(zhǔn)確度分析結(jié)果 WBC、RBC、Hb、PLT、RET檢測(cè)Bias均小于CLIA′88要求標(biāo)準(zhǔn)的1／2，見表2。

表2 BC－6600型分析儀準(zhǔn)確度分析結(jié)果

2.3 攜帶污染率分析結(jié)果 WBC、RBC、Hb、PLT、RET檢測(cè)攜帶污染率分別為0.38%、0.48%、0.00%、0.98%、0.72%，均小于1%，符合ICSH規(guī)定的要求。

2.4 可比性分析結(jié)果 線性回歸分析結(jié)果顯示，BC－5800與BC－6600型分析儀 WBC、RBC、Hb、PLT檢測(cè)結(jié)果具有良好的相關(guān)性，見表3。t檢驗(yàn)結(jié)果顯示，2臺(tái)儀器各指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表3 BC－5800與BC－6600型分析儀可比性分析結(jié)果

2.5 線性范圍分析結(jié)果 BC－6600型分析儀 WBC、RBC、Hb、RET、PLT檢測(cè)實(shí)測(cè)值與理論值的r2均大于或等于0.97，見表4。

表4 BC－6600型分析儀線性范圍分析結(jié)果

2.6 WBC分類計(jì)數(shù)評(píng)價(jià)結(jié)果 BC－6600型分析儀中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果與人工分類計(jì)數(shù)結(jié)果具有較高的相關(guān)性，單核細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果相關(guān)性稍差，嗜堿性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果相關(guān)性最差，見表5。

表5 BC－6600型分析儀WBC分類計(jì)數(shù)評(píng)價(jià)結(jié)果

3 討 論

BC－6600型分析儀采用鞘流阻抗法、激光散射法以及熒光染色流式細(xì)胞技術(shù)進(jìn)行血細(xì)胞檢測(cè)，Hb檢測(cè)則采用比色法，可進(jìn)行包括RET、有核紅細(xì)胞在內(nèi)的多個(gè)外周血指標(biāo)檢測(cè)，最高檢測(cè)速度可達(dá)120例標(biāo)本／小時(shí)，能夠滿足臨床血液常規(guī)檢查的需要。

本研究結(jié)果顯示，BC－6600型分析儀性能良好，批內(nèi)、批間精密度較高，符合相關(guān)規(guī)定。WBC、RBC、Hb、PLT檢測(cè)Bias均低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（WBC＜5%，RBC＜2%，Hb＜2%，PLT＜9%）［4］，也小于 CLIA′88要求標(biāo)準(zhǔn)的1／2，表明檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度較好。各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)攜帶污染率均小于1%，說明高值標(biāo)本對(duì)低值標(biāo)本的檢測(cè)影響較小。雖然PLT檢測(cè)攜帶污染率為0.98%，但仍符合符合ICSH規(guī)定的要求。WBC、RBC、Hb、PLT、RET檢測(cè)線性范圍基本能覆蓋臨床標(biāo)本濃度范圍，WBC檢測(cè)高值可達(dá)100×109／L，低值則可達(dá)0.2×109／L；PLT檢測(cè)高值可達(dá)1 000 109／L。可比性分析結(jié)果表明，BC－5800、BC－6600型分析儀各指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果的相關(guān)性較好（r2＞0.98），說明2臺(tái)儀器檢測(cè)結(jié)果具有一致性。在排除血液系統(tǒng)疾病患者標(biāo)本的情況下，BC－6600型分析儀WBC分類計(jì)數(shù)結(jié)果與手工分類計(jì)數(shù)結(jié)果具有較好的一致性，能夠足臨床診療的需要。BC－6600型分析儀淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果小于手工計(jì)數(shù)結(jié)果，與類似研究報(bào)道一致［5］，可能與分析儀無法識(shí)別異型淋巴細(xì)胞有關(guān)。

筆者在日常工作中發(fā)現(xiàn)，BC－6600型分析儀無法識(shí)別外周血中的幼稚細(xì)胞；對(duì)于溶血標(biāo)本，無法進(jìn)行紅細(xì)胞各項(xiàng)參數(shù)檢測(cè)；嚴(yán)重溶血時(shí)，PLT檢測(cè)結(jié)果需進(jìn)行手工檢測(cè)驗(yàn)證；PLT檢測(cè)結(jié)果較易受紅細(xì)胞平均容積（MCV）的影響，當(dāng)MCV＜65fL時(shí)，PLT檢測(cè)結(jié)果假性增高，且 MCV越小，影響程度越大［6］。在出現(xiàn)上述情況時(shí)，分析儀可能出現(xiàn)相應(yīng)的報(bào)警信息，因此在臨床工作中應(yīng)注意并善于分析報(bào)警信息。手工檢測(cè)RET僅能提供百分比結(jié)果，無法提供絕對(duì)計(jì)數(shù)結(jié)果，而BC－6600型分析儀則可提供絕對(duì)計(jì)數(shù)，高熒光強(qiáng)度（HFR）、低熒光強(qiáng)度（LFR）、中熒光強(qiáng)度（MFR）RET百分比，未成熟RET百分比和RET成熟指數(shù)檢測(cè)結(jié)果，能夠?yàn)榕袛郣BC生成情況提供更敏感、準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)資料，有利于貧血性疾病的診斷、療效評(píng)價(jià)、預(yù)后判斷，以及骨髓造血功能和器官移植效果評(píng)價(jià)［7］。手工檢測(cè)RET極易受操作人員主觀因素的影響，且血涂片紅細(xì)胞分布是否均勻、涂片厚薄、RNA染色效果等因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果也有很大的影響。血細(xì)胞分析儀采用對(duì)RNA有很強(qiáng)親和力的染料對(duì)RET進(jìn)行染色檢測(cè)，避免了上述因素的影響，但仍然存在其他干擾因素。有研究顯示，Howell－Jolly小體、瘧原蟲、冷凝集素等因素對(duì)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)RET參數(shù)產(chǎn)生直接干擾［8］。

手工檢測(cè)作為直接觀察細(xì)胞形態(tài)的傳統(tǒng)方法，應(yīng)與血細(xì)胞分析儀聯(lián)合使用，從而彌補(bǔ)手工檢測(cè)的不足［9］。本研究結(jié)果顯示，BC－6600型分析儀中性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和嗜酸粒細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果與手工計(jì)數(shù)結(jié)果相關(guān)性良好；單核細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果相關(guān)性一般，嗜堿粒細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果相關(guān)性較差，可能與其在 WBC中所占比例較少有關(guān)［10］。目前，WBC分類計(jì)數(shù)的參考方法仍為人工顯微鏡分類計(jì)數(shù)法。因此，對(duì)于存在血細(xì)胞分析儀檢測(cè)報(bào)警信息的標(biāo)本，以及血液系統(tǒng)疾病患者和疑似瘧原蟲感染患者的標(biāo)本，均需進(jìn)行涂片檢查。

綜上所述，BC－6600型分析儀雖然在某些方面存在欠缺，但總體性能良好，能夠滿足臨床診療的需要。

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