李萬佳 李福昌 朱曉強 付朝暉 張彩霞

(山東農業(yè)大學動物科技學院，泰安 271018)

維生素D是動物體內必需的一種脂溶性維生素，在維持動物正常生長、調節(jié)鈣磷代謝平衡以及促進骨骼發(fā)育等方面具有重要作用［1］。近年的研究認為，維生素D還具有其他廣泛的生物學效應，如參與協(xié)調機體的抗氧化等。目前，我國還未正式出臺獺兔完整的飼養(yǎng)標準，因此對獺兔維生素D需要量進行研究具有重要意義。本試驗以生長獺兔為研究對象，探討飼糧維生素D添加水平對其生長性能、鈣磷代謝、血液指標和抗氧化功能的影響，以尋求獺兔飼糧中維生素D的適宜添加水平，為我國制訂獺兔飼養(yǎng)標準提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試驗飼糧

基礎飼糧參照NRC(1977)家兔飼養(yǎng)標準配制而成，其組成及營養(yǎng)水平見表1。在基礎飼糧中分別添加0(對照組)、500、1 000、2 000、4 000 IU/kg維生素D，制成5種試驗飼糧，并加工成直徑為4～6 mm的顆粒飼料，通風干燥后保存?zhèn)溆谩?/p>

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(air-dry basis) %

1.2 試驗設計與飼養(yǎng)管理

試驗選用健康、平均體重為(1.45±0.03)kg的3月齡獺兔200只，公母各占1/2，隨機分成5組，每組40個重復，每個重復1只獺兔。5組獺兔分別飼喂1種試驗飼糧，預試期7 d，正試期53 d。試驗兔單籠飼養(yǎng)，試驗期間早、晚各喂1次，自由采食、飲水，采用常規(guī)飼養(yǎng)管理和免疫程序，自然采光、通風。

1.3 消化代謝試驗

試驗結束前6天，每組隨機抽取8只試驗兔，轉移到經消毒處理的代謝籠內，單籠飼養(yǎng)，飼喂相應的試驗飼糧，自由采食、飲水。預試期3 d，正試期連續(xù)3 d收集試驗兔全天的糞樣，4℃密封保存，并記錄每只試驗兔每天的采食量、排糞量。

1.4 樣品采集與制備

糞樣取回后在烘箱中65℃烘干72 h，稱得糞樣的風干重，最后將各組風干糞樣粉碎，待測鈣、磷含量，用于計算鈣、磷表觀消化率。

在試驗開始后第53天早晨空腹稱重，每組隨機抽取8只試驗兔，立即心臟采血10 mL，37℃水浴40 min后，3 000 r/min離心15 min，分離所得血清分裝于Eppendorf管中，置于-20℃冷凍保存，待測抗氧化指標和血液指標。

采血完成后將試驗兔頸動脈放血屠宰，摘取肝臟放于液氮罐中保存，待測抗氧化指標。屠宰后取左腿脛骨，剔除附著組織后用去離子水清洗，置于-20℃保存，待測脛骨中鈣、磷含量。

1.5 測定指標與方法

1.5.1 生長性能指標

試驗結束后，以重復為單位稱量試驗兔的體重，并統(tǒng)計全期的喂料量，計算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.5.2 鈣磷代謝指標

糞和脛骨中鈣、磷含量分別采用高錳酸鉀滴定法和鉬黃比色法進行測定，血清中鈣、磷含量采用日本和光純藥工業(yè)株式會社提供的試劑盒測定。

鈣表觀消化率(%)=100×(食入飼糧總鈣量-食入飼糧后排泄物鈣量)/食入飼糧總鈣量;

磷表觀消化率(%)=100×(食入飼糧總磷量-食入飼糧后排泄物磷量)/食入飼糧總磷量。

1.5.3 血液指標

血清堿性磷酸酶(ALP)活性以及總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、甘油三酯(TG)、膽固醇(CHO)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量均采用日本和光純藥工業(yè)株式會社提供的試劑盒，按說明書在日立7020型全自動分析儀上進行測定。血清降鈣素(CT)、甲狀旁腺素(PTH)和維生素D3含量均采用酶聯(lián)免疫吸附法進行測定，試劑盒購自上海朗頓生物科技有限公司。

1.5.4 血清和肝臟抗氧化指標

血清和肝臟總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性、總抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量均在UV-2450型紫外可見分光光度計上測定，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.6 數據處理與分析

數據以平均值和均方根誤差(R-MSE)表示，采用SAS 9.1統(tǒng)計軟件中的GLM進行數據的方差分析，若有顯著差異，則采用Duncan氏法進行多重比較。

2 結果與分析

2.1 飼糧維生素D添加水平對生長獺兔生長性能的影響

由表2可以看出，在初始體重無顯著差異(P＞0.05)的情況下，飼糧維生素D添加水平對平均日增重、平均日采食量、料重比均無顯著影響(P＞0.05)，平均日增重在維生素D添加水平為2 000 IU/kg時最高。

表2 飼糧維生素D添加水平對生長獺兔生長性能的影響Table 2 Effects of vitamin D supplemental level on growth performance of growing Rex rabbits(n=8)

2.2 飼糧維生素D添加水平對生長獺兔鈣磷代謝的影響

由表3可以看出，飼糧維生素D添加水平對血清中鈣、磷含量無顯著影響(P＞0.05)，但隨飼糧維生素D添加水平的增加，血清中鈣、磷含量呈先升高后降低趨勢，均以2 000 IU/kg組的值為最高;飼糧維生素D添加水平對糞中磷含量無顯著影響(P＞0.05)，而對糞中鈣含量有顯著影響(P=0.011 5)，表現(xiàn)為2 000 IU/kg組顯著低于0、500和4 000 IU/kg組(P＜0.05);飼糧維生素D添加水平對脛骨中鈣含量有極顯著影響(P=0.002 2)，表現(xiàn)為2 000 IU/kg組極顯著高于0、500和1 000 IU/kg組(P＜0.01)，而對脛骨中磷含量無顯著影響(P＞0.05);飼糧維生素D添加水平對鈣、磷表觀消化率無顯著影響(P＞0.05)，但隨維生素D添加水平的增加，鈣、磷表觀消化率呈先升高后降低趨勢，均以2 000 IU/kg組的值為最高。

2.3 飼糧維生素D添加水平對生長獺兔血液指標的影響

由表4可以看出，飼糧維生素D添加水平對血清TP含量有顯著影響(P=0.046 3)，表現(xiàn)為500、2 000和4 000 IU/kg組顯著高于對照組(P＜0.05)，并以2 000 IU/kg組的值為最高;飼糧維生素D添加水平對血清ALB含量有顯著影響(P=0.043 0)，表現(xiàn)為對照組顯著低于其他4組(P＜0.05)，其他各組間無顯著差異(P＞0.05)，并以2 000 IU/kg組的值為最高;飼糧維生素D添加水平對血清 ALP活性以及 TG、CHO、HDL-C和LDL-C含量均無顯著影響(P＞0.05)。

表3 飼糧維生素D添加水平對生長獺兔鈣磷代謝的影響Table 3 Effects of vitamin D supplemental level on Ca and P metabolism of growing Rex rabbits(n=8)

由表4還可以看出，飼糧維生素D添加水平對血清CT含量有顯著影響(P=0.010 4)，表現(xiàn)為1 000和2 000 IU/kg組顯著高于對照組(P＜0.05)，并以2 000 IU/kg組的值為最高;飼糧維生素D添加水平對血清PTH含量無顯著影響(P＞0.05)，但隨維生素D添加水平的增加，血清PTH含量呈先升高后降低趨勢，并以2 000 IU/kg組的值為最高;飼糧維生素D添加水平對血清維生素D3含量有顯著影響(P=0.017 5)，表現(xiàn)為2 000 IU/kg組顯著高于對照組和500 IU/kg組(P＜0.05)。

表4 飼糧維生素D添加水平對生長獺兔血液指標的影響Table 4 Effects of vitamin D supplemental level on blood indices of growing Rex rabbits(n=8)

2.4 飼糧維生素D添加水平對生長獺兔血清和肝臟抗氧化指標的影響

由表5可以看出，飼糧維生素D添加水平對血清GSH-Px和T-SOD活性有極顯著影響(P=0.007 8和P＜0.000 1)，隨維生素D添加水平的增加，血清GSH-Px和T-SOD活性呈先升高后降低趨勢，均以2 000 IU/kg組的值為最高，并表現(xiàn)為2 000 IU/kg組的血清GSH-Px活性極顯著高于對照組和500 IU/kg組(P＜0.01)，1 000、2 000和4 000 IU/kg組的血清T-SOD活性極顯著高于對照組和500 IU/kg組(P＜0.01);飼糧維生素D添加水平對血清MDA含量無顯著影響(P＞0.05)，但隨維生素D添加水平的增加，血清MDA含量有降低趨勢，以2 000 IU/kg組的值為最低。

由表5還可以看出，飼糧維生素D添加水平對肝臟GSH-Px活性有極顯著影響(P=0.004 8)，表現(xiàn)為2 000 IU/kg組極顯著高于其他4組(P＜0.01)，其他各組間無顯著差異(P＞0.05);飼糧維生素D添加水平對肝臟T-SOD活性有顯著影響(P=0.043 0)，表現(xiàn)為2 000 IU/kg組顯著高于對照組(P＜0.05)，其他各組間無顯著差異(P＞0.05);飼糧維生素D添加水平對肝臟T-AOC和MDA含量無顯著影響(P＞0.05)，但隨維生素D添加水平的增加，肝臟T-AOC先升高后降低，MDA含量先降低后升高，并分別在2 000 IU/kg組獲得最大值和最小值。

表5 飼糧維生素D添加水平對生長獺兔血清和肝臟抗氧化指標的影響Table 5 Effects of vitamin D supplemental level on serum and liver antioxidant indices of growing Rex rabbits(n=8)

3 討論

3.1 飼糧維生素D添加水平與生長獺兔生長性能

維生素D是動物生長所必需的營養(yǎng)素，適量添加可促進動物生長，但是長期過量添加會產生毒性。張艷玲等［2］研究發(fā)現(xiàn)，動物對維生素D3的吸收和對維生素A和維生素E的吸收有拮抗作用，這在一定程度會降低動物的生長速度。關于兔維生素D需求方面的研究很少，在其他動物的研究中，石天虹等［3］研究發(fā)現(xiàn)，隨飼糧維生素 D3添加水平的增加，肉仔雞體增重、耗料量、存活率均顯著增加。Atencio等［4］研究發(fā)現(xiàn)，維生素D可改善畜禽生長性能，提高肉雞體增重、采食量和飼料效率，并能增加脛骨灰分含量，降低雛雞死亡率。陳娟等［5］研究表明，飼喂維生素D3添加水平為5 000 IU/kg的飼糧28 d后，料重比與基礎飼糧組相比顯著提高，對肉仔雞的生長性能產生了顯著的影響。本試驗中，飼糧維生素D添加水平對生長獺兔的平均日增重、平均日采食量、料重比均沒有產生顯著影響，但從數據趨勢可以看出以2 000 IU/kg的添加水平最為適宜。

3.2 飼糧維生素D添加水平與生長獺兔鈣磷代謝

維生素D對促進鈣磷吸收和骨骼中鈣磷沉積具有重要作用。閆素梅等［6］研究結果表明，飼糧維生素D添加水平在500～5 000 IU/kg范圍內，隨著飼糧中維生素D添加水平的增加，血清鈣、磷含量呈一次線性增加趨勢，脛骨鈣含量呈顯著的一元二次曲線上升趨勢。Mitchell等［7］研究發(fā)現(xiàn)，飼糧添加維生素D3后，21日齡肉仔雞日增重、磷存留和血漿中可透析磷含量均顯著提高。馮志華等［8］研究發(fā)現(xiàn)，維生素 D3組總磷、植酸磷表觀消化率及血清磷含量顯著高于對照組，表明維生素D3促進了磷的運轉和吸收。王松艷等［9］研究報道，缺乏維生素D的飼糧會引起肉雞體內活性代謝產物減少，血清鈣、磷含量降低，骨重吸收增加，骨密度、骨礦含量以及股骨重等均低于正常組。本試驗中，與在其他動物中的研究相似，維生素D添加水平對血清鈣、磷含量無顯著影響，但隨維生素D添加水平的增加，血清鈣、磷含量呈上升趨勢。飼糧維生素D添加水平對生長獺兔脛骨中鈣含量有極顯著影響，說明了維生素D對鈣在骨骼中的沉積有重要作用。飼糧維生素D添加水平對生長獺兔糞中鈣含量有極顯著影響，以2 000 IU/kg組的糞中鈣含量最低，同時2 000 IU/kg組的鈣、磷表觀消化率為最高，說明適宜添加水平的維生素D有促進鈣磷吸收的作用。

3.3 飼糧維生素D添加水平與生長獺兔血液指標

王麗等［10］研究表明，籠養(yǎng)育成蛋鴨血清TP和ALB含量有隨著飼糧維生素D添加水平的增加而升高的趨勢。本試驗與上述研究結果相符，表現(xiàn)為血清TP和ALB含量受飼糧維生素D添加水平的影響顯著，以添加水平為2 000 IU/kg時最為適宜。ALP是一種含鋅的對底物專一性較低的磷酸單酯水解酶，在體內直接參與磷酸基團的轉移和代謝，與機體鈣磷代謝有關。周歧存等［11］研究發(fā)現(xiàn)，在飼料中添加適量的維生素D顯著提高了皺紋盤鮑軟體部的ALP活性，但過高或過低的添加水平均對ALP活性起到抑制作用。本試驗中，飼糧維生素D添加水平對血清ALP活性的影響不顯著，但可以看出其隨飼糧維生素D添加水平的增加有先升高后降低的趨勢，以添加水平為2 000 IU/kg時為最高。此外，飼糧維生素添加水平對血清TG、CHO、HDL-C、LDL-C含量均無顯著影響。

維生素D對相關激素水平影響的研究報道較少。曹平等［12］研究表明，隨著飼糧維生素D添加水平的增加，肉雞血清維生素D3含量呈趨于顯著的一次線性增加趨勢，對血清CT、PTH含量的影響不顯著。在本試驗中，飼糧維生素D添加水平對血清CT和維生素D3含量有影響顯著，隨維生素D添加水平的增加，血清CT和維生素D3含量呈先升高后降低趨勢，維生素D添加水平為2 000 IU/kg的組顯著高于其他組;維生素D添加水平對血清PTH含量無顯著影響。

3.4 飼糧維生素D添加水平與生長獺兔抗氧化功能

T-SOD、GSH-Px、T-AOC作為抗氧化系統(tǒng)中的重要酶系，其活性與機體清除自由基的能力成正比，而MDA是細胞膜脂質過氧化的產物，其含量可間接反映細胞損傷程度。本試驗結果表明，隨維生素D添加水平的增加，血清和肝臟T-SOD、GSH-Px活性以及T-AOC升高，MDA含量降低，說明維生素D在抗氧化方面有一定的作用。Mukhopadhyay等［13］研究維生素D3作為細胞抗氧化劑的調質防止鼠淋巴瘤發(fā)生時發(fā)現(xiàn)，維生素D3可提高谷胱甘肽氧化酶和還原酶類活性。李德發(fā)等［14］研究也發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，仔豬每日維生素D3攝入量為1.5×105IU時可增加血清溶菌酶和超氧化物歧化酶(SOD)活性，與本試驗結果相似。解俊美等［15］研究表明，維生素 D對 SOD和GSH-Px活性有較強的誘導能力，可維持動物體自身自由基的產生和清除的動態(tài)平衡。本試驗發(fā)現(xiàn)，隨飼糧維生素D添加水平的增加，血清和肝臟T-SOD和GSH-Px活性呈先升高后下降趨勢，表明飼糧適量添加維生素D可提高生長獺兔機體的T-SOD和GSH-Px活性，增強其抗氧化功能。

趙吉偉等［16］研究表明，T-AOC的大小可反映機體自由基代謝的狀態(tài)，測定T-AOC對機體酶和非酶系統(tǒng)抗氧化能力綜合評判具有重要意義。MDA是脂質過氧化反應鏈式終止階段產生的小分子產物，其含量可以間接反映自由基的產生情況和機體組織細胞的脂質過氧化程度［17］。以機體中T-AOC和MDA含量作為判斷機體內的氧化應激程度的指標，較為敏感、準確且方法可操作性強［18］。本試驗結果表明，隨飼糧維生素D添加水平的增加，血清和肝臟T-AOC升高，MDA含量降低，在維生素D添加水平為2 000 IU/kg時T-AOC最高，MDA含量最低。張淑云等［19］研究同樣發(fā)現(xiàn)，隨飼糧維生素D添加水平的增加，血清和肝臟T-SOD、GSH-Px活性以及 T-AOC升高，MDA含量降低。由此可見，飼糧中適量添加維生素D對生長獺兔的抗氧化功能具有一定的提高作用。

4 結論

綜合本試驗測定的指標可以得出，生長獺兔飼糧的適宜維生素D添加水平為2 000 IU/kg。

［1］DEMAY M，SABBAGH Y，CARPENTER T.Calcium and vitamin D:what is known about the effects on growing bone［J］.Pediatrics，2007，119(Suppl.2):S141-S144.

［2］張艷玲，閆素梅.維生素A、維生素D和維生素E在動物體內的相互作用［J］.中國畜牧雜志，2006，42(5):44-46.

［3］石天虹，張桂芝，劉雪蘭，等.中能中蛋白水平下維生素A、D3對0～6周齡肉仔雞生產性能的影響［J］.家禽科學，2011，6:13-16.

［4］ATENCIO A，PESTI G M，EDWARDS H M.Twentyfive hydroxycholecalciferol as a cholecalciferol substitute in broiler breeder hen diets and its effect on the performance and general health of the progeny［J］.Poultry Science，2005，84(8):1277-1285.

［5］陳娟，王安，張淑云，等.飼糧鈣和維生素D3水平對肉仔雞生長性能、屠宰性能和肉品質的影響［J］.動物營養(yǎng)學報，2010，22(6):1544-1550.

［6］閆素梅，馮永淼，張海琴，等.維生素 A、D對肉雞鈣、磷代謝的影響［J］.動物營養(yǎng)學報，2007，19(3):218-224.

［7］MITCHELL RD，EDWARDSHM.Effectsof phytase and 1，25-dihydroxycholecalciferol on phytate utilization and the quantitative requirement for calcium and phosphorus in young broiler chickens［J］.Poultry Science，1996，75(1):95-110.

［8］馮志華，龔建剛，趙國先，等.植酸酶和維生素D3對獺兔生產性能和營養(yǎng)物質利用率的影響［J］.中國飼料，2008(16):3-25.

［9］王松艷，黎海芪，楊錫強，等.維生素D和鈣缺乏對種雞骨骼發(fā)育的影響［J］.重慶醫(yī)科大學學報，1999，24(2):141-145.

［10］王麗，王安，艾濤，等.維生素D對籠養(yǎng)育成蛋鴨生長及血液指標的影響［J］.東北農業(yè)大學學報，2007，38(3):369-373.

［11］周歧存，麥康森.皺紋盤鮑維生素D營養(yǎng)需要的研究［J］.水產學報，2004，28(2):155-160.

［12］曹平，孫建萍，閆素梅，等.維生素A、D對肉雞鈣磷代謝相關激素水平的影響［J］.飼料工業(yè)，2012，33(5):14-19.

［13］MUKHOPADHYAY S，SINGH M，CHATTERJEE M.Vitamin D3as a modulator of cellular antioxidant defence in murine lymphoma［J］.Nutrition Research，2000，20(1):91-102.

［14］李德發(fā)，劉煥龍，席鵬彬，等.維生素D3對斷奶仔豬生長性能和免疫機能的影響［J］.中國農業(yè)大學學報，2001，6(5):7-94.

［15］解俊美，王安.飼糧維生素D添加水平對蛋雛鴨免疫及抗氧化功能的影響［J］.動物營養(yǎng)學報，2012，24(9):1819-1824.

［16］趙吉偉，張穎，盧彤巖，等.不同硒源對虹蹲生長性能及抗氧化能力的影響［J］.水產學雜志，2005，18(2):28-34.

［17］FARBER J L，KYLE M E，COLEMAN J B.Mechanisms of cell injury by activated oxygen species［J］.Environ Health Perspect，1994，102(Suppl.10):17-24.

［18］ONDERCI M，SAHIN N，SAHIN K，et al.Antioxidant properties of chromium and zinc:in vivo effects on digestibility lipid peroxidation antioxidant vitamins and some minerals under a low ambient temperature［J］.Biological Trace Element Research，2003，92(2):139-150.

［19］張淑云，王安.鈣和維生素D對生長肉雞免疫及抗氧化功能的影響［J］.動物營養(yǎng)學報，2010，22(3):579-585.