封迎帥 ，劉百祥 ，張 亮 ，易受鄉(xiāng)，陽大為

（1.湖南省人民醫(yī)院中醫(yī)科針灸室，湖南 長(zhǎng)沙 410005；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410007）

電針環(huán)跳、委中穴對(duì)兔腰椎間盤突出癥的影響

封迎帥1，劉百祥1，張 亮2，易受鄉(xiāng)2，陽大為1

（1.湖南省人民醫(yī)院中醫(yī)科針灸室，湖南 長(zhǎng)沙 410005；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410007）

目的觀察電針環(huán)跳、委中穴對(duì)腰椎間盤突出癥(lumbar intervertebral disc protrusion，LIDP)家兔步態(tài)功能、髓核組織中腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)含量的影響。方法將40只健康新西蘭兔隨機(jī)分為4組，即空白組、LIDP模型組、電針穴位組和電針非穴對(duì)照組。自制的LIDP家兔病理模型造模器造家兔LIDP病理模型，采用Siegal法記錄步態(tài)功能，酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定髓核組織中TNF-α、IL-6含量。結(jié)果電針穴位組可改善家兔的步態(tài)功能，降低LIDP家兔髓核組織中TNF-α、IL-6的含量，與LIDP模型組、電針非穴對(duì)照組比較有顯著性差異(P<0.01)。結(jié)論通過降低髓核組織中TNF-α、IL-6等炎癥因子含量減輕炎癥反應(yīng)可能是電針環(huán)跳、委中穴治療LIDP的作用機(jī)制之一。

腰椎間盤突出癥；電針；環(huán)跳穴；委中穴；腫瘤壞死因子-α；白細(xì)胞介素-6；家兔

腰椎間盤突出癥 (lumbar intervertebral disc protrusion，LIDP)是臨床常見病、多發(fā)病，研究認(rèn)為電針療法可以改善或緩解腰椎間盤突出癥患者的腰腿疼痛、活動(dòng)受限等癥狀，療效確切[1-2]，但是其具體的作用機(jī)制尚不明確。因此，本實(shí)驗(yàn)在以前的研究基礎(chǔ)上選用環(huán)跳、委中穴，觀察電針環(huán)跳、委中穴對(duì)家兔實(shí)驗(yàn)性LIDP的療效，從LIDP家兔的步態(tài)功能、髓核組織中腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）表達(dá)的變化來探討其作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 新西蘭健康家兔40只，由湖南省人民醫(yī)院臨床研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：43006700002403，體質(zhì)量 1.5～2.1 kg，雌雄各半，每只分籠單獨(dú)圈養(yǎng)于湖南省人民醫(yī)院臨床研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心第2實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2 主要儀器 蘇州醫(yī)療用品廠有限公司生產(chǎn)的華佗牌針灸針(0.30×25 mm)，G6805-2電針儀。

1.1.3 主要試劑 TNF-α （批號(hào)：1404E11175）和IL-6（批號(hào)：1404G11056）的酶聯(lián)免疫試劑盒，均購(gòu)自武漢新啟迪生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物分組與造模 40只家兔完全隨機(jī)分為A：空白組，B：LIDP 模型組，C：電針穴位組，D：電針非穴對(duì)照組，每組各10只。除A組外其他3組家兔參照沈?yàn)闂澭芯康姆椒╗3]將上頜竇穿刺針（直徑為1.6 mm）改成自制LIDP家兔病理模型造模器，建立實(shí)驗(yàn)性LIDP家兔病理模型，造模后的家兔經(jīng)抽樣腰椎間盤CT檢測(cè)后判定造模成功。

1.2.2 穴位定位 穴位定位參照李忠仁主編的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》常用動(dòng)物穴位定位法，選取家兔患側(cè)環(huán)跳、委中穴。環(huán)跳：家兔股骨大轉(zhuǎn)子最高點(diǎn)與骶管裂孔連線的中外1/3交點(diǎn)處，環(huán)跳對(duì)照點(diǎn)設(shè)在環(huán)跳穴上2 cm（非穴位點(diǎn)）；委中：膝關(guān)節(jié)正后方凹陷，委中對(duì)照點(diǎn)設(shè)在委中穴內(nèi)側(cè)旁0.5 cm（非穴位點(diǎn)）。

1.2.3 治療方法 造模成功后，于第2天A、B組家兔每天固定于兔臺(tái)上20 min，不做任何處理，C、D組家兔定穴剪毛后消毒，用1寸的針灸針對(duì)準(zhǔn)消毒后的環(huán)跳、委中穴或非穴對(duì)照點(diǎn)處直刺1 cm左右，針刺后同側(cè)的環(huán)跳穴（環(huán)跳對(duì)照點(diǎn)）和委中穴（委中對(duì)照點(diǎn)）分別接在G6805-2型電針治療儀的一組輸出線上，選用疏密波，強(qiáng)度以后肢出現(xiàn)輕微顫抖為準(zhǔn)，電針時(shí)間為20 min，1次/d，連續(xù)處理10 d。第12天(即最后1次處理24 h后)所有家兔取材后進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)。

1.2.4 標(biāo)本采集與處理 所有家兔用20%烏拉坦(4 mL/kg)麻醉后取材，耳緣靜脈注射空氣（40 mL）處死，取腰6～7椎間盤的髓核組織，用0.9%氯化鈉溶液沖洗殘留物后分析天平稱質(zhì)量，加入0.9%氯化鈉溶液 （2 mL/400 mg），用玻璃勻漿器研磨40～50次后制成髓核組織勻漿，在4℃下4 000 r/min離心10 min，取上清液，置于-20℃低溫保存，待測(cè)。

1.2.5 觀察指標(biāo) 肢體步態(tài)功能參照Siegal[4]報(bào)道的神經(jīng)功能標(biāo)準(zhǔn)對(duì)家兔進(jìn)行步態(tài)評(píng)分即：0分：患肢全癱，無自主活動(dòng)；1分：患肢半癱，有肌肉收縮及輕微關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)；2分：患肢運(yùn)動(dòng)力量差，關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)遲緩，行走不穩(wěn)定；3分：患肢僅有趾間關(guān)節(jié)運(yùn)動(dòng)障礙；4分：恢復(fù)正常運(yùn)動(dòng)。

1.2.6 檢測(cè)指標(biāo) 所有樣本均送到長(zhǎng)沙新誠(chéng)生物科技有限公司檢測(cè)，采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法分別測(cè)定髓核組織中TNF-α、IL-6含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 各組家兔步態(tài)功能的比較

除了A組外其他的各組LIDP家兔造模后 （電針前）的步態(tài)積分值顯著低于造模前（P<0.01）；C組電針后的步態(tài)積分值均顯著高于電針前 （P<0.01），其他各組電針前、后的步態(tài)積分值比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；C組的步態(tài)積分值的差值顯著高于A、B與D組（P<0.01），提示電針環(huán)跳、委中穴后LIDP家兔的步態(tài)功能明顯改善。見表1。

表1 各組家兔步態(tài)評(píng)分值的比較 （n=10，±s）

表1 各組家兔步態(tài)評(píng)分值的比較 （n=10，±s）

注：自身造模前后比較▲▲P<0.01；自身電針前后比較★★P<0.01；差值與C組比較##P<0.01。

組別A B C D造模前3.92±0.16 3.90±0.18 3.93±0.16 3.93±0.16造模后（電針前）3.61±0.11 1.95±0.44▲▲1.87±0.32▲▲1.91±0.20▲▲電針后3.97±0.07 2.20±0.43 3.75±0.54★★2.28±0.27差值（電針后-電針前）0.36±0.10##0.25±0.08##1.88±0.26 0.37±0.13##

2.2 各組家兔髓核組織中TNF-α、IL-6含量的比較

B、D組TNF-α和IL-6含量顯著高于A 組(P<0.01)，C組TNF-α和IL-6含量顯著低于B組與D組(P<0.01)；D組TNF-α和IL-6含量與B組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P>0.05)，提示電針環(huán)跳、委中穴后對(duì)LIDP家兔髓核組織中TNF-α和IL-6表達(dá)有明顯抑制作用。見表2。

表2 各組家兔髓核組織中TNF-α、IL-6含量的比較（n=10，±s，pg/mL）

表2 各組家兔髓核組織中TNF-α、IL-6含量的比較（n=10，±s，pg/mL）

注：與A組比較**P<0.01；與B組比較△△P<0.01；與D組比較##P<0.01。

組別A B C D TNF-a 3.80±1.17 9.33±1.39**4.91±1.27△△##8.81±1.51**IL-6 7.31±1.68 22.87±6.71**8.87±1.25△△##16.06±5.15**

3 討論

在中醫(yī)學(xué)中沒有腰椎間盤突出癥這一病名，而是把LIDP歸屬于中醫(yī)的“腰腿痛”、“痹證”、“痿證”等范疇，認(rèn)為其發(fā)病主要與外力損傷，瘀血內(nèi)阻，或風(fēng)寒濕邪侵襲，或肝腎虧虛，腎氣不足等相關(guān)。研究認(rèn)為針灸可以改善LIDP局部血液循環(huán)和組織代謝，消除或減輕神經(jīng)根炎癥及水腫，從而減輕疼痛的作用[5]。環(huán)跳屬于足少陽膽經(jīng)穴位，也是足少陽膽經(jīng)與足太陽膀胱經(jīng)的交會(huì)穴；委中屬于足太陽膀胱經(jīng)的合穴，膀胱經(jīng)自腰背而來的兩條支脈，皆下行會(huì)于委中穴，根據(jù) “經(jīng)脈所過，主治所宜”的中醫(yī)治療原則，說明環(huán)跳、委中穴是治療LIDP的常用經(jīng)典穴位。

隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)LIDP患者腰腿疼痛的產(chǎn)生不僅僅是由機(jī)械壓迫引起的，其可能與突出椎間盤組織中的生物化學(xué)物質(zhì)如細(xì)胞因子TNFα、IL-6、IL-1α等對(duì)其產(chǎn)生的病理生理過程也有密切關(guān)系[6-7]。研究認(rèn)為TNF-α可能是LIDP患者神經(jīng)根性疼痛中重要的炎性介質(zhì)之一，一方面TNF-α能夠激活基質(zhì)金屬蛋白酶而損傷神經(jīng)，直接使神經(jīng)組織出現(xiàn)充血、水腫和血管擴(kuò)張；另一方面它可刺激其它細(xì)胞產(chǎn)生致病物質(zhì)，加重突出椎間盤組織的局部炎性反應(yīng)[8-10]。細(xì)胞因子IL-6是LIDP中的重要的炎癥介質(zhì)，能誘導(dǎo)痛覺過敏，也是重要的炎癥促進(jìn)劑，可以促進(jìn)LIDP的炎癥過程[11]；同時(shí)IL-6是一種重要免疫因子，能促進(jìn)突出椎間盤組織誘發(fā)免疫反應(yīng)，刺激腰椎間盤突出的局部神經(jīng)組織產(chǎn)生疼痛[12]?？傊?，細(xì)胞因子具有多種生物學(xué)功能，特別是TNF-α和IL-6作為重要的炎癥介質(zhì)在LIDP的病理過程中發(fā)揮重要作用[13-14]。

本研究通過觀察電針環(huán)跳、委中穴對(duì)LIDP家兔的療效，證實(shí)髓核組織局部的炎癥因子與LIDP的病情密切相關(guān)，這與國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道一致。電針非穴點(diǎn)并不能降低實(shí)驗(yàn)性LIDP家兔髓核組織中TNF-α和IL-6含量，而只有作用于腧穴才能明顯降低其髓核組織中TNF-α和IL-6含量，說明電針環(huán)跳、委中穴對(duì)實(shí)驗(yàn)性LIDP家兔有效，且對(duì)髓核組織局部的炎性因子的改善具有腧穴特異性，這亦可能是電針環(huán)跳、委中穴治療LIDP的機(jī)制之一，也進(jìn)一步從分子水平揭示電針環(huán)跳、委中穴對(duì)實(shí)驗(yàn)性LIDP家兔的炎性免疫機(jī)制。至于電針環(huán)跳、委中穴對(duì)LIDP的髓核組織局部的炎性免疫機(jī)制是如何調(diào)節(jié)的還有待進(jìn)一步深入研究。

[1]楊宗保，易受鄉(xiāng)，封迎帥，等.電針環(huán)跳穴對(duì)腰椎間盤突出癥家兔髓核組織PGE-2、PLA-2和IL-1α的影響 [J].中華中醫(yī)藥雜志，2012，27(3)：576-578.

[2]楊宗保，封迎帥，易受鄉(xiāng)，等.電針環(huán)跳穴對(duì)腰椎間盤突出癥坐骨神經(jīng)損傷修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究[J].中華中醫(yī)藥雜志，2012，27(1)：202-204.

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（本文編輯 匡靜之）

Effect of Electroacupuncture at Huantiao and Weizhong Point on Rabbits with Lumbar Interver Tebral Disc Protrusion

FENG Yingshuai1,LIU Baixiang1,ZHANG Liang2,YI Shouxiang2,YANG Dawei1
(1.Department of Chinese Acupuncture,Hunan Provincial People's Hospital,Changsha,Hunan 410005,China;2.Hunan University of Chinese Medicine,Changsha,Hunan 410007,China)

ObjectiveTo observe the effects of electroacupuncture at Huantiao and Weizhong point on the walking function,tumor necrosis factor-α (TNF-α)and interleukin-6(IL-6)in rabbits with lumbar intervertebral disc protrusion(LIDP).MethodsForty healthy New Zealand rabbits were randomly divided into the blank,LIDP model,electroacupuncture at point and electroacupuncture at non-point groups.The LIDP pathologic models were induced by the self-manufactured instrument,the walking functions of the rabbits were recorded by Siegal method,the contents of TNF-α and IL-6 were measured by ELISA method. Results The walking function of rabbits in electroacupuncture at Huantiao and Weizhong points group were improved,the contents of TNF-α and IL-6 in nucleipulpous significantly decreased.Compared with modeland non-point control groups,the electroacupuncture group had significant differences(P<0.01).ConclusionOne ofthe mechanisms of electroacupuncture at Huantiao and Weizhong point for LIDP treatment could be by decreasing the TNF-α and IL-6.

lumbar intervertebral disc protrusion;electroacupuncture;Huantiao point;Weizhong point;tumor necrosis factor-α;interleukin-6;rabbits

R246.2

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2014.11.016.053.04

2013－10－09

湖南省中醫(yī)藥管理局資助項(xiàng)目（201378）。

封迎帥，女，醫(yī)學(xué)博士，主治醫(yī)師，研究方向?yàn)獒樉呐R床和治病機(jī)制研究。