溫志軍

（山東東營勝利油田中心醫(yī)院 胸外科，山東 東營 257034）

晚期非小細(xì)胞肺癌患者應(yīng)用順鉑化療后MRP和LRP基因的表達(dá)

溫志軍

（山東東營勝利油田中心醫(yī)院 胸外科，山東 東營 257034）

目的探討多藥耐藥相關(guān)蛋白MRP（multidrug resistance associated protein，MRP）和肺耐藥相關(guān)蛋白（lung resistance protein，LRP）在非小細(xì)胞肺癌中的基因表達(dá)及與順鉑耐藥的關(guān)系。方法搜集化療前后均有標(biāo)本的非小細(xì)胞肺癌患者13例，應(yīng)用RT-PCR法檢測化療前后MRP和LRP基因表達(dá)，Logistic回歸分析法分析2種蛋白基因表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果 與順鉑化療前相比，化療后患者M(jìn)RP基因和LRP基因表達(dá)均顯著增高（P＜0.05）；Logistic回歸分析顯示，2種蛋白的基因表達(dá)不具有相關(guān)性（r=0.036，P＜0.05）。結(jié)論應(yīng)用順鉑化療后MRP和LRP基因表達(dá)增高，且2種蛋白的基因表達(dá)不具有相關(guān)性。

非小細(xì)胞肺癌；順鉑；多藥耐藥相關(guān)蛋白；肺耐藥相關(guān)蛋白

作為惡性腫瘤之一的非小細(xì)胞肺癌目前在世界上的發(fā)病率和死亡率居高不下[1]，由于疾病初期的隱匿性，發(fā)現(xiàn)時常已為晚期，手術(shù)切除率低，以順鉑為主的標(biāo)準(zhǔn)化療方案成為治療的重要手段[2-3]。但是，鉑類藥物容易引起耐藥，導(dǎo)致化療失敗，成為臨床應(yīng)用的重要障礙。造成鉑類藥物耐藥的原因很多，目前認(rèn)為同多藥耐藥機制有關(guān)[4-5]。本實驗主要回顧了13例晚期非小細(xì)胞肺癌患者標(biāo)本MRP和LRP基因表達(dá)以及以順鉑為基礎(chǔ)的化療方案的療效，并用Logistic回歸分析法分析了2種蛋白基因表達(dá)的相關(guān)性，結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象 收集胸外科2013年1月～2014年1月收治的非小細(xì)胞肺癌患者13例，其中男性8例，女性5例，平均年齡（59±4.63）歲，患者經(jīng)均經(jīng)支氣管鏡下活檢確診，接受2周期以上常規(guī)化療方案。本研究通過倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 主要實驗試劑與儀器 TrizolTM試劑盒購于北京鼎國生物技術(shù)有限公司，熒光定量PCR儀（ABI公司，型號：9700），微量分析儀（Quwell公司，型號：Q-5000）。

1.3 RT-PCR法檢測MRP和LRP基因表達(dá) 搜集化療前后均有標(biāo)本的非小細(xì)胞肺癌患者標(biāo)本，按照試劑盒說明書采用Trizol一步法提取總RNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。引物序列見表1：25 μL反應(yīng)體系，預(yù)變性 94℃ 1 min，退火 60℃ 1 min，延伸72℃2 min，循環(huán)35次。余按試劑盒說明進(jìn)行操作，用反應(yīng)產(chǎn)物的吸光度與內(nèi)參的比值表示該基因表達(dá)強度。

表1 RT-PCR引物序列Tab.1 RT-PCR primer sequences

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件，正態(tài)計量資料用“±s”表示，組間比較采用單因素方差分析。計算藥物泵MRP和LRP相關(guān)系數(shù)r，進(jìn)行相關(guān)性分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RT-PCR法檢測MRP和LRP基因表達(dá) 與順鉑化療前相比，化療后患者M(jìn)RP表達(dá)顯著增高（P＜0.05），與化療前相比化療后患者LRP表達(dá)比增高（P＜0.05，見圖1）。

圖1 化療前后MRP和LRP基因表達(dá)變化*P＜0.05，與化療前相比Fig.1 The expression of MRP and LRP mRNA*P＜0.05，compared with the prior to chemotherapy

2.2 MRP與LRP基因表達(dá)相關(guān)性的研究 Logistic回歸分析顯示，2種蛋白的基因表達(dá)不具有相關(guān)性（r=0.036，P＜0.05）。

3 結(jié)論

目前對腫瘤多藥耐藥(multi-drug resistance，MDR)的研究中[6-7]，最為廣泛的是一類耐藥相關(guān)蛋白，這些蛋白的過度表達(dá)可降低細(xì)胞內(nèi)藥物濃度，導(dǎo)致應(yīng)用鉑類藥物化療失敗。MRP與LRP屬于新型耐藥相關(guān)基因[8-10]，在細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外改變藥物濃度分布比例介導(dǎo)耐藥。MRP最早于1992年由科學(xué)家Cole發(fā)現(xiàn)[11]，此后該蛋白同肺癌耐藥的相關(guān)性成為熱點研究對象。有國外文獻(xiàn)報道，該蛋白表達(dá)情況同肺癌預(yù)后情況關(guān)系密切，與生物學(xué)惡性表型有關(guān)，可以作為預(yù)后指標(biāo)。LRP缺乏MRP特有的ABC轉(zhuǎn)運蛋白的ATP結(jié)合位點[12]，引起耐藥機制沒有統(tǒng)一結(jié)論，其中一種假說是LRP具有調(diào)節(jié)核質(zhì)同囊泡的藥物轉(zhuǎn)運功能[13-14]，大量藥物存儲于囊泡中，藥物核/質(zhì)比值減少引起耐藥。本文主要搜集化療前后均有標(biāo)本的非小細(xì)胞肺癌患者13例應(yīng)用RT-PCR法檢測化療前后MRP和LRP基因表達(dá)，并用

Logistic回歸分析法分析2種蛋白基因表達(dá)相關(guān)性。結(jié)果顯示：與順鉑化療前相比，化療后患者M(jìn)RP表達(dá)比增高（P＜0.05），與順鉑化療前相比化療后患者LRP表達(dá)比增高（P＜0.05）；Logistic回歸分析顯示，2種蛋白的基因表達(dá)不具有相關(guān)性（r=0.036，P＜0.05）。雖然應(yīng)用順鉑化療后，MRP和LRP基因表達(dá)增高，但是2種蛋白的基因表達(dá)卻不具有相關(guān)性，說明作為原發(fā)耐藥的指標(biāo)，有可能作為靶點優(yōu)化臨床化療方案，改善療效。雖然有報道稱MRP與LRP具相關(guān)性，與二者同位于16號染色體短臂有關(guān)[15]，本文結(jié)論與之不同，可能同樣本數(shù)較少有關(guān)，MRP和LRP基因表達(dá)同順鉑耐藥關(guān)系的具體機制還需進(jìn)一步研究。

[1] 羅揚，馮奉儀，要潔，等.1231例非小細(xì)胞肺癌術(shù)后生存和預(yù)后分析[J].中國腫瘤臨床，2005，32（2）：982-941.

[2] 于清清，王明玉.洛鉑或順鉑聯(lián)合依托泊苷治療初治小細(xì)胞肺癌臨床療效的觀察[J].腫瘤藥學(xué)，2013，3（2）：107-110.

[3] 林曉雯，張艷華.鉑類抗腫瘤藥的進(jìn)展與臨床評價[J].中國醫(yī)院用藥評價與分析,2011，11(1)：4-6.

[4] Plaat BE,Molenaar WM,Sagrudny J,et al.The 16 p 11 breakpoint in myxoid liposar comas might affect the expression of the LRP gene on 16 p 11.2 encoding the multidrug resistance associated major vault protein[J].EurJ Clin Invest,2000,30(5):447-453.

[5] Scheffer GL,Wijingaard PL,Lzquierdo MA,et al.The drug resistance related protein LRP is the human major vault protein[J].Nat Med,1995,1(6):578-582.

[6] 揭惠，酉明巧，劉輝，等.腫瘤多藥耐藥的發(fā)生機制及逆轉(zhuǎn)策略[J].中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報，2013，31（7）：1686-1690.

[7] Bentres AM.NF－Kappa B transcription factor induces drug resistance through MDR 1 expression in cancer cells[J].Oncogene,2013,22(1):90-97．

[8] Cangir AK,Kutlay H,Akal M,et al.Prognostic value of tumor size in nonsmall cell lung cancer larger than five centimeters indiameter[J].Lung Cancer,2004,46(3):325-331.

[9] Denaro N,Nigro CL,Russi EG.The role of chemotherapy and latest emerging target therapies in anaplastic thyroid cancer[J].Onco Targets Ther.2013,9(1):1231-1241.

[10] Loe DW,Deeley RG,Cole SPC.Biology of the multidrug resistanc eassociated protein,MRP[J].Eur J Cancer,2006(32):945-957.

[11] OcBren ML,Tew KD.Glutathione and related enzymes in multidrug resistance[J].Eur J Cancer,2012(32):967-978.

[12] Lzquierdo MA,Scheffer GL,Flens MJ,et al.Major vault protein LRP related multidrug resistance[J].Eur J Cancer,2012,8(9):979-984.

[13] Rybarova S,HodorovaI,Hajdukova M,et al.Expression of MDR proteins in breast cancer and itscor relation with some clinical and pathological parameters[J].Neoplasma,2006,53(2):128-135.

[14] Paredes LA,Blanco GC,Elizondo EM,et al.Expression of Proteins Associated With Multidrug Resistanceand Resistance to Chemotherapy in Lung Cancer[J].Arch Bronc oneumol,2012,43(9):479-484.

[15] Slovak ML,Hop J,Cole PC,et al.The LRP gene encoding a major vault protein associated with drug resistance maps proximal to MRP on chromosome 16:evidance that chromosome breakage plays a key role in MRP or LRP gene amplification[J].Cancer Res,2011,55(1):4214-4219.

Clinical study of MRP and LRP mRNA expression in peple with human non-small cell lung cancer after cisplatin chemotherapy

WEN Zhi-jun
（Department of Cardiothoracic Surgery, Shengli Oilfield Central Hospital, Dongying 257034, China）

ObjectiveTo investigate the mRNA expression of the multidrug resistance associated protein and lung resistance protein in human non-small cell lung cancer tissues and their relationship with cis-platinum.Methods13 samples were collected from patients with non small cell lung cancer before and after chemotherapy, the mRNA expression of MRP and LRP were detected using RT-PCR method, correlation between two genes were studied by Logistic regression analysis.ResultsCompared with before cisplatin chemotherapy, MRP and LRP expression of patients were increased after chemotherapy(P＜0.05).Logistic regression analysis showed that there is no correlation between the two genes(r=0.036，P＜0.05).ConclusionCisplatin chemotherapy can increase the mRNA expression of MRP and LRP, and there is no correlation between the two genes.

non small-cell lung cancer;cis-platinum complexes;multidrug resistance associated protein;lung resistance protein

R 734.2

A

1005-1678(2014)02-0118-02

山東省高?？萍加媱潱↗ 11 LF 75）

溫志軍，男，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：胸外科腫瘤，E-mail：3262407372@163.com。