吳紅紅，潘蘭，賈曉光，石明輝，庫麗夏西·馬尼，賈新岳

（1.新疆醫(yī)科大學附屬自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊100193；2．中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所新疆分所新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所，新疆 烏魯木齊 830002；3．新疆阿勒泰地區(qū)哈薩克醫(yī)醫(yī)院，新疆 阿勒泰830064）

新疆厚葉巖白菜素提取方法優(yōu)化及不同部位含量的研究

吳紅紅1，潘蘭2△，賈曉光2，石明輝2，庫麗夏西·馬尼3，賈新岳2

（1.新疆醫(yī)科大學附屬自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，新疆 烏魯木齊100193；2．中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所新疆分所新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所，新疆 烏魯木齊 830002；3．新疆阿勒泰地區(qū)哈薩克醫(yī)醫(yī)院，新疆 阿勒泰830064）

目的對新疆厚葉巖白菜素進行提取方法優(yōu)化及不同部位含量的測定，為高效提取厚葉巖白菜素提供依據。方法利用正交實驗，對醇提法的乙醇濃度、乙醇用量、提取時間、提取次數4個因素進行綜合考慮、篩選，以及對厚葉巖白菜素不同部位進行含量測定。結果優(yōu)選出最佳的乙醇提取新疆厚葉巖白菜素工藝條件為8倍量50%的乙醇，回流提取3次，每次0.5 h。厚葉巖白菜不同部位的巖白菜素差異具有統計學意義（P＜0.05）。主根和須根中巖白菜素的含量較高，達到8.65%～9.58%，而葉中巖白菜素的含量相對較低，僅為0.15%。厚葉巖白菜素嫩葉含量顯著高于老葉。結論本實驗研究對高效提取新疆厚葉巖白菜素提供了有力的技術支撐，同時為新疆厚葉巖白菜藥材質量評價奠定了理論基礎。

厚葉巖白菜素；醇提法；高效液相色譜

厚葉巖白菜[Bergenia crassifolia (L.) Fritsch]為虎耳草科、巖白菜屬多年生常綠草本[1-2]，是該屬中形體較大、花葉俱美、含藥物成分多、藥物成分含量高的種類，主要分布于新疆阿爾泰山1000～2600米的巖石縫隙及林下。該植物的根莖為哈薩克常用藥物，具止咳定喘，收斂止血之功效。用于腹瀉，痢疾，食欲不振，內外出血，肺結核咳嗽，氣管炎，跌打損傷等癥[3-5]。

厚葉巖白菜在新疆地區(qū)應用廣泛，但其提取方法較為繁瑣，提出率較低，研究還不深入[6-8]。因此，本研究通過對厚葉巖白菜的提取方法進行優(yōu)化，明確不同部位含量，為厚葉巖白菜素的研究及藥理機制、新藥的研制奠定基礎，從而深入地挖掘這一民族藥資源，對新疆少數民族藥物的整理利用具有重要的意義。

1 材料和方法

1.1 材料 厚葉巖白菜由新疆阿勒泰地區(qū)哈薩克醫(yī)醫(yī)院提供，經新疆維吾爾自治區(qū)中藥民族藥研究所賈曉光研究員鑒定為Bergenia crassifolia (L.) Fritsch，憑證標本均存放于新疆中藥民族藥研究所標本室。

多用粉碎機（9 FZ-25，四川簡陽市大地機械廠）；數顯恒溫水浴鍋（HH-S 2，金壇市醫(yī)療儀器廠）；電子天平（FA 1104 N,上海民橋精密科學儀器有限公司）；三用紫外儀（ZF-2 C型，上海市安亭電子儀器廠）。Hypersil BDS色譜柱(5 μm；4.6 mm×200 mm),波長275 nm，流動相:甲醇∶水=25∶75，流速1.0 mL/min。

1.2 試驗方法

1.2.1 厚葉巖白菜素含量測定及標準曲線的繪制 精確稱取對照品厚葉巖白菜素3.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并定容至刻度，得到60 ug/mL。精確量取上述對照品溶液1.5 mL、2.0 mL、3.0 mL、4.0 mL、5.0 mL分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。以甲醇為空白對照，在275 nm波長處測定吸收度。以縱坐標作為濃度，橫坐標為峰面積制定巖白菜素標準曲線，回歸方程為y=10-7x-0.0053（r=0.96055），結果表明厚葉巖白菜素在0.41～2.05 μg呈良好線性關系。

1.2.2 供試樣品溶液的制備 取厚葉巖白菜粉末9份，每份5.0 g，分別按照正交試驗設計條件進行提取，合并提取液，用蒸餾水定容到10 mL，轉移至大孔吸附樹脂柱中，靜止30 min后用300 mL去離子水洗脫至流出液無色，再用20%乙醇洗脫，取洗脫液0.1 mL置10 mL容量瓶中稀釋搖勻，并定容，于波長275 nm處測定吸收度，計算出巖白菜素的含量。

1.2.3 正交設計 采用L 9(34)進行正交設計，以厚葉巖白菜素含量作為指標，對乙醇濃度、乙醇用量、提取時間、提取次數4 個因素進行實驗，優(yōu)化厚葉巖白菜素的提取工藝。

2 結果與分析

2.1 厚葉巖白菜醇提工藝的優(yōu)化 通過方差分析可以得知，提取次數對提取厚葉巖白菜素濃度的影響差異較顯著，乙醇濃度、用量及提取時間影響不顯著。結合直觀分析結果，試驗編號6厚葉巖白菜素含量最高為13.79%，即以厚葉巖白菜素較佳提取工藝為：A2 B3 C1 D 3，即8倍量50%的乙醇，回流提取3次，每次 0.5 h（見表1、表2）。

表1 正交設計因素水平表Tab.1 Orthogonal design factors table

表2 厚葉巖白菜素正交試驗結果Tab.2 Orthogonal test results of bergenia crassifolia pigment

2.2 厚葉巖白菜不同部位巖白菜素含量的比較

2.2.1 厚葉巖白菜老葉和嫩葉巖白菜素含量的比較 通過厚葉巖白菜老葉和嫩葉巖白菜素色譜圖比較分析，相同時間內嫩葉巖白菜素峰面積顯著高于老葉巖白菜素峰面積，即厚葉巖白菜嫩葉巖白菜素含量顯著高于老葉（見圖1）。

圖1 栽培巖白菜老葉與嫩葉的比較色譜圖Fig.1 Comparison chromatograph chart of the old leaves and delicate leaf of Bergenia crassifolia

2.2.2 厚葉巖白菜不同部位巖白菜素含量比較 厚葉巖白菜不同部位中主根和須根巖白菜素的含量較高，達到8.65%～9.58%，而葉中巖白菜素的含量相對較低，僅為0.15%（見表3）。

表3 厚葉巖白菜不同部位巖白菜素含量比較(%)Tab.3 Content comparison of the different parts of Bergenia crassifolia(%)

3 討論

1997年龔建夫等用濃鹽酸調pH，70℃水浴加熱、抽濾等方法，得巖白菜素粗晶，粗晶于乙醇中，加活性炭、煮沸、過濾，放置，水洗烘干，即得巖白菜素成品[9]。1998年賈曉斌等采用正交試驗法水提巖白菜素的復方制劑[10]，但該種方法步驟多，時間長，提取率低，本實驗優(yōu)選出最佳的乙醇提取新疆厚葉巖白菜素工藝條件為8倍量50%的乙醇，回流提取3次，每次0.5 h。該方法具有操作簡單、使用方便、價格便宜、重現性好等特點，能夠有效的進行新疆厚葉巖白菜素的提取。通過優(yōu)化工藝厚葉巖白菜素的提取率由原來的4.38%[11-12]提高至11.6%。該方法值得進一步開展研究，探索實現厚葉巖白菜素提取的產業(yè)化。

厚葉巖白菜中的不同部位巖白菜素存在明顯差異[13-14]。主根和須根中巖白菜素的含量較高，達到8.65～9.58%，而葉中巖白菜素的含量相對較低，僅為0.15%。厚葉巖白菜素嫩葉含量明顯高于老葉。厚葉巖白菜雖在新疆廣泛應用，但并未載入《中國藥典》，哈薩克族長期應使用的結果證明，該藥療效顯著，是值得開發(fā)的品種，但該藥的野生資源僅分布于我國的新疆阿勒泰地區(qū)，由于近年來需求量加大，該資源逐漸貧乏。該藥野生資源少，且以根入藥資源破壞大，能否以其余部位如葉或地上部分入藥是該藥今后值得研究的方向[15]。本實驗研究對新疆厚葉巖白菜藥材質量評價奠定了理論基礎。

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Studies on the optimization of extraction method and content of different parts in XinJiang Bergenia crassifolia (L.)

WU Hong-hong1, PAN Lan2△, JIA Xiao-guang2, SHI Ming-hui2, Kulixiaxi Mani3, JIA Xin-yue2
(1. Hospital of traditional Chinese medicine of xinjiang medical university autonomous region, Urumqi 830002, China; 2. Xinjiang Institute of Chinese Materia Madica and Ethnodrug, Urumqi 830002, China; 3. Xinjiang Altay Prefecture Kazakh Medical Hospital, Altay 830064, China)

ObjectiveTo extraction method optimization and the content of the different parts of Xinjiang Bergenia crassifolia (L.), provide the basis for ef fi cient extraction of Bergenia crassifolia pigment。MethodUsing the orthogonal experiment, the alcohol extraction process of ethanol concentration, dosage of ethanol, extraction time, extraction times, as well as to Bergenia crassifolia pigment content of the different part。ResultsOf optimization, the best ethanol extract of xinjiang Bergenia crassifolia pigment process conditions is 8 times the amount of 50% ethanol, extracting 3 times, each time 0.5 h. In Bergenia crassifolia pigment content of different parts exists obvious difference. Bergenia crassifolia pigment content of Taproot and fi brous root is higher, at 8.65% to 9.58%, while Bergenia crassifolia pigment content of the leaves is relatively low, at just 0.15%. Bergenia crassifolia pigment content of leaves signi fi cantly higher than the old leaves。ConclusionThis experimental study on ef fi cient extraction of xinjiang Bergenia crassifolia pigment to provide strong technical support and theoretical basis.

bergenia crassifolia pigment; alcohol extraction process; high performance liquid chromatography

R 914.1

A

1005-1678(2014)01-0074-02

新疆維吾爾自治區(qū)自然科學基金（2013211A112）

吳紅紅，女，副主任醫(yī)師，研究方向：慢阻肺的治療研究，E-mail: smwhh@163.com；潘蘭，通信作者，女，助理研究員，E-mail: panlan_sc@126.com。