謝國(guó)勇 余進(jìn)勝

淋病是臨床上最為常見的一種性傳播疾病，淋病奈瑟氏菌（NG，也稱淋球菌）是淋病的病原體，常引起生殖道感染-淋菌性尿道炎和淋菌性宮頸炎，逆行感染可引起尿道膀胱炎、附睪炎、前列腺炎、前庭大腺炎、輸卵管炎和盆腔炎等，可導(dǎo)致男女不育癥，也可經(jīng)血液傳播到全身的其他部位，形成播散性淋球菌感染。潛伏期平均為3～5天，5%～20%的男性和60%女性感染者呈現(xiàn)無癥狀感染。淋病奈瑟氏菌感染會(huì)對(duì)患者的生理及心理健康產(chǎn)生嚴(yán)重危害。據(jù)我國(guó)的流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)顯示[1]，淋病的發(fā)病人數(shù)在5種性病病種中位居第三。目前，臨床上檢測(cè)NG的方法多種多樣，較為常用的有快速檢測(cè)法、直接涂片法、細(xì)菌培養(yǎng)法、PCR檢測(cè)法（也稱體外DNA基因擴(kuò)增法）等[2]，為比較直接涂片法、細(xì)菌培養(yǎng)法、PCR檢測(cè)法3種NG檢測(cè)法的檢測(cè)效果，本研究對(duì)100例淋病患者分別應(yīng)用了上述3種方法進(jìn)行檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取廣東省惠州市惠東縣慢性病防治站2011年9月～2013年9月收治的100例確診或疑為淋病的患者作為研究對(duì)象，其中男53例，女47例，年齡25～58歲，平均（38.4±3.3）歲，所有患者均有性生活史，均出現(xiàn)不同程度的淋病體征、癥狀。選取100例患者的尿道及宮頸口分泌物進(jìn)行檢測(cè)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 男性：將棉拭子蘸取無菌鹽水插入尿道口，深度在2～3cm，輕輕旋轉(zhuǎn)拭子，停留10～15s取出，以潔凈試管保存棉拭子送檢。女性：用窺陰器擴(kuò)張陰道暴露子宮頸，除去宮頸口表面的分泌物，用棉拭子插入子宮頸管內(nèi)1～2cm處輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，停留20～30s將棉拭子取出，以潔凈試管保存送檢。女性患者檢測(cè)需避開經(jīng)期。

1.2.2 NG檢測(cè)

1.2.2.1 直接涂片 將分泌物涂片，保持厚薄均勻，在分泌物涂片自然干燥后，做革蘭染色。初染使用結(jié)晶紫，再使用碘液媒染，以95%乙醇脫色后使用復(fù)紅復(fù)染。使用油鏡觀察染色涂片結(jié)果，淋病奈瑟菌的形態(tài)呈半圓形或腎性對(duì)稱排列，顏色為粉紅或紅色，在細(xì)胞內(nèi)外鏡檢中，可觀察到在多形核白細(xì)胞的胞質(zhì)中常成對(duì)排列，兩菌接觸面扁平或稍凹的革蘭陰性雙球菌。

1.2.2.2 細(xì)菌培養(yǎng) 標(biāo)本采集后應(yīng)立即分區(qū)接種于經(jīng)室溫平衡的選擇性培養(yǎng)基。接種后的平皿（巧克力平板和血瓊脂平板各1塊）置35℃～36℃、5% CO2和＞70%濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。培養(yǎng)24～48h觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)。培養(yǎng)出菌株后，根據(jù)細(xì)菌鑒定方法及試劑說明書進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)于可疑菌落，還需做生化鑒定。

1.2.2.3 PCR檢測(cè) 利用聚合酶鏈反應(yīng)對(duì)標(biāo)本中的少量DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增，得到較長(zhǎng)的DNA片段，再采用凝膠電泳法檢測(cè)，觀察色帶變化，以判定檢測(cè)結(jié)果。全程操作均嚴(yán)格按照PCR試劑盒上的操作說明進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件處理本次研究數(shù)據(jù)，相關(guān)正態(tài)計(jì)量資料數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

3種檢測(cè)方法的NG陽(yáng)性檢出率比較 PCR檢測(cè)的NG陽(yáng)性率為81.0%，明顯高于細(xì)菌培養(yǎng)法（61.0%）及直接涂片法（43.0%）（χ2=9.71、χ2=30.65），差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與直接涂片法相比，細(xì)菌培養(yǎng)法的NG陽(yáng)性率更高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.49，P<0.05，見表 1)。

表1 3種檢測(cè)方法的NG陽(yáng)性檢出率比較

3 討論

淋病作為一種全世界范圍內(nèi)流行的性傳染病，其具有局部癥狀重、發(fā)病急驟的特點(diǎn)[3]。臨床診斷淋病主要采用實(shí)驗(yàn)室檢查手段，目前大部分的醫(yī)療機(jī)構(gòu)都沿用了直接涂片法進(jìn)行淋病檢驗(yàn)，其在性病門診中的應(yīng)用也十分廣泛。從大量臨床實(shí)踐來看[4]，直接涂片法的陽(yáng)性檢出率非常低，誤診、漏診率較高，特別是女性患者，由于其分泌物雜菌污染較多，所以僅根據(jù)染色形態(tài)判定，容易出現(xiàn)失誤。

細(xì)菌培養(yǎng)法是世界衛(wèi)生組織倡導(dǎo)的淋病診斷金標(biāo)準(zhǔn)[5]，然而其不僅在試劑、培養(yǎng)條件、操作技術(shù)等方面受限嚴(yán)格，同時(shí)NG陽(yáng)性檢出率也較低。與細(xì)菌培養(yǎng)法相比，PCR檢測(cè)法對(duì)標(biāo)本的要求更為寬松，不論細(xì)菌是否存活，PCR法都可準(zhǔn)確檢測(cè)出來，其有效克服了使用抗菌藥物后殺滅細(xì)菌而無法檢測(cè)的問題，另一方面，由于PCR可將細(xì)菌DNA片段放大，也很好地克服了標(biāo)本量少而無法檢測(cè)的問題。PCR檢測(cè)法對(duì)實(shí)驗(yàn)室的要求更高，應(yīng)用該方法判定治療效果時(shí)，還需仔細(xì)剔除死亡細(xì)菌檢測(cè)出的陽(yáng)性率[6]。

本次研究結(jié)果顯示，在3種方法中，PCR檢測(cè)的NG陽(yáng)性率最高，細(xì)菌培養(yǎng)法次之，直接涂片法最低。PCR檢測(cè)的陽(yáng)性率顯著高于細(xì)菌培養(yǎng)法及直接涂片法（P<0.05），差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；細(xì)菌培養(yǎng)法的NG陽(yáng)性率顯著高于直接涂片法（P<0.05）?？傊谥苯油科ā⒓?xì)菌培養(yǎng)法、PCR檢測(cè)法3種檢測(cè)法中，PCR檢測(cè)法的靈敏度最高、特異性最強(qiáng)，是臨床檢測(cè)淋病的理想方法。

[1]劉鎮(zhèn)平,徐志康,竇宇紅等.淋病奈瑟氏菌三種檢測(cè)方法的結(jié)果比較[J].河北醫(yī)學(xué),2010,16(10):1201-1203.

[2]夏克強(qiáng),孫麗琴.對(duì)240例男性患者泌尿生殖系感染5種病原體的檢測(cè)分析[J].中外醫(yī)療,2009,28(2):166.

[3]吳玉霞.淋病奈瑟氏菌的細(xì)菌培養(yǎng)與PCR方法檢測(cè)的結(jié)果對(duì)比[J].右江醫(yī)學(xué),2011,39(3):337.

[4]稅開毅.三種檢測(cè)淋病奈瑟氏菌方法結(jié)果比較[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新,2009,6(29):134.

[5]陳秀英.應(yīng)用細(xì)菌培養(yǎng)法與PCR檢測(cè)法檢測(cè)淋病奈瑟氏茵的對(duì)比研究[J].求醫(yī)問藥（學(xué)術(shù)版）,2012,10(5):236-237.

[6]潘云霞.淋病奈瑟氏菌二種檢測(cè)方法結(jié)果比較[J].健康必讀（中旬刊）,2012,11(8):119.