袁霞，柴克霞，秦雅婧，楊潔，胡月正

（1.青海大學(xué)附屬醫(yī)院血液風(fēng)濕科，青海 西寧 810001；2.溫州醫(yī)學(xué)院第二醫(yī)院骨科，浙江 溫州 325027）

醋氯芬酸對(duì)骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞增殖和基質(zhì)代謝的影響

袁霞1，柴克霞1，秦雅婧1，楊潔1，胡月正2

（1.青海大學(xué)附屬醫(yī)院血液風(fēng)濕科，青海 西寧 810001；2.溫州醫(yī)學(xué)院第二醫(yī)院骨科，浙江 溫州 325027）

目的探討醋氯芬酸對(duì)骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞增殖和基質(zhì)代謝的影響。方法選擇2011年9月～2013年9月于青海大學(xué)附屬醫(yī)院就診的65例骨關(guān)節(jié)炎患者，根據(jù)隨機(jī)分組原則分成觀察組（n＝35），采用醋氯芬酸治療；對(duì)照組（n＝30），采用布洛芬治療。比較2組患者治療后的療效差異，比較觀察組患者與對(duì)照組患者的人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的5-溴脫氧尿嘧啶核苷（5-bromodeoxyuridine，BrdU）陽(yáng)性率、蛋白多糖（proteoglycan，PG）與Ⅱ型膠原含量。結(jié)果觀察組和治療組患者治療有效率分別為74.29%、73.33%，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；觀察組患者關(guān)節(jié)活動(dòng)痛、關(guān)節(jié)壓痛、15米行走時(shí)間、日常活動(dòng)能力與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；觀察組不良反應(yīng)發(fā)生率顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；2組BrdU陽(yáng)性率之間的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，觀察組Ⅱ型膠原含量顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），觀察組PG含量顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）。結(jié)論醋氯芬酸治療骨關(guān)節(jié)炎療效佳，不良反應(yīng)發(fā)生率低，醋氯芬酸通過(guò)促進(jìn)Ⅱ型膠原分泌和減少PG生成緩解患者的臨床癥狀。

醋氯芬酸；骨關(guān)節(jié)炎；軟骨細(xì)胞；增殖；代謝

1 資料與方法

1.1 臨床資料 隨機(jī)選取2011年9月至2013年9月于青海大學(xué)附屬醫(yī)院血液風(fēng)濕科就診的65例骨關(guān)節(jié)炎患者，納入標(biāo)準(zhǔn)：符合骨關(guān)節(jié)炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］，排除感染、發(fā)熱、血液疾病、惡性腫瘤、合并類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎及其他關(guān)節(jié)炎癥性疾病患者。經(jīng)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，并與患者簽署知情同意書。隨機(jī)分為2組，觀察組35例，男12例，女23例，年齡25～77歲，平均（46.87±12.04）歲，病程10～21月，平均病程（11.89±5.14）月；對(duì)照組30例，男9例，女21例，年齡27～75歲，平均（47.01±10.72）歲，病程12～20月，平均病程（12.04±6.07）月；2組患者在性別、年齡、病程等一般情況上的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，具有可比性。

1.2 材料與方法 全部患者均停用非甾體類抗炎藥2周后進(jìn)行藥物治療，觀察組患者給予醋氯芬酸腸溶膠囊（廣州白云山光華制藥公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 H20050479）100mg，2次／d，口服，早晚餐后服用；對(duì)照組患者給予布洛芬緩釋膠囊（吉林力勝制藥公司，國(guó)藥準(zhǔn)字 H22026083）300mg，2次／d，口服，早晚餐后服用。2組患者服藥療程均為3個(gè)月。治療前即取觀察組患者與對(duì)照組患者的第1代骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞分別進(jìn)行培養(yǎng)，觀察組給予醋氯芬酸，對(duì)照組給予布洛芬，藥物溶于二甲基亞砜中，充分搖勻后配成溶液，探討不同藥物對(duì)細(xì)胞增殖與代謝的影響。主要選用的實(shí)驗(yàn)儀器與試劑：培養(yǎng)基、Ⅱ型膠原酶、Ⅱ型膠原抗體和5-溴脫氧尿嘧啶核苷（5-bromodeoxyuridine，BrdU）購(gòu)買自圣克魯斯生物公司，ELISA試劑盒購(gòu)自深圳新博盛生物公司。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 臨床指標(biāo)：記錄患者治療后膝關(guān)節(jié)活動(dòng)痛（正常0分，上下樓有癥狀、屈伸無(wú)影響為2分，上下樓有癥狀、下蹲疼痛為4分，行走疼痛為6分）、關(guān)節(jié)壓痛指數(shù)（正常0分，重壓時(shí)疼痛為2分，重度壓力疼痛為4分，輕度壓痛為6分）、15米行走時(shí)間、日?；顒?dòng)能力評(píng)分（不受限為0分，輕度受限為2分，中度受限為4分，重度受限為6分）。臨床療效評(píng)價(jià)根據(jù)美國(guó)膝關(guān)節(jié)協(xié)會(huì)評(píng)分［4］：患者癥狀、體征和紅細(xì)胞沉降率（erythrocyte sedimentation tate，ESR）的改善程度＜30%提示治療無(wú)效，改善程度30%～49%提示好轉(zhuǎn)，改善程度50%～74%提示有效，改善程度≥75%提示顯效。安全性評(píng)價(jià)：記錄藥物不良反應(yīng)情況和發(fā)生率，定期進(jìn)行肝腎功能檢查。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)：采用BrdU免疫熒光法檢測(cè)關(guān)節(jié)軟骨組織的軟骨細(xì)胞增殖能力，在熒光顯微鏡下觀察軟骨細(xì)胞的細(xì)胞核，細(xì)胞核呈綠色熒光的為BrdU陽(yáng)性，記錄5個(gè)高倍視野（×100）下BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與細(xì)胞總數(shù)，BrdU陽(yáng)性率＝BrdU陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)／細(xì)胞總數(shù)×100%。取第3代軟骨細(xì)胞，采用ELISA方法檢測(cè)軟骨細(xì)胞的蛋白多糖（proteoglycan，PG）與Ⅱ型膠原的含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，正態(tài)計(jì)量資料用“±s”表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組患者臨床療效的比較 觀察組患者治療療效情況：5例好轉(zhuǎn)，15例有效，6例顯效，總有效人數(shù)為26例，總有效率74.29%；觀察組患者治療療效情況：4例好轉(zhuǎn)，16例有效，2例顯效，總有效人數(shù)為22例，總有效率73.33%，2組患者治療有效率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。觀察組4例患者出現(xiàn)惡心嘔吐、腹痛等不良反應(yīng)，不良反應(yīng)發(fā)生率為11.43%，對(duì)照組8例患者出現(xiàn)不良反應(yīng)，不良反應(yīng)發(fā)生率為26.67%，2組不良反應(yīng)情況比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.2 2組患者臨床指標(biāo)比較 觀察組患者關(guān)節(jié)活動(dòng)痛評(píng)分、關(guān)節(jié)壓痛評(píng)分、15米行走時(shí)間、日常活動(dòng)能力評(píng)分與對(duì)照組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見(jiàn)表1）。

表1 2組患者臨床指標(biāo)比較Tab.1 Comparison of clinical indicator in two groups

2.3 2組BrdU陽(yáng)性率、PG、Ⅱ型膠原含量之間的比較 熒光顯微鏡下見(jiàn)胞核呈綠色熒光的細(xì)胞為BrdU陽(yáng)性細(xì)胞（見(jiàn)圖1），統(tǒng)計(jì)患者軟骨細(xì)胞BrdU陽(yáng)性率，2組BrdU陽(yáng)性率之間的比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，觀察組Ⅱ型膠原含量顯著高于對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)照組PG含量顯著高于觀察組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見(jiàn)表2）。

圖1 熒光顯微鏡下的軟骨細(xì)胞BrdU陽(yáng)性標(biāo)記圖（×100）Fig.1 Fluorescencemicroscope cartilage cells of BrdU positive（×100）

表2 2組BrdU陽(yáng)性率、PG、Ⅱ型膠原含量之間的比較Tab.2 Comparison of BrdU positive rate，PG and collagen typeⅡcontent in two groups

3 討論

本臨床研究表明，醋氯芬酸治療骨關(guān)節(jié)炎的療效較好，不良反應(yīng)顯著低于布洛芬治療患者（P＜0.05），是一種有效安全的治療藥物。醋氯芬酸可增強(qiáng)骨關(guān)節(jié)炎患者軟骨細(xì)胞的細(xì)胞增殖能力與促進(jìn)對(duì)Ⅱ型膠原的分泌，緩解患者關(guān)節(jié)疼痛，增加治療總有效率，同對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。布洛芬通過(guò)增強(qiáng)患者軟骨細(xì)胞增殖能力與促進(jìn)PG分泌的途徑緩解患者的關(guān)節(jié)疼痛，達(dá)到治療的目的。醋氯芬酸通過(guò)促進(jìn)Ⅱ型膠原的分泌抑制關(guān)節(jié)軟骨的退化，具有緩解關(guān)節(jié)疼痛與修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨的作用［5-7］。但是，自身抗原產(chǎn)生的免疫反應(yīng)對(duì)細(xì)胞增殖與基質(zhì)代謝的影響、免疫反應(yīng)在醋氯芬酸對(duì)軟骨細(xì)胞增殖與基質(zhì)代謝影響中的作用有待進(jìn)一步的臨床研究。陳海南等［8-11］研究表明：原發(fā)性骨關(guān)節(jié)炎不僅與職業(yè)性使用過(guò)度、肥胖、高齡等因素相關(guān)，更與自身抗原產(chǎn)生的免疫性反應(yīng)相關(guān)，醋氯芬酸在治療骨關(guān)節(jié)炎方面具有顯著的療效與不良反應(yīng)低等優(yōu)點(diǎn)，與本文結(jié)論類似。骨關(guān)節(jié)炎是一種復(fù)雜疾病，非甾體類抗炎藥可緩解患者的癥狀與體征，但是，醋氯芬酸對(duì)軟骨細(xì)胞基質(zhì)代謝的影響需要綜合多種因素進(jìn)行評(píng)價(jià)。黃瑛等［12-15］研究表明：自身抗原產(chǎn)生免疫反應(yīng)對(duì)自身組織損傷也表現(xiàn)在抑制軟骨細(xì)胞增殖及基質(zhì)代謝方面，主要病理表現(xiàn)為：T細(xì)胞活化異常后分化不同功能亞群并產(chǎn)生大量的細(xì)胞炎癥因子，造成關(guān)節(jié)滑膜炎癥性反應(yīng)，軟骨骨質(zhì)破壞，影響了關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的基質(zhì)代謝。因此，骨關(guān)節(jié)炎的免疫反應(yīng)是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，醋氯芬酸是否對(duì)軟骨細(xì)胞的增殖及基質(zhì)代謝產(chǎn)生影響有待進(jìn)一步的臨床探討。

［1］ 李路玲，鄭毅.非甾體抗炎藥對(duì)人骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)代謝的影響［J］.天津醫(yī)藥，2013，41（9）：860-864.

［2］ 歐云生，安洪，譚超，等.非甾體抗炎藥對(duì)大鼠骨關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞 IL-1β、TNF-α、IL-1α表達(dá)的影響［J］.重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，38（3）：260-265.

［3］ 冀全博，張強(qiáng)，王巖帶.小板凝血酶敏感蛋白結(jié)構(gòu)域的解聚素與金屬蛋白酶4、5在骨關(guān)節(jié)炎中作用的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)修復(fù)重建外科雜志，2013，27（9）：1080-1084.

［4］ Insall JN，Dorr LD，Scott RD，et al.Rationale of the Knee Society clinical rating system［J］.Clin Orthop Relat Res，1989（248）：13-14.

［5］ 曾玉，吳新忠.吲哚胺2，3-雙加氧酶與自身免疫性疾病［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2013，29（19）：3257-3259.

［6］ 朱芳曉，周潤(rùn)華，石宇紅，等.小白菊內(nèi)酯對(duì)兔膝骨關(guān)節(jié)炎血清IL-1β及 TNF—α的影響［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，33（10）：1382-1384.

［7］ 段成茜，高作寧.醋氯芬酸在nano-TiO2／PF6修飾碳糊電極上的電催化氧化及電分析方法［J］.藥物分析雜志，2012，32（2）：365-369.

［8］ 陳海南，董啟榕，姜偉，等.骨關(guān)節(jié)炎早期軟骨下骨三維結(jié)構(gòu)變化及二磷酸鹽的干預(yù)效應(yīng)［J］.中華創(chuàng)傷雜志，2013，29（8）：790-795.

［9］ Driban JB，Barr AE，Amin M，et al.Joint inflammation and early degeneration induced by high-force reaching are attenuated by ibuprofen in an animal model of work-related musculoskeletal disorder［J］.JBiomed Biotechnol，2011，69：12-14.

［10］ 林定齊.非甾體類抗炎藥及解熱鎮(zhèn)痛藥用藥情況分析［J］.當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2012，18（2）：132-133.

［11］ 郭鈺琪，齊冬梅，郝鈺.三七皂苷R1調(diào)節(jié)炎性T細(xì)胞亞群保護(hù)血管內(nèi)皮的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2012，28（2）：240-244.

［12］ 黃瑛，林志，李波，等.藥物誘導(dǎo)性自身免疫性疾病研究進(jìn)展［J］.中國(guó)新藥雜志，2013，22（19）：2244-2249.

［13］ 杜國(guó)輝，屈愛(ài)存，陳建英.透明質(zhì)酸對(duì)關(guān)節(jié)軟骨蛋白聚糖aggrecan的影響［J］.中國(guó)生化藥物雜志，2011，32（2）：125-127.

［14］ Prasadam I，Crawford R，Xiao Y.Aggravation of ADAMTS and matrix metalloproteinase production and role of ERK1／2 pathway in the interaction of osteoarthritic subchondral bone osteoblasts and articular cartilage chondrocytes--possible pathogenic role in osteoarthritis［J］.J Rheumatol，2012，39（3）：621-634.

［15］ Fosang AJ，Beier F.Emerging Frontiers in cartilage and chondrocyte biologe［J］.Best Pract Res Clin Rheumatol，2011，25（6）：751-766.

（編校：李璐璐）

The influence of aceclofenac to cartilage cell proliferation and substratemetabolism in osteoarthritis

YUAN Xia1，CAIKe-xia1，QIN Ya-jing1，YANG Jie1，HU Yue-zheng2

（1.Department of Rheumatism and Hematology，Affiliated Hospital of Qinghai University，Xining 810001，China；2.Department of Orthopedics，The Second Hospital ofWenzhou Medical College，Wenzhou 325027，China）

ObjectiveTo invesgate the influence of aceclofenac to cartilage cell proliferation and substratemetabolism in osteoarthritis.MethodsSelect65 cases of patientswith osteoarthritiswhowere treated in Department of Rheumatism and Hematology of Affiliated Hospital of Qinghai University from September 2011 to September 2013.Patients were divided into observation group（n＝35）and control group（n＝30）.The observation group were treated with aceclofenac，while control group were treated with ibuprofen，Compare the efficacy of patients in two group.Compare human articular cartilage cells of5-bromodeoxyuridine（BrdU）positive rate，the content of glycogen protein（PG）and collagen typeⅡ in two groups.ResultsThe effective rate of observation group and control group was 74.29%and 73.33%respectively.There was significant difference between the two groups.Compared with control group，the joints pain，joints tenderness，15 meters walking time，daily activity ability（P＜0.05）.The incidence of adverse reactions of observation group（11.43%）was significantly lower than that of control group（P＜0.05）.The difference of BrdU positive rate in two groups had no statistical significance.Ⅱ type collagen content of observation group was significantly higher than that of control group（P＜0.05）.PG of observation group was significantly lower than that of control group（P＜0.05）.ConclusionThe efficacy of aceclofenac is good and the incidence of adverse reactions is low in treatment of osteoarthritis.Aceclofenac can alleviate clinical symptoms of patients by increasing collagen typeⅡand decreasing PG.

aceclofenac；osteoarthritis；cartilage cells；proliferation；metabolic

R331.1

A

1005－1678（2014）04－0128－03

骨關(guān)節(jié)炎［1］（ostearthritis，OA）是一種累及關(guān)節(jié)為主的多系統(tǒng)性自身免疫性疾病，是常見(jiàn)的關(guān)節(jié)疾患之一，主要病理特征［2-3］是關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞凋亡、軟骨細(xì)胞外基質(zhì)減少及關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞功能異常。非甾體類抗炎藥是治療骨關(guān)節(jié)炎的常規(guī)臨床用藥，醋氯芬酸是常用的非甾體類抗炎藥，且在治療骨關(guān)節(jié)炎中具有一定效果。本研究通過(guò)對(duì)骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞的體外培養(yǎng)，探討非甾體類抗炎藥醋氯芬酸對(duì)骨關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞增殖和基質(zhì)代謝的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生計(jì)劃（2011KYB052）

袁霞，女，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：風(fēng)濕免疫病，E-mail：qianghaiyuanxia＠163.com。