盧春芳 劉國娟 劉大程* 胡紅蓮 高 民

(1.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)學院，呼和浩特 010018;2.農(nóng)業(yè)部動物疾病臨床診療技術(shù)重點實驗室，呼和浩特 010018;3.內(nèi)蒙古農(nóng)牧業(yè)科學院，呼和浩特 010031)

我國微生態(tài)制劑的研究工作多集中在單胃動物上，而有關(guān)專門針對反芻動物研制的微生態(tài)制劑的研究報道較少。近年來，研究者們開始了利用微生態(tài)制劑來調(diào)控瘤胃功能，從而提高反芻動物生產(chǎn)性能的研究［1］，其中針對酵母菌及其培養(yǎng)物的研究尤其突出。大量研究表明，添加酵母菌及其培養(yǎng)物可以提高瘤胃中性洗滌纖維(neutral detergent fiber，NDF)、酸性洗滌纖維(acid detergent fiber，ADF)消化率及瘤胃乙酸、丙酸、丁酸、總揮發(fā)性脂肪酸(total volatile fatty acid，TVFA)濃度及乙酸與丙酸比［2-3］，還可增加奶牛產(chǎn)奶量，提高乳脂率［4］，減輕環(huán)境應(yīng)激對家畜造成的危害［5-6］。同時，酵母菌及其培養(yǎng)物在穩(wěn)定瘤胃液pH及預防亞急性瘤胃酸中毒方面也起著積極的作用［7-8］。

酵母菌培養(yǎng)物屬于動物微生態(tài)制劑領(lǐng)域的范疇，是一種由少量活菌細胞、大量細胞代謝產(chǎn)物(cell metabolites)和發(fā)酵培養(yǎng)基(fermentation medium)組成的混合物，其核心價值在于它含有的發(fā)酵代謝物(fermentation metabolites)，主要包括營養(yǎng)活性物質(zhì)(nutricines)、增味劑(taste-enhancer)、芳香物質(zhì)(aromatic substance)及一些促進畜禽生長的未知因子等。本課題組前期研究表明復合酵母菌在特殊發(fā)酵工藝下產(chǎn)生的營養(yǎng)活性物質(zhì)主要有5種，分別為β-葡聚糖(β-glucan)、甘露聚糖(mannan)、多肽(polypeptides)、有機酸(organic acids)和氨基酸(amino acids)［9］。這些營養(yǎng)活性物質(zhì)在改善動物消化道菌群結(jié)構(gòu)、保持腸道微生態(tài)平衡及提高瘤胃功能等方面均起著重要作用。在營養(yǎng)活性物質(zhì)功效方面，研究者們越來越重視營養(yǎng)活性物質(zhì)之間的組合效應(yīng)。基于“營養(yǎng)活性物質(zhì)組學理論”［10］，本課題組在研究復合酵母菌培養(yǎng)物過程中更強調(diào)5種營養(yǎng)活性物質(zhì)間相互作用的整體效果。酵母菌產(chǎn)品作用效果的差異很大程度上源于所用菌株的差異［11］，用作飼料添加劑的酵母菌株數(shù)量很多，但是不同菌株對瘤胃微生物的作用效果不同，進而對瘤胃發(fā)酵及動物機體產(chǎn)生不同的效應(yīng)［12］，可見優(yōu)良的酵母菌株是反芻動物微生態(tài)制劑研究與應(yīng)用的基礎(chǔ)［13］。本試驗通過對6株酵母菌代謝產(chǎn)生營養(yǎng)活性物質(zhì)的能力進行比較與分析，從而篩選出優(yōu)良菌株，為后期反芻動物微生態(tài)制劑的研制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

產(chǎn)朊假絲酵母(Cadida atilis)BY、熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)BR、熱帶假絲酵母B2、釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YR、釀酒酵母YC和釀酒酵母BC，均來源于內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)學院反芻動物微生態(tài)制劑課題組菌種庫。

1.2 菌株培養(yǎng)

6株酵母菌分別接種到麥芽汁培養(yǎng)基中，180 r/min、30℃培養(yǎng)48 h;以不接菌的麥芽汁培養(yǎng)基作為空白對照，每個樣品3個平行。

1.3 酵母菌細胞壁中β-葡聚糖、甘露聚糖含量的測定

酵母菌破壁:采用渦流微珠破壁法［14］。

硫酸水解:用72%的硫酸溶液處理［15］。分別稱取 β-葡聚糖、甘露聚糖各5.00、6.25、7.50、8.75、10.00、12.50、15.00 mg，硫酸水解后使多糖終濃度為 0.20、0.25、0.30、0.35、0.40、0.50、0.60 mg/mL。

單糖含量測定:采用液相色譜-示差折光檢測器測定7個樣品及校正多糖中甘露糖和葡萄糖含量［16］。

結(jié)果計算:以校正多糖的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制校正曲線，得出回歸方程。樣品的峰面積代入回歸方程中計算得到酵母菌細胞壁中β-葡聚糖及甘露聚糖含量。

1.4 酵母菌培養(yǎng)液中有機酸含量的測定

采用安捷倫LC1100液相色譜儀測定有機酸含量［17］。

1.5 酵母菌培養(yǎng)液中氨基酸含量的測定

采用日立L-8900型全自動氨基酸分析儀測定氨基酸含量［18］。

1.6 酵母菌培養(yǎng)液中多肽含量的測定

標準曲線制作:以牛血清白蛋白的含量為橫坐標，其在595 nm處的吸光度值為縱坐標繪制標準曲線［19］。

多肽提取:量取酵母菌培養(yǎng)液5.00 mL于50 mL離心管中，加入10 mL 75%的乙醇和5 mL、pH 4.8的檸檬酸，充分混勻，用4 000 r/min離心10 min，取上清液。

多肽含量測定:取3支試管，各吸取樣品上清液1 mL，各加入考馬斯亮藍G250溶液5.0 mL，充分振蕩混勻，靜置5 min后，測定595 nm處的吸光度值，代入標準曲線求出樣品中多肽的含量。

1.7 統(tǒng)計與分析

試驗數(shù)據(jù)用平均值±標準差表示，采用SAS 9.0統(tǒng)計軟件中的ANOVA對數(shù)據(jù)進行方差分析，P＜0.05為差異顯著，P＞0.05為差異不顯著;使用DPS 14.10軟件運用Topsis法對數(shù)據(jù)進行多試驗、多指標綜合分析［20］。

2 結(jié)果

2.1 β-葡聚糖及甘露聚糖含量測定結(jié)果

β-葡聚糖的校正方程為y=603 391x-3 997.7(R2=99.12)，說明 β-葡聚糖含量在0.2～0.6 mg/mL范圍內(nèi)多糖濃度與單糖峰面積具有良好的線性相關(guān)。甘露聚糖的校正方程為y=82 792x-11 326(R2=99.25)，說明 0.2～0.6 mg/mL范圍內(nèi)的多糖濃度與單糖峰面積呈良好線性相關(guān)。

由表1可知，產(chǎn)β-葡聚糖能力最強的菌株為熱帶假絲酵母BR，其細胞壁中β-葡聚糖含量高達80.2 mg/g，顯著高于其他5株酵母菌(P＜0.05)，產(chǎn)朊假絲酵母BY和熱帶假絲酵母B2次之，其細胞壁中β-葡聚糖含量分別為62.8和59.1 mg/g，釀酒酵母YR、釀酒酵母YC、熱帶假絲酵母B2三者差異不顯著(P＞0.05)。同時，熱帶假絲酵母BR產(chǎn)甘露聚糖能力也最強，其細胞壁中甘露聚糖含量達60.5 mg/g，顯著高于產(chǎn)朊假絲酵母BY、釀酒酵母BC、釀酒酵母YC(P＜0.05)，其次是熱帶假絲酵母B2和釀酒酵母YR，其細胞壁中甘露聚糖含量分別為51.9和48.1 mg/g。綜合上述2個指標，熱帶假絲酵母BR優(yōu)于其他5株酵母菌。

表1 不同酵母菌細胞壁中β-葡聚糖、甘露聚糖的含量Table 1 The contents of β-glucan and mannan in cell walls of different yeasts mg/g

2.2 有機酸含量測定結(jié)果

由表2可知，6株不同酵母菌培養(yǎng)液中有機酸含量均顯著高于空白對照(P＜0.05)，但不同酵母菌之間產(chǎn)有機酸的能力有較大差異。其中，產(chǎn)酒石酸能力較強的菌株是熱帶假絲酵母BR和產(chǎn)朊假絲酵母BY，其培養(yǎng)液中酒石酸含量分別為85.61和83.84 μg/mL，顯著高于其他菌株(P＜0.05)，其次是釀酒酵母YR、釀酒酵母YC及釀酒酵母BC，其培養(yǎng)液中酒石酸含量分別為63.53、60.46和56.73 μg/mL，顯著高于熱帶假絲酵母B2(P＜0.05);產(chǎn)朊假絲酵母BY產(chǎn)蘋果酸能力最強，其培養(yǎng)液中蘋果酸含量為92.53 μg/mL，顯著高于其他菌株(P＜0.05)，釀酒酵母YC和釀酒酵母YR稍次之，其培養(yǎng)液中蘋果酸含量分別為76.55和71.63 μg/mL;產(chǎn)檸檬酸能力較強的菌株是熱帶假絲酵母B2和產(chǎn)朊假絲酵母BY，其培養(yǎng)液中檸檬酸含量分別高達 111.05和94.49 μg/mL，顯著高于其他菌株(P ＜0.05)，其次是釀酒酵母YR、釀酒酵母YC及釀酒酵母BC，其培養(yǎng)液中檸檬酸含量分別為76.52、68.71和61.85 μg/mL;熱帶假絲酵母BR產(chǎn)丁二酸能力最強，其培養(yǎng)液中丁二酸含量為119.70 μg/mL，顯著高于其他菌株(P＜0.05)，其次是釀酒酵母BC、釀酒酵母YC、產(chǎn)朊假絲酵母BY、釀酒酵母YR，其培養(yǎng)液中丁二酸含量分別為88.90、76.69、73.61和71.61 μg/mL，熱帶假絲酵母B2培養(yǎng)液中丁二酸含量相比最低。6株酵母菌中產(chǎn)朊假絲酵母BY產(chǎn)酒石酸和蘋果酸能力均最強，并且其培養(yǎng)液中總有機酸含量也顯著高于其他菌株(P＜0.05)，達到344.46 μg/mL，顯著高于其他5株酵母菌(P＜0.05);熱帶假絲酵母BR產(chǎn)丁二酸能力最強，同時其培養(yǎng)液中總有機酸含量達到312.11 μg/mL，位列第2，顯著高于其他4株酵母菌(P＜0.05)。

2.3 氨基酸含量測定結(jié)果

由表3可知，6株酵母菌培養(yǎng)液中總氨基酸的含量無顯著差異(P＜0.05);熱帶假絲酵母BR、產(chǎn)朊假絲酵母BY、熱帶假絲酵母B2產(chǎn)谷氨酸能力較高，其培養(yǎng)液中谷氨酸含量分別為0.915、0.910和0.910 mg/g，顯著高于釀酒酵母YR、釀酒酵母YC和釀酒酵母BC(P＜0.05);釀酒酵母YR、釀酒酵母YC、產(chǎn)朊假絲酵母BY和釀酒酵母BC產(chǎn)甘氨酸能力較高，其培養(yǎng)液中谷氨酸含量顯著高于其余2株酵母菌(P＜0.05);產(chǎn)朊假絲酵母BY產(chǎn)丙氨酸能力最高，其培養(yǎng)液中丙氨酸含量高達0.325 mg/g，顯著高于其他菌株(P＜0.05);熱帶假絲酵母BR和熱帶假絲酵母B2產(chǎn)半胱氨酸能力較高，其培養(yǎng)液中半胱氨酸含量分別為0.115、0.120 mg/g，顯著高于其他菌株(P＜0.05);釀酒酵母YR、產(chǎn)朊假絲酵母BY、釀酒酵母BC產(chǎn)纈氨酸能力較高，其培養(yǎng)液中纈氨酸含量均為0.305 mg/g，顯著高于熱帶假絲酵母BR和熱帶假絲酵母B2(P＜0.05);釀酒酵母YR產(chǎn)蛋氨酸能力最高，其培養(yǎng)液中蛋氨酸含量顯著高于其他菌株(P＜0.05);產(chǎn)朊假絲酵母BY產(chǎn)酪氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸能力最高，其培養(yǎng)液中酪氨酸、苯丙氨酸、脯 氨 酸 含 量 分 別 為 0.085、0.235、0.365 mg/g，酪氨酸、苯丙氨酸含量顯著高于其他菌株(P＜0.05)，脯氨酸含量顯著高于熱帶假絲酵母B2和熱帶假絲酵母BR(P＜0.05)。

表2 不同酵母菌培養(yǎng)液中有機酸含量Table 2 The contents of organic acids in cultures of different yeasts μg/mL

表3 不同酵母菌培養(yǎng)液中氨基酸含量Table 3 The contents of amino acids in cultures of different yeasts mg/g

2.4 多肽含量測定結(jié)果

由表4可知，6株酵母菌培養(yǎng)液中多肽含量均顯著高于空白對照(P＜0.05)。其中，釀酒酵母BC產(chǎn)多肽能力最高，其培養(yǎng)液中多肽含量達到14.08 mg/dL，顯著高于其他菌株(P＜0.05)。釀酒酵母YR、釀酒酵母YC、熱帶假絲酵母B2產(chǎn)多肽能力次之，其培養(yǎng)液中多肽含量分別為12.33、12.41、12.79 mg/dL，三者之間差異不顯著(P＞0.05)，但顯著高于熱帶假絲酵母BR和產(chǎn)朊假絲酵母BY(P＜0.05)。

表4 不同酵母菌培養(yǎng)液中多肽含量Table 4 The content of polypeptide in cultures of different yeasts mg/dL

2.5 酵母菌產(chǎn)活性物質(zhì)能力的綜合評定

依據(jù)以上試驗結(jié)果使用DPS 14.10軟件運用Topsis法對數(shù)據(jù)進行多試驗、多指標綜合分析，得出結(jié)論見表5?？芍?，最優(yōu)的菌株為熱帶假絲酵母BR，其細胞壁中β-葡聚糖和甘露聚糖含量分別為80.2和60.5 mg/g，優(yōu)于其他菌株，其培養(yǎng)液中多肽含量為114.2 μg/L，氨基酸和有機酸含量分別為4.625 mg/g和312.11 μg/mL;其次為產(chǎn)朊假絲酵母BY，其產(chǎn)有機酸能力較強，培養(yǎng)液中酒石酸、蘋果酸、總有機酸含量分別為83.84、92.53、344.46 μg/mL，優(yōu)于其他5株酵母菌。

表5 6株酵母菌Topsis法排序指標值Table 5 The ranking index values of 6 yeasts by Topsis method

3 討論

3.1 不同酵母菌其生物活性差異

近年來，酵母菌類產(chǎn)品在反芻動物上的應(yīng)用已有較多報道，大量試驗表明添加酵母菌對反芻動物的瘤胃發(fā)酵、飼料消化率及生產(chǎn)性能等方面都有積極的影響［12］。但由于所用的發(fā)酵菌種類不同、發(fā)酵工藝各異，致使產(chǎn)品的作用效果參差不齊。這種作用效果的差異與酵母菌菌種的結(jié)構(gòu)及生物活性密切相關(guān)［21］。本課題組致力于反芻動物微生態(tài)制劑的研究，從30余株酵母菌中初篩出6株菌株，本試驗對這6株酵母菌產(chǎn)生5種營養(yǎng)活性物質(zhì)的能力進行分析，得到了2株高活性菌株，分別為熱帶假絲酵母BR和產(chǎn)朊假絲酵母BY，這2株酵母菌在產(chǎn)β-葡聚糖、甘露聚糖及有機酸能力等方面具有明顯優(yōu)勢。酵母菌細胞壁中的β-葡聚糖［由D-葡聚糖通過β-(1→3)鍵的方式相結(jié)合］不同于植物細胞壁中的β-(1→4)葡聚糖，它在消化道中不可溶、不被吸收，同時不產(chǎn)生黏性，更重要的是它是一種免疫促進劑，能夠增強機體的非特異性免疫能力，改善動物消化道的菌群結(jié)構(gòu);甘露聚糖是一種免疫功能很強的細胞壁多糖，它不僅能增強動物的免疫能力，還能吸附外源性毒素(heterotoxin)和病原菌(pathogens)，在保持腸道微生態(tài)平衡方面起重要作用;酵母菌培養(yǎng)物中的多肽能夠直接被動物吸收，參與機體生理活動和代謝調(diào)節(jié)，從而促進動物生長、提高生產(chǎn)性能、改善產(chǎn)品品質(zhì)和動物健康狀態(tài);復合酵母菌培養(yǎng)物產(chǎn)生的有機酸主要有蘋果酸、檸檬酸、琥珀酸和酒石酸，不同的有機酸均表現(xiàn)出較好的瘤胃調(diào)控功能。另外，反芻動物對特定氨基酸的需求比對特定蛋白質(zhì)的需求更重要，增加動物某種限制性氨基酸會使其氨基酸的利用率提高。

優(yōu)良菌株是決定微生態(tài)制劑品質(zhì)的關(guān)鍵因素之一，本試驗篩選出的優(yōu)良菌株為研制反芻動物微生態(tài)制劑奠定了良好的基礎(chǔ)，從而從根本上避免了生產(chǎn)中常見的盲目使用菌株的不科學現(xiàn)象。

3.2 營養(yǎng)活性物質(zhì)對瘤胃發(fā)酵的影響

近幾年，飼料中營養(yǎng)活性物質(zhì)的功效越來越受到研究者的重視。營養(yǎng)活性物質(zhì)是飼料中天然存在的有特殊營養(yǎng)作用的微量組分，具有刺激機體對營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收，與基因組互作，增強免疫系統(tǒng)功能，調(diào)節(jié)消化道菌群平衡，保持飼料品質(zhì)等作用［22］，在改善動物健康和調(diào)節(jié)新陳代謝方面也發(fā)揮著很大功效［23］。營養(yǎng)活性物質(zhì)是將健康和營養(yǎng)聯(lián)系起來的飼料組分，并在全方位營養(yǎng)中起著越來越重要的作用。目前研究的營養(yǎng)活性物質(zhì)主要包括抗氧化劑、乳化劑、酶、不可消化的低聚糖和有機酸等。酵母菌自身含有多量的營養(yǎng)物質(zhì)并可以通過發(fā)酵過程而產(chǎn)生多種營養(yǎng)活性物質(zhì)，如β-葡聚糖、甘露聚糖、有機酸等。當給奶牛飼喂酵母菌培養(yǎng)物后，一方面，β-葡聚糖、有機酸等營養(yǎng)活性物質(zhì)能為瘤胃內(nèi)某些細菌的生長提供特殊的發(fā)酵底物，通過刺激瘤胃細菌的生長來提高飼料轉(zhuǎn)化率;另一方面，酵母菌培養(yǎng)物中的β-葡聚糖和甘露聚糖是2種免疫活性多糖，二者均有激活機體免疫系統(tǒng)和增強機體免疫能力的功效［24-25］，達到了增強奶牛免疫功能、減少乳汁體細胞數(shù)的效果，從而使奶牛的乳房更加健康，產(chǎn)奶量也隨之相應(yīng)增加。本試驗通過多指標綜合分析得到最優(yōu)菌株為熱帶假絲酵母BR，其細胞壁中β-葡聚糖、甘露聚糖含量分別為80.2和60.5 mg/g，分別是釀酒酵母BC的1.5倍以上;產(chǎn)丁二酸和酒石酸的能力最強，其培養(yǎng)液中丁二酸和酒石酸含量分別為119.70和85.61 μg/mL，分別約是熱帶假絲酵母B2的3和2倍，且其培養(yǎng)液中總有機酸含量達到312.11 μg/mL。這些營養(yǎng)活性物質(zhì)在調(diào)控瘤胃發(fā)酵功能和提高動物免疫機能方面將發(fā)揮積極的功效。

3.3 酵母菌細胞破壁方法

酵母菌細胞壁厚且堅韌，所以破壁效果成為制約酵母菌胞內(nèi)營養(yǎng)活性物質(zhì)測定準確與否的主要瓶頸。本研究選用渦流微珠破壁法，利用微珠和物料之間的研磨、粉碎、剪切、擠壓等機械力來打碎細胞壁［26］。該方法破壁率高，能有效測定胞內(nèi)及細胞壁上的營養(yǎng)活性物質(zhì)含量，為本試驗的酵母菌細胞壁中多糖含量的測定奠定了基礎(chǔ)。又因為多糖結(jié)構(gòu)復雜，難以直接準確測定，所以本試驗將多糖酸解為葡萄糖和甘露糖后采用液相色譜-示差折光檢測器測定，使結(jié)果更加精準可靠?；谄咸烟呛透事短堑姆肿邮骄鶠镃6H12O6，相對分子質(zhì)量為180.16，多糖酸解后殘基分子式為C6H10O5，相對分子質(zhì)量是162.16，也就是說殘基相對分子質(zhì)量與單糖的相對分子質(zhì)量之比為0.9。所以，大部分研究都是簡單地以測試樣品的單糖含量乘以0.9來作為多糖含量。但是，該計算結(jié)果受多糖水解程度的影響，水解不徹底會使測定結(jié)果偏小。本文運用外標法，將高純度的2種多糖試劑進行硫酸水解后，測定單糖含量，并做成梯度繪制校正曲線。只要樣品濃度在曲線范圍內(nèi)就表示多糖水解程度與校正曲線走向一致，將其峰面積代入校正曲線，得出樣品β-葡聚糖和甘露聚糖含量，使測定結(jié)果更精準可靠。

4 結(jié)論

①熱帶假絲酵母BR產(chǎn)β-葡聚糖、甘露聚糖能力最強，其細胞壁中β-葡聚糖、甘露聚糖含量分別為80.2、60.5 mg/g;產(chǎn)朊假絲酵母BY產(chǎn)有機酸能力最強，其培養(yǎng)液中總有機酸含量為344.46 μg/mL;釀酒酵母BC產(chǎn)多肽能力最強，其培養(yǎng)液中多肽含量為14.08 mg/dL。

②多指標綜合分析得出最優(yōu)菌株為熱帶假絲酵母BR，其產(chǎn)β-葡聚糖、甘露聚糖能力最強，細胞壁中β-葡聚糖、甘露聚糖含量分別為80.2、60.5 mg/g;產(chǎn)丁二酸的能力最強，培養(yǎng)液中丁二酸含量為119.70 μg/mL，且總有機酸含量達到312.11 μg/mL;產(chǎn)生谷氨酸和半胱氨酸能力最強，培養(yǎng)液中谷氨酸和半胱氨酸含量分別為0.915和0.115 mg/g，且總氨基酸含量達到4.705 mg/g。

［1］帥麗芳，段銘，張光圣.微生態(tài)制劑對反芻動物消化系統(tǒng)的調(diào)控作用［J］.中國飼料，2002(9):16-17.

［2］PIVA G，BELLADONNA S，F(xiàn)USCONI G，et al.Effects of yeast on dairy cow performance，ruminal fermentation，blood components，and milk manufacturing properties［J］.Journal of Dairy Science，1993，76(9):2717-2722.

［3］唐海翠，龐學東，莊蘇，等.酵母培養(yǎng)物對山羊瘤胃纖維素酶活及揮發(fā)性脂肪酸的影響［J］.中國畜牧雜志，2006，42(15):35-38.

［4］王聰，任金，劉強，等.酵母對奶牛泌乳性能及健康狀況影響的研究［J］.獸藥與飼料添加劑，2005，10(1):7-9.

［5］苑文珠，劉建新，吳月明.日糧中直接添加微生物制劑(DFM)對反芻動物的影響［J］.飼料研究，2001(2):1-3.

［6］SCHINGOETHE D J，LINKE K N，KALSCHEUR K F，et al.Feed efficiency of mid-lactation dairy cows fed yeast culture during summer［J］.Journal of Dairy Science，2004，87(12):4178-4181.

［7］LILA Z A，MOHAMMED N，YASUI T，et al.Effects of a twin strain of Saccharomyces cerevisiae live cells on mixed ruminal microorganism fermentation in vitro［J］.Journal of Animal Science，2004，82(6):1847-1854.

［8］CHAUCHERYRAS F，F(xiàn)ONTY G，BERTIN G，et al.In vitro H2utilization by a ruminal acetogenic bacterium cultivated alone or in association with an archaea methanogen is stimulated by a probiotic strain of Saccharomyces cerevisiae［J］.Applied and Environmental Microbiology，1995，61(9):3466-3467.

［9］孫鴿.奶牛微生態(tài)制劑酵母菌優(yōu)良特性的研究及其對瘤胃發(fā)酵的影響［D］.碩士學位論文.呼和浩特:內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學，2012.

［10］盧德勛.系統(tǒng)動物營養(yǎng)學導論［M］.北京:中國農(nóng)業(yè)出版社，2004.

［11］CHAUCHEYRAS-DURANDF，WALKERND，BACH A.Effects of active dry yeasts on the rumen microbial ecosystem:past，present and future［J］.Animal Feed Science and Technology，2008，145(1/2/3/4):5-26.

［12］NEWBOLD C J，WALLACE R J，CHEN X B，et al.Different strains of Saccharomyces cerevisiae differ in their effects on ruminal bacterial numbers in vitro and in sheep［J］.Animal Science，1995，73(6):1811-1818.

［13］DAWSON K A，HOPKINS D M.Differential effects of live yeast on the cellulolytic activities of anaerobic ruminal bacteria［J］.Journal of Animal and Science，1991，69(Suppl.1):531.

［14］劉曉永.釀酒酵母β-D-葡聚糖制備、構(gòu)象及免疫功效研究［D］.博士學位論文.無錫:江南大學，2007:22-27.

［15］DALLIES N，F(xiàn)RAN?OIS J，PAQUET V.A new method for quantitative determination of polysaccharides in the yeast cell wall.Application to the cell wall defective mutants of Saccharomyces cerevisiae［J］.Yeast，1998，14(14):1297-1306.

［16］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局，中國國家標準化管理委員會.GB/T 22221—2008食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測定高效液相色譜法［S］.北京:中國標準出版社，2008.

［17］中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標準化管理委員會.GB/T 5009.157—2003食品中有機酸的測定［S］.北京:中國標準出版社，2003.

［18］中華人民共和國衛(wèi)生部，中國國家標準化管理委員會.GB/T 5009.124—2003食品中氨基酸的測定［S］.北京:中國標準出版社，2003.

［19］BOHLE B，ZWōLFER B，HERATIZADEH A，et al.Cooking birch pollenrelated food:divergent consequences for IgE-and T cellmediated reactivity in vitro and in vivo［J］.Journal of Allergy and Clinical Immunology，2006，118(1):242-249.

［20］唐啟義.DPS?數(shù)據(jù)處理系統(tǒng):實驗設(shè)計，統(tǒng)計分析及數(shù)據(jù)挖掘［M］.2版.北京:科學出版社，2010.

［21］李聲永，王加啟，龔月生，等.酵母培養(yǎng)物在反芻動物日糧中的應(yīng)用研究進展［J］.中國畜牧獸醫(yī)，2002，29(5):18-22.

［22］盧德勛.國際動物營養(yǎng)學的發(fā)展趨勢與我們對策的思考［C］.北京:中國農(nóng)業(yè)科學技術(shù)出版社，2006:8-17.

［23］ADAMS C A.The role of nutricines in health and total nutrition［J］.Proceedings of Australian Poultry Science Symposim，2000，12:17-24.

［24］JAWHARA S，MOGENSEN E，MAGGIOTTO F，et al.Murine model of dextran sulfate sodium-induced colitis reveals Candida glabrata virulence and contribution of β-mannosyltransferases［J］.The Journal of Biological Chemistry，2012，287:11313-11324.

［25］LAMKANFI M，MALIREDDI R K，KANNEGANTI T D.Fungalzymosan and mannan activatethe cryopyrin inflammasome［J］.The Journal of Biological.Chemistry，2009，284:20574-20581.

［26］孫海翔，尹卓容，馬美范.高壓均質(zhì)破碎啤酒酵母細胞壁的研究［J］.食品工業(yè)科技，2002，23(2):66-67.