龔志強，談遠鋒，黃 敏，劉晨旭

(廣西中醫(yī)藥大學a.賽恩斯新醫(yī)藥學院;b.醫(yī)藥會展中心，中國南寧 530001)

四數九里香Murraya tetramera Huang為蕓香科九里香屬植物，以干燥樹葉入藥，全年均可采收.主產于云南、廣西、貴州、福建、臺灣等亞洲熱帶及亞熱帶地區(qū)［1］.其味辛、微苦，性微溫，具有祛風解表、行氣、活血散痛、抗炎、解熱之功效［2］.可治胃痛、風濕痹痛，外用則可治牙痛、跌撲腫痛、蟲蛇咬傷等［3］.著名胃藥三九胃泰的主要組成即為四數九里香［4］.對四數九里香化學成分的研究已有文獻報告，陳家源等［5］用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油并確認了其中37個組分，牙啟康等［6］運用硅膠層析色譜分離了其中的5個化合物，張柯媛等［7］選用補骨脂素作為指標成為建立其定性定量方法.研究表明四數九里香揮發(fā)油有顯著的抗炎和鎮(zhèn)痛作用［8］，為進一步全面真實地反映四數九里香揮發(fā)油的化學成分，本文分別采用水蒸氣蒸餾、超臨界CO2流體萃取及超聲波溶劑萃取3種方法提取四數九里香揮發(fā)油化學成分并進行了分析和比較.

1 儀器與材料

7890A/5975C氣相色譜質譜聯(lián)用儀(GC/MS，美國Agilent公司);HL-5+1L/50-Ⅱ AQ型超臨界CO2萃取裝置(杭州華黎泵業(yè)有限公司);DHG-9240A型電熱鼓風恒溫干燥箱(上海精密試驗設備有限公司);無水乙醇(分析純);無水硫酸鈉(分析純).四數九里香(2011年5月采于廣西龍州縣)經廣西中醫(yī)藥大學劉壽養(yǎng)副教授鑒定為Murraya tetramera Huang.

2 方法與結果

2.1 四數九里香揮發(fā)油的提取

2.1.1 水蒸氣蒸餾提取 根據2010年版《中國藥典》一部附錄 XD［5］，取20 g粗粉(過750 μm篩)加500 mL蒸餾水，蒸餾時間5 h，得到淡黃色薄荷香氣味透明液體，收油率3.23%.餾出液用無水乙醚萃取后，用無水硫酸鈉干燥備用.

2.1.2 超臨界CO2流體萃取 以四數九里香干燥莖葉粉為實驗材料，采用正交實驗篩選超臨界CO2萃取最優(yōu)方案，即萃取溫度40℃，壓力25 MPa，萃取時間45 min，將200 g干燥莖葉粉末投入裝置萃取3次，得黃色濃郁薄荷香氣味透明液體，收油率約5.11%.餾出液用無水乙醚萃取后，用無水硫酸鈉干燥備用.

2.1.3 超聲波溶劑萃取法 取5 g干葉粗粉(過750 μm篩)，加入50 mL石油醚，超聲30 min，過濾得到濾液.濾液用無水乙醚萃取后，用無水硫酸鈉干燥備用.

2.2 氣相色譜質譜分析條件

2.2.1 色譜條件 石英毛細管柱HP-5MS毛細管柱(30 m×25 μm×0.25 μm);載氣:高純He;進樣口溫度:250℃;分流比:40∶1，進樣量:1 μL.程序升溫:60℃ ～250℃;初始溫度60℃(保留1 min)，以10℃·min－1速率升溫至80℃(保留1 min);以2℃·min－1速率升溫至145℃(保留1 min);以25℃·min－1速率升溫250℃(保留1 min).

2.2.2 質譜條件 EI離子源，能量70 eV，離子源溫度230℃，倍增電壓1.933 kV，掃描質量范圍m/z為33～800.

2.3 揮發(fā)性成分鑒定

按上述實驗條件，用氣相色譜質譜聯(lián)用法對四數九里香揮發(fā)油進行分析，采用安捷倫GC-MS化學工作站數據處理系統(tǒng)，以峰面積歸一法測得揮發(fā)性物質各組分相對含量，3種方法提取的揮發(fā)油總離子流圖見圖1.對總離子流圖中各峰經質譜數據庫(NST08)，及配合人工譜圖解析，并查對有關數據文獻，從基峰相對豐度等幾個方面進行直觀比較，鑒定3種方法提取揮發(fā)油化學組分如下表1.

圖1 不同提取方法提取揮發(fā)油總離子圖Fig.1 Supercritical extraction(A)，water distillation extraction(B)，and ultrasound extraction total ion flow graph

表1 不同提取方法得到的揮發(fā)油化學成分對比Tab.1 Component analysis of extracts from different extraction methods

3 討論

超臨界CO2流體萃取法提取四數九里香揮發(fā)油鑒定了其中的38種成分.其中相對質量分數最高的是薄荷酮(38.17%)、異薄荷酮(12.34%)、胡椒酮(10.90%)和 β-水芹烯(9.75%).水蒸氣蒸餾法提取四數九里香揮發(fā)油鑒定了其中的33種成分.其中胡椒酮(17.40%)、薄荷酮(20.51%)、異薄荷酮(6.94%)、β-水芹烯(11.59%)、萜品烯(13.38%).超聲波溶劑萃取法提取四數九里香揮發(fā)油鑒定了其中的12種成分.其中相對質量分數最高的是薄荷酮(43.45%)、異薄荷酮(16.31%)、胡椒酮(9.97%)、側柏烯(11.40%)、β-水芹烯(9.35%).

對比3種提取方法得到的揮發(fā)油組分及其相對質量分數差異較大，質量分數較高均為薄荷酮，可用于四數九里香質量控制指標［10.其中SFE和超聲波溶劑萃取法的異薄荷酮質量分數都相比SD高.而SD中胡椒酮質量分數明顯高于SFE和超聲波溶劑萃取法，SD操作簡便，成本低.SFE得到揮發(fā)的化學成分更加詳細真實，與文獻報道一致［5，因萃取溫度低，對于低沸點的易揮發(fā)性化合物組分不易損失，其中脂肪族化合物種類及質量分數明顯多于水蒸汽蒸餾法和超聲提取法的揮發(fā)油，可能是由于SD溫度高、受熱時間長，對部分熱敏性組分產生了破壞［11，超聲波提取技術操作簡便，耗時少，無需加熱，可是對溶劑選擇、超聲功率、提取時間等未進行考察［12，對實驗結果有一定的影響.采用3種不同方法提取得到的四數九里香揮發(fā)性化合物數據，為其進一步的開發(fā)和利用提供了實驗依據.

［1］中國科學院中國植物志編輯部委員會.中國植物志［M］.北京:科學技術出版社，1997:145-146.

［2］中華本草編委會.中華本草［M］.上海:上海科學技術出版社，1998:947-948.

［3］全國中草藥匯編編寫組.全國中草藥匯編(上冊)［M］.第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1996:10-11.

［4］羅 輝，麥 揚，鐘天恒，等.三九胃泰方抗胃潰瘍有效部位的研究［J］.中國實驗方劑學雜志，2013，19(12):215-218.

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［6］牙啟康，盧文杰，陳家源，等.四數九里香的化學成分研究［J］.廣西科學，2010，17(4):347-352.

［7］張柯媛，黃 艷，劉布鳴，等.四數九里香藥材中補骨脂素的定性定量分析方法研究［J］.廣西科學，2012，19(4):352-354.

［8］毛長智，黃 蓓，庾志斌.四數九里香揮發(fā)油抗炎及鎮(zhèn)痛作用研究［J］.云南中醫(yī)中藥雜志，2011，32(8):74-75.

［9］國家藥典委員會.中國藥典，I部［S］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄63.

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［11］鄧超澄，朱小勇，韋建華，等.水蒸氣蒸餾法與超臨界CO2萃取法提取青翹揮發(fā)油的化學成分比較［J］.中國實驗方劑學雜志，2010，16(16):76-79.

［12］張如新，羊衛(wèi)平，樊 勤.超聲波法提取山茱萸中熊果酸的工藝研究［J］.湖南師范大學自然科學學報，2008，31(3):102-104.