黃昕　冉龍艷　吳云濤　等

【摘要】 目的 探討胃腸道間質(zhì)瘤（GIST）中P21WAF1和Bax的表達(dá)與生物學(xué)行為的關(guān)系。方法 運(yùn)用免疫組化SP法檢測(cè)P21WAF1和Bax在胃腸道間質(zhì)瘤中的表達(dá)情況， 并分析其在良性、潛在惡性、惡性病例中的表達(dá)差異。結(jié)果 55例GIST中， P21WAF1和Bax的陽(yáng)性表達(dá)率分別為54.5%和60.0%。P21WAF1和Bax的表達(dá)隨著惡性程度的增加而增加， 與良性組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。P21WAF1與Bax的表達(dá)有顯著相關(guān)性。結(jié)論 檢測(cè)P21WAF1和Bax可作為預(yù)測(cè)胃腸道間質(zhì)瘤惡性潛能的重要參考指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】 胃腸道間質(zhì)瘤； P21WAF1；Bax；免疫組織化學(xué)

胃腸道間質(zhì)瘤是一組較為復(fù)雜的胃腸道間葉性腫瘤， 其分化途徑差異很大， 有顯示向平滑肌分化的、向神經(jīng)成分分化的、或雙向分化的， 部分表達(dá)CD117抗原和具有c-kit基因突變。從臨床表現(xiàn)及預(yù)后而言， 生物學(xué)行為難以準(zhǔn)確預(yù)測(cè)， 有些轉(zhuǎn)移灶可以在原發(fā)腫瘤切除30年之后才發(fā)現(xiàn)。在日常病理診斷中， 仍然依靠腫瘤大小、核分裂、細(xì)胞形態(tài)等來(lái)綜合判斷預(yù)測(cè)其惡性程度的大小， 因此尋找能判斷GIST生物學(xué)行為的客觀指標(biāo)仍然是臨床關(guān)注以及病理研究的熱點(diǎn)。本研究通過(guò)檢測(cè)P21WAF1和Bax在GIST中的表達(dá)， 以求探討其與臨床病理特征及生物學(xué)行為的關(guān)系。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 收集貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院1990～2006年期間術(shù)后診斷為胃腸道間葉源性腫瘤的病例， 經(jīng)免疫組化標(biāo)記CD117、CD34、Desmin、 SMA、S-100蛋白篩選， 從中確定GIST 55例。其中男29例， 女26例， 年齡24～77歲， 中位年齡54.8；病變部位： 食管1例， 胃23例， 小腸10例， 結(jié)腸6例， 直腸8例， 盆腔2例， 腹壁1例， 腹膜后4例。按照Emory等[1]提出的標(biāo)準(zhǔn)將GIST進(jìn)行分級(jí)：良性14例， 潛在惡性14例， 惡性27例。

1. 2 方法 取上述存檔的石蠟包埋組織塊， 3 μm連續(xù)切片， 貼在已事先用APES膠處理好的載玻片上， 3%過(guò)氧化氫去離子水孵育5～10 min， 以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶活性；微波處理修復(fù)抗原（98℃， 15 min）；正常山羊血清封閉組織中非特異性抗原， 第一抗體：來(lái)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司的鼠抗人P21WAF1單克隆抗體、鼠抗人Bax單克隆抗體， 用磷酸鹽緩沖液作為陰性對(duì)照， 用乳腺浸潤(rùn)型導(dǎo)管癌腺上皮作為P21WAF1陽(yáng)性對(duì)照；用胃腺癌上皮為Bax陽(yáng)性對(duì)照， 嚴(yán)格參照說(shuō)明書進(jìn)行免疫組化染色SP法。結(jié)果判斷： 陽(yáng)性定位為胞核及胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒， 且著染細(xì)胞數(shù)>10%判斷為陽(yáng)性； P21WAF1陽(yáng)性定位為細(xì)胞核， Bax陽(yáng)性定位為細(xì)胞質(zhì)。

1. 3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析所得數(shù)據(jù)， 計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 P21WAF1在GIST中的表達(dá) P21WAF1的表達(dá)在良性GIST、潛在惡性、惡性GIST的表達(dá)率分別為21.4%、64.2%和66.7%， 良性和潛在惡性之間及惡性之間 P21WAF1的陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=8.19， P<0.05）， 但潛在惡性組和惡性組之間的表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.5， P>0.05）。

2. 2 Bax在 GIST 中的表達(dá) Bax的表達(dá)在良性GIST、潛在惡性、惡性GIST的表達(dá)率分別為28.6%、71.4%和70.3%， 良性和潛在惡性及惡性之間Bax的陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.62， P<0.05）， 但潛在惡性組和惡性組之間的表達(dá)率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.27， P>0.05）。

2. 3 P21WAF1與Bax表達(dá)的相關(guān)性 55例間質(zhì)瘤中， P21WAF1與Bax 均陽(yáng)性的26例， 均陰性的19例， 前者陽(yáng)性后者陰性的3例， 前者陰性后者陽(yáng)性的7例， 經(jīng)χ2檢驗(yàn)表明：P21WAF1與Bax在GIST中表達(dá)呈顯著相關(guān)性（χ2=22.45， P<0.05）。

3 討論

P21WAF1 作為腫瘤抑制基因， 與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)， 但P21WAF1的表達(dá)在不同組織差異較大。對(duì)大多數(shù)惡性組織而言， P21WAF1的表達(dá)以與正常組織相比降低或缺失為主。而本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：P21WAF1在良性GIST表達(dá)較低， 而在潛在惡性和惡性GIST中表達(dá)較高， 良性和潛在惡性或惡性GIST之間P21WAF1的陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 說(shuō)明隨著惡性潛能的增加， 分化程度的不同， 其表達(dá)有增加的趨勢(shì)。這與其他研究報(bào)告惡性 GIST表達(dá)P21WAF1結(jié)果有一致性[2]。作者推測(cè)P21WAF1表達(dá)高可能有助于遏制 GIST中腫瘤細(xì)胞的無(wú)限增生。因此， 檢測(cè)GIST組織中P21WAF1表達(dá)水平有助于了解GIST的生物學(xué)行為。

Bax蛋白作為重要的促凋亡蛋白質(zhì)， 其可以直接影響線粒體功能， 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。劉艷明等[3]報(bào)道36例GIST中有20例表達(dá)Bax （55.6%）， 其表達(dá)與GIST的部位、組織學(xué)分型、腫瘤大小無(wú)關(guān)。本研究表明， Bax的表達(dá)隨惡性程度的增高而增高， 從良性的28.6%到潛在惡性的71.4%， 其表達(dá)率在良性組和潛在惡性、惡性組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， 這對(duì)判斷惡性潛能有重要的輔助意義， 因此檢測(cè)GIST組織中Bax表達(dá)水平有助于了解GIST的生物學(xué)行為。

綜上所述， 對(duì)于胃腸道間質(zhì)瘤這類分化復(fù)雜、生物學(xué)行為復(fù)雜的消化道常見(jiàn)間葉來(lái)源腫瘤， 除了通過(guò)做免疫組化明確診斷之外， 在通過(guò)常用指標(biāo)如腫瘤大小， 結(jié)合形態(tài)學(xué)觀察如：細(xì)胞異型性、核分裂、是否壞死等指標(biāo)外， 還可以通過(guò)檢查客觀指標(biāo)如P21WAF1與Bax的表達(dá)， 且兩者有明顯的正相關(guān)， 從而更好地判斷其惡性潛能的大小， 給臨床醫(yī)生的診斷及治療提供更好的病理支持。

參考文獻(xiàn)

[1] Emory TS， Sobin LH， Lukes L， et al. Prognosis of gastrointestinal smooth muscle（stromal） tumors：dependence on anatomic site. Am J Surg Pathol， 1999， 23（1）：82-87.

[2] 孫潔， 宦大為.胃腸道間質(zhì)瘤中P21WAF1及Cyclin D1的表達(dá)和意義.中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志， 2009， 18（3）：60-62.

[3] 劉艷明， 蔡蘭.胃腸道間質(zhì)瘤中Bax和Ki67的表達(dá)及其意義.中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)生， 2007， 45（20）， 11-12.

[收稿日期：2014-05-19]endprint