頓寶生，范小璇，強(qiáng)選萍，逯 莉，馮文慧

(1.陜西國(guó)際商貿(mào)學(xué)院，陜西 咸陽(yáng) 712046；2. 陜西中醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，陜西 咸陽(yáng) 712046)

缺血性腦血管病是嚴(yán)重危害人類健康的常見(jiàn)病、多發(fā)病。據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)，在急性腦血管病中，缺血性腦血管病占總數(shù)的50%～70%[1]，而缺血性中風(fēng)占全部急性腦血管疾病患者的86%[2]。因其具有高致殘率、高病死率的特點(diǎn)，給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。微循環(huán)障礙是缺血性腦血管病發(fā)生后主要的病理變化，因此，改善腦組織微循環(huán)是治療缺血性中風(fēng)的主要途徑。二根龍蛭湯是筆者通過(guò)長(zhǎng)期臨床工作總結(jié)出的經(jīng)驗(yàn)方，治療腦缺血性疾病效果良好，本實(shí)驗(yàn)旨在探討其作用機(jī)制，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)資料

1.1動(dòng)物及分組 選用SD成年大鼠40只，體質(zhì)量(200±50)g，雌雄各半，由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)SCXK 2012-003。將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、對(duì)照組和治療組，每組10只。

1.2藥物 吡拉西坦片，宜昌人福藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；二根龍蛭湯，組方：葛根、白茅根、地龍、水蛭、丹參、紅花、川芎，水煎取汁，由陜西國(guó)際商貿(mào)學(xué)院醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3造模 參考文獻(xiàn)[3-4]制造缺血再灌注模型。所有動(dòng)物購(gòu)回后適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，術(shù)前12 h禁飲食，自由飲水。稱質(zhì)量后用10%水合氯醛(3.5 mL/kg) 腹腔注射麻醉大鼠，麻醉成功后將大鼠固定在鼠板上，頸部剃毛，皮膚消毒后，取正中切口，仔細(xì)分離右側(cè)頸外動(dòng)脈、頸內(nèi)動(dòng)脈，用絲線結(jié)扎頸外動(dòng)脈，頸內(nèi)動(dòng)脈遠(yuǎn)端放置動(dòng)脈夾；將頭皮針端口打磨光滑，把頭端涂油石蠟油的尼龍漁線從頸外動(dòng)脈靠近分叉處導(dǎo)入血管內(nèi)，去掉動(dòng)脈夾，在直視下緩慢推進(jìn)漁線入顱，遇到阻力后停止，入顱約1.8 cm；將頸內(nèi)動(dòng)脈連同漁線一起結(jié)扎，缺血30 min，將造模成功(成功標(biāo)準(zhǔn)：蘇醒后出現(xiàn)左側(cè)前肢屈曲、內(nèi)收、左側(cè)轉(zhuǎn)圈、或向右側(cè)傾倒)大鼠放開(kāi)頸外動(dòng)脈結(jié)扎線，將留在外面的線拔除1 cm，使大腦中動(dòng)脈再通。假手術(shù)組只切開(kāi)頸部皮膚、暴露血管后縫合皮膚。

1.4治療方法 所有動(dòng)物術(shù)后給予紅霉素軟膏涂抹傷口，假手術(shù)和模型組術(shù)后6 h開(kāi)始給予進(jìn)食進(jìn)水。對(duì)照組術(shù)后6 h在進(jìn)食進(jìn)水的基礎(chǔ)上予吡拉西坦片，按人與實(shí)驗(yàn)用鼠比為1:10進(jìn)行換算后以3.6 g/(kg·d)量灌胃；治療組術(shù)后6 h進(jìn)食進(jìn)水，給予二根龍蛭湯，根據(jù)體質(zhì)量按人正常用量的10倍濃縮煎劑灌胃治療。

1.5Morris水迷宮實(shí)驗(yàn) 大鼠購(gòu)回后第3 d開(kāi)始進(jìn)行水迷宮訓(xùn)練，連續(xù)3 d；術(shù)后第4天再次進(jìn)行訓(xùn)練，3 d。術(shù)后第7天進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn)。放置一直徑1.3 m、深0.5 m的圓形水池，池壁為白色，標(biāo)明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ 4個(gè)象限，在任何一象限內(nèi)放置一個(gè)直徑10 cm、高25 cm的安全平臺(tái)，水面沒(méi)過(guò)平臺(tái)5 cm，水中注入適量奶粉，以目視看不見(jiàn)平臺(tái)為宜，水溫控制在25 ℃左右。記錄大鼠尋找到安全平臺(tái)時(shí)間，即逃避潛伏時(shí)間；再撤去平臺(tái)，選第Ⅱ象限入水點(diǎn)將大鼠面向池壁放入水中，記錄90 s內(nèi)大鼠跨越原平臺(tái)次數(shù)。

1.6指標(biāo)測(cè)定 模型動(dòng)物經(jīng)治療7 d后將動(dòng)物處死取腦。10%水合氯醛腹腔注射麻醉后經(jīng)左心室穿刺，生理鹽水沖洗，見(jiàn)肝臟顏色發(fā)白后在冰盤上迅速斷頭取腦，取右側(cè)大腦，去除小腦和延髓部分，距額極2.5 mm向后切去10 mm腦組織，稱質(zhì)量后移入玻璃勻漿管中，按1∶10(W/V)比例加入9倍體積的預(yù)冷生理鹽水，冰盤上勻漿，充分研碎，組織勻漿后4 000 r/min離心10 min后提取上清液待測(cè)。采用酶聯(lián)免疫法按VEGF試劑說(shuō)明書(shū)配置洗滌液、標(biāo)準(zhǔn)品、酶結(jié)合物工作液等，加樣后采用全自動(dòng)酶標(biāo)儀測(cè)定。

2 結(jié) 果

本研究死亡大鼠共4只，其中模型組2只，治療組和對(duì)照組各1只。水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1。治療后7 d，假手術(shù)組 VEGF含量(51.50± 5.17)ng/L，模型組(79.63± 8.42)ng/L，治療組(157.89± 10.49)ng/L，對(duì)照組(97.36± 41.14)ng/L。治療組大鼠腦組織VEGF含量較模型組明顯升高(t=3.84,P<0.05)，較對(duì)照組亦升高明顯(t=2.89,P<0.05)。

3 討 論

VEGF是一種特異性作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞的內(nèi)皮生長(zhǎng)因子,有促進(jìn)血管內(nèi)皮增生、增強(qiáng)血管通透性加速新血管形成的作用[5]。研究表明，在腦梗死發(fā)生后VEGF的表達(dá)會(huì)上調(diào)，促進(jìn)腦部缺血半暗帶區(qū)新血管形成，達(dá)到縮小梗死體積、減輕缺血損害的目的[6-7]。 VEGF參與了腦缺血后腦組織的病理修復(fù)過(guò)程[8]，在缺血性腦血管病中有促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、促新生血管形成保護(hù)神經(jīng)親神經(jīng)特性及增加腦血管通透性等生物學(xué)作用[9]。本項(xiàng)研究表明，二根龍蛭湯能改善腦缺血再灌注損傷后模型大鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)中的學(xué)習(xí)記憶能力，提高大鼠腦組織中VEGF的含量，提示二根龍蛭湯改善腦缺血再灌注模型大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力可能與該方能提高腦組織中VEGF含量，改善腦組織微循環(huán)狀況有關(guān)。

表1 治療后7 d水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較

注：①與模型組比較，P<0.05；②與對(duì)照組比較，P<0.05；③與對(duì)照組比較，P>0.05。

二根龍蛭湯是由葛根、白茅根、地龍、水蛭、丹參、紅花、川芎7味中藥組成。水蛭地龍共為君藥，水蛭咸、苦、平而歸肝經(jīng)，破血、逐瘀、通經(jīng)；地龍咸、寒歸肝、脾、膀胱經(jīng)，息風(fēng)通絡(luò)、利水。二藥共用使瘀血消散，閉阻之經(jīng)絡(luò)暢通。臣以丹參、紅花、川芎，丹參苦、寒，歸心、肝經(jīng)，具有活血調(diào)經(jīng)、涼血安神之功效；紅花辛溫，歸心、肝經(jīng)，具有活血通經(jīng)、祛瘀止痛之功效。二者相須為用，功專于化瘀，再加活血行氣、祛風(fēng)止痛之川芎，能上行頭目，旁通絡(luò)脈，使瘀血去、經(jīng)脈通，頭痛止，意識(shí)清。佐以葛根，甘辛涼，解肌退熱，擴(kuò)管通脈。使藥白茅根甘、寒，涼血止血，清熱利水，使熱散而血止，濕滲則水利。全方共奏化瘀通絡(luò)利水之效。

研究發(fā)現(xiàn)葛根素能明顯改善急性血瘀模型大鼠的血流變學(xué)作用，且高劑量組對(duì)全血黏度低切值的降低作用明顯強(qiáng)于低劑量組，并呈一定量效關(guān)系[10]。丹參素可以改善脂多糖引起的小鼠的腦微循環(huán)障礙, 該作用可能與其抑制粒細(xì)胞黏附分子CD11b和CD18、大腦皮質(zhì)血管內(nèi)皮黏附分子ICAM-1和E-selectin的表達(dá), 抑制血漿炎性因子TNF-A產(chǎn)生有關(guān)[11]。紅花黃色素能明顯提升缺血再灌注后局部腦血流量，降低腦組織的含水量，縮小腦梗死面積，減輕缺血所致的組織病理學(xué)變化，可通過(guò)抗氧化保護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)免受大鼠腦缺血再灌注的損傷[12]。川芎具有抗凝抑制血小板聚集，增加纖溶活性，降低血黏度，抑制腦缺血時(shí)體內(nèi)血小板激活，解除血管平滑肌痙攣，擴(kuò)張血管改善微循環(huán)的作用；川芎提取物對(duì)鹽酸腎上腺素造成的小鼠耳郭微循環(huán)障礙具有明顯的改善作用，可明顯增加微循環(huán)障礙小鼠血流速度，擴(kuò)大微循環(huán)細(xì)小血管管徑，改善毛細(xì)血管開(kāi)放數(shù)量[13]。

總之，二根龍蛭湯能改善腦缺血再灌注損傷模型大鼠學(xué)習(xí)記憶功能，這一作用可能是通過(guò)提高腦組織內(nèi)VEGF含量，從而改善腦組織微循環(huán)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 粟秀初. 現(xiàn)代腦血管病學(xué)[M]. 北京:人民軍醫(yī)出版社,2003:117

[2] 馬鐵柱. 萬(wàn)琪.腦梗死患者血漿炎癥因子、纖溶活性的變化及對(duì)神經(jīng)功能的影響[J]. 中國(guó)臨床康復(fù),2003,7(13):1875-1876

[3] 張榮媛，張宏偉，尚愛(ài)加. 大鼠大腦中動(dòng)脈缺血再灌注模型制備及行為學(xué)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)的改進(jìn)[J]. 軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào),2008,88(1):211-247

[4] 包新杰，趙浩，趙英杰，等. 線栓法插線深度對(duì)大鼠腦梗死模型制備的影響[J]. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào)，2011,19(3)：233-236

[5] 齊寶芳，邱幸凡，李娜. 辛味化瘀通絡(luò)治法對(duì)腦梗死大鼠腦組織VEGF表達(dá)的影響[J]. 中國(guó)中醫(yī)急癥，2011,20(11)：1785-1786

[6] 黃仕雄，廖小平，鄭雅文. 急性腦梗死患者血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子動(dòng)態(tài)變化的臨床研究[J]. 中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué),2004,4(2):192-193

[7] 褚曉凡,饒明俐,董家政,等. 局灶腦缺血時(shí)堿性成纖維生長(zhǎng)因子和內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)及其關(guān)系[J]. 中國(guó)臨床康復(fù),2003,7(28):3793-3795

[8] 陳懿，王國(guó)佐，葛金文. 腦泰方提取物對(duì)局灶性腦缺血大鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)的影響[J]. 中華中醫(yī)藥雜志，2009,24(2):205

[9] Chen X，Katakowski M,Li Y. Human bone marrow stromal cell cultures conditioned by traumatic brain tissue extracts: growth factor production[J]. J Neurosci Res,2002,69(5):687

[10] 陳玲玲. 葛根素作用研究進(jìn)展[J]. 實(shí)用中醫(yī)藥雜志，2013,29(2)：140-142

[11] 李玉娟，韓冬，徐想順，等. 丹參素對(duì)脂多糖引起的小鼠微循環(huán)障礙的改善作用[C]. 第十次中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合微循環(huán)學(xué)術(shù)會(huì)議論文總覽，2010:62-63

[12] 陳夢(mèng)，趙丕文，孫艷玲，等. 紅花及其主要成分的藥理作用研究進(jìn)展[J]. 環(huán)球中醫(yī)藥，2012,5(7)：556-560

[13] 唐麗燕，李利民，黃利，等. 川芎提取物對(duì)大鼠主動(dòng)脈環(huán)及小鼠微循環(huán)障礙的影響研究[J]. 中藥藥理與臨床，2013,29(1)：105-107