殷培峰

滁州地區(qū)果桑菌核病的種類調(diào)查及生物學(xué)特性研究

殷培峰

菌核病是影響桑椹產(chǎn)量的主要病害，主要由菌核萌發(fā)產(chǎn)生孢子作為侵染源引起危害，為防治菌核病，對滁州地區(qū)果桑的菌核病進行種類調(diào)查、分離、純化，并進行生物學(xué)特性研究。結(jié)果表明：病害主要為小粒性菌核病，子囊盤萌發(fā)高峰期是在4月中旬，采取冷刺激，紫外光照等方法能誘導(dǎo)桑椹菌核的萌發(fā)，22℃為菌絲生長的最適溫度；麥麩瓊脂培養(yǎng)基為最適培養(yǎng)基；弱酸性條件有利于菌絲的生長，1-5cm為菌核能萌發(fā)適宜深度。

桑椹；小粒性菌核??；生物學(xué)特性

桑椹果實營養(yǎng)豐富，風(fēng)味獨特，既可入食，又可入藥，具有很高的營養(yǎng)價值和經(jīng)濟價值[1]。近年來，由于桑椹及其系列保健品在市場上走俏，果桑的經(jīng)濟價值越來越高，優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)果桑品種得到了大力推廣。菌核病是影響桑椹的主要病害，主要包括肥大性菌核病，小粒性菌核病和縮小性菌核病[2]，各地發(fā)病情況不一，嚴重影響桑椹品質(zhì)致使產(chǎn)量降低、品質(zhì)變劣，因此，探討果桑菌核病的發(fā)生原因與生物學(xué)特性具有重要的現(xiàn)實意義。

桑椹菌核病以菌核在土中越冬，第2年4月上旬溫濕度條件適宜時，越冬菌核開始萌發(fā)，正值桑樹開花期，且桑雌花花柱短，柱頭兩裂，水平展開，其結(jié)構(gòu)特征及柱頭的水分和營養(yǎng)物質(zhì)為病原菌侵染創(chuàng)造條件。侵染過程中菌核長出子囊盤，產(chǎn)生子囊孢子，子囊孢子借助風(fēng)力傳播，侵入柱頭，子囊孢子萌發(fā)，芽管侵入子房，在子房中繁殖，產(chǎn)生大量菌絲，可形成分生孢子梗和分生孢子，分生孢子也可引起再次侵染[3]；但由于桑樹開花期短，一般情況下再次侵染對桑椹菌核病的發(fā)生和蔓延影響不大。前期癥狀常在桑椹開花后15～20d出現(xiàn)，最后菌絲體在病椹中大量繁殖并形成菌核，菌核隨病椹落地而在土中越冬。

本文通過冷刺激，紫外光照等方法誘導(dǎo)桑椹菌核萌發(fā)，進而對桑椹小粒性菌核病病原菌進行分離、純化、培養(yǎng), 并對病原菌的生物學(xué)特性進行研究，為采取有效的用藥時間和物理防控措施提供理論依據(jù)。

1 實驗材料與方法

1.1 培養(yǎng)基

（1）馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(1號培養(yǎng)基)（2）麥麩瓊脂培養(yǎng)基（2號培養(yǎng)基）（3）米糠瓊脂培養(yǎng)基（3號培養(yǎng)基）。（4）麥麩培養(yǎng)基（4號培養(yǎng)基）

1.2 試驗方法

1.2.1 滁州地區(qū)菌核病種類調(diào)查

由于滁州地區(qū)果?；鼐瞬]有大面積爆發(fā)，主要采用普查法進行調(diào)查，確定感染指數(shù)。隨機調(diào)查100株，記錄其中的病株數(shù)，求普遍率。

1.2.2 種類鑒定

子囊孢子采集：3月初，到果?；夭杉幽益咦?，通過菌核觀察及子囊形態(tài)確定為小粒性菌核病。

菌核采集：從果桑基地采集病果， 將病果帶回實驗室，根據(jù)形態(tài)進行鑒定。目前公認且常見的病原為3 種，分別為桑實 杯 盤 菌 （Ciboria shiraiana）、肉 阜 狀 杯 盤 菌（Ciboria carunculoiDes）和桑椹核地杖菌（Scleromitul shiraiana），分別形成肥大性菌核病，小粒性菌核病和縮小性菌核病。這三種菌核病特征明顯，肥大性菌核病，整個病桑椹或桑椹中的大部分小果整密粘連在一起，病椹膨大，花被腫厚，呈乳白色或灰白色，病小果不脫落，形成一個大菌核。小粒性菌核病特征：桑椹的各小果分別受侵染，內(nèi)生小粒形菌核，小果顯著膨大突出，整個病椹呈灰黑色，容易脫落而最后只剩果柄或部分健康小果。縮小性菌核病椹顯著縮小，灰白色，質(zhì)地堅硬，表面有暗褐色細斑，細皺，病椹內(nèi)形成黑色堅硬菌核。根據(jù)以上特征調(diào)查菌核病的種類[2]。

1.2.3 菌核萌發(fā)培養(yǎng)

（1）采集菌樣：從田間發(fā)病的桑椹植株上采集菌核，用70%的酒精浸泡0.5min，無菌水沖洗3次，植于滅過菌的蛭石內(nèi)，分3組放入4℃的冰箱中保存，其中一組每15天取出用無菌水洗滌1次，紫外線照射10分鐘；第2組每15天取出用無菌水洗滌1次，第3組不用無菌水洗滌。4個月后用于萌發(fā)實驗。

（2）菌核萌發(fā)法獲取菌種：取桑椹菌核病菌的菌核，用無菌水沖洗3次，置于麥麩瓊脂平板培養(yǎng)基上。每皿中央放 10枚，重復(fù) 10個培養(yǎng)皿，置18℃下培養(yǎng)，觀察萌發(fā)情況。待菌核周圍長出菌絲時，挑取其邊緣菌絲少許，移入麥麩瓊脂斜面培養(yǎng)基上，經(jīng)劃線法純化，獲得桑椹菌核病純菌種。

（3）菌絲聚集成菌核：將此菌種轉(zhuǎn)入麥麩平板培養(yǎng)基中央，最適溫度22℃下培養(yǎng)，待菌絲長滿整個培養(yǎng)皿，置于不同溫箱中培養(yǎng)2周后，觀察菌核形成情況。

1.2.4 不同溫度對菌絲生長的影響

在無菌操作臺上，將純化后的母菌菌絲體移入無菌水中，充分攪拌搗碎，作為菌懸液。將直徑5mm的無菌濾紙浸入菌懸液中，略加晾干后分別放入預(yù)先準備的麥麩培養(yǎng)基，每2天測量菌落直徑，比較在不同溫度下菌絲生長速度。將培養(yǎng)基放于 6℃、10℃、14℃、18℃、22℃、26℃下培養(yǎng)，觀察菌絲的生長狀況[5]。

1.2.5 不同培養(yǎng)基對菌絲生長影響

在無菌操作臺上，將培養(yǎng)4d左右的菌絲體移入無菌水中，充分攪拌搗碎，作為菌懸液。將直徑5mm的無菌濾紙浸入菌懸液中，略加晾干后分別放入預(yù)先準備的1號培養(yǎng)基，2號培養(yǎng)基，3號培養(yǎng)基上,每培養(yǎng)基制作3個重復(fù)。在18℃恒溫培養(yǎng), 每2天觀察1次，測量菌落直徑，比較在不同培養(yǎng)基中菌絲生長速度[6]。

1.2.6 不同pH對菌絲生長的影響

首先制作麥麩培養(yǎng)基，同時配制 pH值分別為4、5、6、7、8、9、10培養(yǎng)基進行滅菌處理，在無菌條件下倒平板接種，然后放22℃下培養(yǎng)，觀察菌絲生長狀況[7]。

1.2.7 菌核能萌發(fā)適宜深度

取經(jīng)處理過的菌核，放在4號培養(yǎng)基中，埋藏深度為1-10cm。1周后觀察菌核萌發(fā)情況。每個處理放10個菌核[8]。

2 結(jié)果分析

2.1 菌核調(diào)查萌發(fā)情況

2013年3月-6月通過調(diào)查，生病桑椹初見期為4月26日之前，在花期后5天即可看到桑果變白。高峰期為5月2日，5月7日小菌核已全部掉落，發(fā)病率為7%，主要為小粒性菌核病，其他兩種菌核病源菌沒有采集到，以下實驗結(jié)果都以小粒性菌核病為實驗對象。

實驗結(jié)果表明，無菌水洗滌并紫外照射萌發(fā)情況較好，每50個菌核有38個萌發(fā)，只用無菌水洗滌不用紫外照射菌核情況稍劣于經(jīng)紫外照射的，有28個萌發(fā)，不處理的只有3個萌發(fā)。說明紫外照射和無菌水清洗有利于菌核的萌發(fā)。

2.2 菌核形成情況

將菌種轉(zhuǎn)入麥麩平板培養(yǎng)基中央，最適溫度22℃下培養(yǎng)，待菌絲長滿整個培養(yǎng)皿，置于不同溫度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3周后，觀察菌核形成情況，結(jié)果見表1

表1 菌絲不同溫度下聚集形成菌核的情況

實驗結(jié)果表明：長滿菌絲的麥麩培養(yǎng)基在不同溫度下菌核的形成情況是不同的，超過24℃形成的菌核較多，過高過低都不利于菌核的形成，其中30℃以上抑制菌核形成。在菌核菌侵染?；ㄐ蜻^程中，形成菌核的原因，一是溫度，隨著溫度的升高，容易形成菌核，第二可能與營養(yǎng)成分有關(guān)，當菌絲大量生長，營養(yǎng)成分不能滿足其生長需要時，易形成菌核。

2.3 培養(yǎng)基篩選

在22℃恒溫條件下，每個培養(yǎng)基做3個重復(fù)，測定了桑椹菌核在1號，2號及3號培養(yǎng)基的生長情況，見表2

表2 桑椹菌核在不同培養(yǎng)基上的生長情況（22℃）（單位mm）

18℃測量結(jié)果表明,在供試的三種培養(yǎng)基中，1、2號培養(yǎng)基中菌絲生長情況明顯優(yōu)于3號培養(yǎng)基，1號培養(yǎng)基中菌絲生長情況雖然表面跟 2號培養(yǎng)基的差別不大，但是通過測量菌絲生長長度還是能很好的分辨1號培養(yǎng)基要優(yōu)于2號培養(yǎng)基，而且1號培養(yǎng)基在第7天時就已經(jīng)長滿整個培養(yǎng)皿，且菌絲密，而2號培養(yǎng)基到10天也才個長滿培養(yǎng)皿。

2.4 不同溫度對菌絲生長影響

在不同溫度下，每個溫度做3個重復(fù)，測量桑椹菌核在米糠培養(yǎng)基上的生長狀況，結(jié)果見表3。

表3 菌核在不同溫度下的生長情況（單位mm）

從上表可以看出，菌核在30℃，34℃的條件下基本不生長，在6℃和10℃下菌絲能生長，但生長速度很慢，而在18℃，22℃,26℃下都能快速的生長，而在22℃下，第7天的時候都能長滿整個培養(yǎng)皿，所以桑椹菌在22℃下生長狀況最好。

2.5 不同pH對菌絲生長的影響

在22℃恒溫條件下，測定了桑椹菌菌絲在不同pH值培養(yǎng)基上的生長情況，結(jié)果見表4。

經(jīng)觀察，桑椹菌菌絲在pH值為4到10的培養(yǎng)基上菌絲都能正常生長，PH值為6的培養(yǎng)基上生長速度最快,而在 pH為 5，8，9的培養(yǎng)基上能生長，但速度較慢，桑椹菌核菌絲在pH為4和10的培養(yǎng)基上基本不能生長，只有少量菌絲長出。

2.6 埋藏深度對菌核萌發(fā)的影響

經(jīng)觀察，桑椹菌核在深度為1-5cm的情況下都能萌發(fā)出子實體，數(shù)量為5-9個不等，深度超過6cm沒發(fā)現(xiàn)子實體生長。說明適當埋藏對菌核病有很好的防治效果。

表4 不同pH值對菌絲生長的影響（22℃）

3 結(jié)論與討論

菌核菌絲的適宜培養(yǎng)基為麥麩培養(yǎng)基，菌絲生長最適合溫度22℃。最適pH值在6附近。深埋超過5cm能顯著抑制菌核的萌發(fā)。

近年來，隨著污染加劇，土壤變酸趨勢加重；桑樹開花期為4月初，溫度在20℃左右；再加上長江流域雨水較多，所有這些因素都導(dǎo)致了在滁州地區(qū)桑椹菌核病有大量爆發(fā)的條件。在防治過程中要根據(jù)這些因素，合理進行防治。對桑園地進行秋翻，將菌核進行深埋，或地膜覆蓋隔離；增加使用農(nóng)家肥料，改善土壤理化性質(zhì)；在花初期，特別是雨后，集中噴灑農(nóng)藥等措施對菌核病進行防治。

[1] 周小毛.桑椹菌核病發(fā)生原因及防治措施[J].四川省閬中蠶種場,2012, (2):39.

[2] 唐翠明,羅國慶,楊瓊,等.桑椹菌核病的發(fā)生規(guī)律及其防治方法[J].桑蠶通報,2005, (3):10-12.

[3] 魏曉軍,徐成美.桑椹菌核病的發(fā)生與防治[J].江蘇蠶業(yè),2007, (4):14-15.

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責(zé)任編輯：劉海濤

The Mulberry Sclerotium Disease Species Investigation and Biological Characteristics in Chuzhou Region

Yin Peifeng

Sclerotium disease is a major disease which affects the production of mulberry. The harm mainly is caused by spores germinated by Sclerotium. In order to prevent the damage, the species investigation, separation, purification, and biological characteristics of fruit mulberry sclerotium disease in chuzhou region were studied. The results show that the disease mainly was mulberry sorosus diminuting sclerote disease. The germination peak of ascus plate was in the middle of April, The cold stimulation and uv light can induce mulberry sclerotium germination. The optimal temperature for the mycelial growth was 22 ℃.Wheat bran agar was the optimum culture medium. Weak acid condition was helpful to the growth of hypha. 1-5 cm for sclerotium germination was the appropriate depth.

mulberry; sclerotinia sclerotiorum; biological characteristics

S436.63

A

1673-1794(2014)05-0025-04

殷培峰，滁州學(xué)院生物與食品工程學(xué)院實驗師，蘇州大學(xué)博士研究生，研究方向：植物真菌病害（安徽 滁州 239012）。

滁州學(xué)院自然科學(xué)基金項目（2012kj012B）；滁州學(xué)院校級本科教學(xué)質(zhì)量與教學(xué)改革工程項目（2014sfzx03）

2013-11-12