劉俊國(guó)

摘 要 免疫膠體金標(biāo)記技術(shù)是近年來(lái)隨著醫(yī)療技術(shù)水平的發(fā)展提高而研究的一項(xiàng)新型免疫標(biāo)記技術(shù)，該技術(shù)主要以膠體金作為示蹤標(biāo)志物，在抗原抗體反應(yīng)中具有良好應(yīng)用效果。鑒于此，就免疫膠體金快速診斷技術(shù)在獸醫(yī)診斷上的應(yīng)用進(jìn)行了簡(jiǎn)單的分析。

關(guān)鍵詞 免疫膠體金快速診斷技術(shù)；獸醫(yī)；診斷；應(yīng)用

中圖分類(lèi)號(hào)：S854.43 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號(hào)：1673-890X（2014）21--02

免疫膠體金快速診斷技術(shù)最早主要用于尿液和血清的檢驗(yàn)，檢測(cè)方法與ELISA比較類(lèi)似，而這種檢測(cè)技術(shù)整個(gè)過(guò)程只需要5 min。在20世紀(jì)90年代初期，國(guó)外著名醫(yī)學(xué)研究者Chun等提出用膠體金代替酶作為標(biāo)記物用于滲濾試驗(yàn)，并成功的制備了檢測(cè)抗人類(lèi)免疫缺陷病毒（ HIV） 抗體的試劑盒，而得到廣泛應(yīng)用[1-2]。隨著醫(yī)療技術(shù)水平的發(fā)展提高及醫(yī)學(xué)研究的深入，該項(xiàng)技術(shù)已在人醫(yī)臨床檢驗(yàn)中得到了廣泛應(yīng)用，如蛋白質(zhì)檢測(cè)、傳染病原抗體檢測(cè)、妊娠試驗(yàn)等，而目前臨床上關(guān)于該項(xiàng)技術(shù)在獸醫(yī)診斷的報(bào)道卻較少見(jiàn)。

1 概述

1.1 基本原理

免疫膠體金快速診斷技術(shù)主要是以微孔濾膜為固相載體，包被已知抗原或抗體，將待測(cè)樣本加入之后，通過(guò)微孔膜的滲濾作用促進(jìn)標(biāo)本中的抗體或抗原與膜上包被的抗原結(jié)合，再發(fā)生一系列化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生紅色，并以此判定結(jié)果。目前，臨床上應(yīng)用的主要包括免疫滲濾試驗(yàn)和免疫層析試驗(yàn)[3]。

1.2 優(yōu)勢(shì)

免疫膠體金快速診斷技術(shù)整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程只需要試劑盒或試紙條，而不需要任何實(shí)驗(yàn)儀器，大大提高操作的方便性，反應(yīng)結(jié)果非常明顯，可通過(guò)肉眼直接判別，反應(yīng)時(shí)間也非常短，一般情況下，5～10 min便可獲得檢測(cè)結(jié)果；同時(shí)，免疫膠體金快速診斷技術(shù)具有很高的靈敏度和特異性。

2 應(yīng)用

免疫膠體金快速診斷試劑主要應(yīng)用于獸醫(yī)診斷基層單位，尤其是對(duì)于專(zhuān)業(yè)人員和專(zhuān)業(yè)設(shè)備比較缺乏的基層單位。目前，市面上已出現(xiàn)了很多已經(jīng)免疫膠體金快速診斷家禽家畜及寵物用金標(biāo)診斷試劑，用于檢測(cè)豬口蹄疫、豬繁殖與呼吸綜合癥、豬瘟、豬旋毛蟲(chóng)、雞傳染性法氏囊病、雞新城疫、禽流感、犬瘟熱、犬細(xì)小病毒及寵物用旋毛蟲(chóng)病等疾病的快速診斷試劑。歸納起來(lái)，其應(yīng)用主要包括2個(gè)方面。

2.1 抗體的檢測(cè)

這種方法主要是應(yīng)用于檢測(cè)NC膜上包，具體方法為：用膠體金標(biāo)記相應(yīng)抗原，也可以標(biāo)記SPA，如果檢測(cè)樣品為陽(yáng)性，則可以在標(biāo)記物中看到紅色斑點(diǎn)。我國(guó)著名農(nóng)學(xué)研究者張書(shū)永[4]等應(yīng)用該方法對(duì)豬瘟抗體進(jìn)行了檢測(cè)，選擇100份豬血清進(jìn)行豬瘟抗體檢測(cè)比較，研究結(jié)果顯示僅有一例出現(xiàn)不符，符合率達(dá)99.0%。另外，一名研究者陳劍閣[5]等建立的豬瘟金標(biāo)免疫層析試紙測(cè)試60份標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清和36份標(biāo)準(zhǔn)陰性血清，試驗(yàn)結(jié)果顯示器符合率達(dá)百分之百。曹三杰等建立了斑點(diǎn)免疫金染色法能有效對(duì)PPV抗體進(jìn)行檢測(cè)，并通過(guò)對(duì)豬細(xì)小病毒病抗體進(jìn)行了檢出試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果顯示器檢出量為1.008×10-10 g/mL，不同的試驗(yàn)標(biāo)本混合可出現(xiàn)交叉反應(yīng)，比如豬布魯氏菌病、豬衣原體病、豬偽狂犬病等等。方瑩等通過(guò)試驗(yàn)提出了的RRRS抗體免疫金標(biāo)試紙，并對(duì)60份豬血清及血液樣品進(jìn)行抗體水平檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示其符合率達(dá)百分之百。王春仁等研究出的斑點(diǎn)免疫金滲濾試驗(yàn)?zāi)苡行?duì)綿羊腦多頭蚴病進(jìn)行檢測(cè)及診斷，具有很高的符合率；另外一些臨床研究者還建立了EDS-76病毒抗體的斑點(diǎn)免疫金測(cè)定法、豬偽狂犬病抗體水平免疫膠體金快速檢測(cè)試紙法、特異性地檢測(cè)豬流行性乙型腦炎病毒抗體的斑點(diǎn)金免疫滲濾測(cè)定法等方法，并提出共同的結(jié)論，采用免疫膠體金快速診斷在多種動(dòng)物疾病抗體的檢測(cè)中具有很高的符合率、靈敏度和特異性。

2.2 病原的檢測(cè)

病原檢測(cè)方法有很多，常見(jiàn)的比如雙抗體夾心法，該方法主要是以2種抗該病原的抗體分別用來(lái)包被NC 膜和標(biāo)記膠體金，陽(yáng)性樣品的病原會(huì)與金標(biāo)抗體和NC 膜上的抗體相結(jié)合，從而對(duì)病原進(jìn)行檢測(cè)。我國(guó)著名醫(yī)學(xué)研究者等建立了檢測(cè)犬細(xì)小病毒的膠體金免疫層析法。并用該方法對(duì)60份犬糞便樣品進(jìn)行了檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果顯示與HA結(jié)果相比可獲得40倍以上的效價(jià)，還有一些研究者也紛紛建立了檢測(cè)PRRSV的斑點(diǎn)免疫金滲濾法、快速診斷雞新城疫的免疫層析測(cè)試條等多種方法和試劑，并得出共同的結(jié)論，免疫膠體金快速診斷在多種病原的檢測(cè)中具有較高效價(jià)，可獲得較高檢出率，值得在臨床上推廣應(yīng)用。

3 結(jié)語(yǔ)

免疫膠體金快速診斷技術(shù)是隨著醫(yī)療技術(shù)水平的發(fā)展提高而研究的一項(xiàng)新型的獨(dú)特的診斷技術(shù)，該技術(shù)與免疫酶標(biāo)技術(shù)、放射免疫技術(shù)、免疫熒光技術(shù)并列為四大免疫標(biāo)記技術(shù)，具有非常重要的臨床價(jià)值，在未來(lái)也具有廣闊的發(fā)展空間。目前，該技術(shù)在獸醫(yī)診斷上得到了逐步推廣，但還需進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn)

[1]艾嘉亮，鄧國(guó)華，王君偉.膠體金免疫層析技術(shù)及其在獸醫(yī)診斷上的應(yīng)用[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2009，5：88-89.

[2]楊雪林，張福官，楊衛(wèi)華，等.膠體金快速診斷技術(shù)在獸醫(yī)臨床診斷中的應(yīng)用[J].安徽農(nóng)學(xué)通報(bào)，2010，2：36-37.

[3]莊金秋，梅建國(guó)，沈志強(qiáng).膠體金免疫層析技術(shù)在獸醫(yī)臨床診斷中的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2012，9：70-75.

[4]張書(shū)永.免疫膠體金快速診斷技術(shù)的臨床應(yīng)用與質(zhì)量控制[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)裝備，2013，5：37-39.

[5]陳劍閣.膠體金免疫技術(shù)在豬瘟診斷上的應(yīng)用進(jìn)展[J].中國(guó)動(dòng)物保健，2011，6：14-17.

（責(zé)任編輯：趙中正）endprint