寧 芳 粟明麗 鄧梅英

桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院輸血科，廣西桂林 541001

不規(guī)則抗體是指不符合ABO血型系統(tǒng)Landstemer法則的血型抗體，即抗-A、抗-B和抗-AB以外的血型抗體，此抗體常因輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生，多為IgG抗體，是引起免疫性輸血反應(yīng)、新生兒溶血病、血型鑒定困難及疑難配血（型）等的主要原因之一。因此，輸血前不規(guī)則抗體篩查和鑒定可減少因血型不合引起的輸血反應(yīng)，確保安全用血。特別對于患有特殊病種如：腫瘤、肝病、新生兒以及有妊娠史、輸血史的患者更為重要。在交叉配血前進(jìn)行抗體的篩查及抗體性質(zhì)的鑒定，可為臨床輸血安全，預(yù)防新生兒溶血病的發(fā)生提供有力的保障，降低輸血反應(yīng)發(fā)生的風(fēng)險?，F(xiàn)將桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院（以下簡稱“我院”）輸血科進(jìn)行的不規(guī)則抗體篩查和鑒定情況報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

2010年1月～2013年12月我院各臨床科室輸血患者不規(guī)則抗體篩查共計29 208例，其中男11 932例（40.85%），女 17 276例（59.15%）；年齡 1 d～98歲，平均（42.5±2.3）歲。

1.2 主要試劑與儀器

微柱凝膠Coomns檢測卡、專用標(biāo)本離心機(jī)和孵育器（西班牙Daina公司）；篩選細(xì)胞、譜細(xì)胞（上海血液生物）；KA-2200型血型血清學(xué)多用離心機(jī)（日本久保田）。篩選細(xì)胞包括以下紅細(xì)胞血型系統(tǒng)的常見抗原：Rh、MNSs、P、Lewis、Kell、Duffy、Kidd 等。 檢測試劑均在有效期內(nèi)并嚴(yán)格按照試劑及儀器說明書操作使用。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本要求及處理 輸血前采集患者靜脈血2 mL，用EDTA抗凝在室溫下以1900r/min離心10min，分離血漿。

1.3.2 微柱凝膠技術(shù) 分別向微柱孔內(nèi)加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號0.8%～1.0%的抗體篩查細(xì)胞各 50 μL，并向微柱孔內(nèi)加入25 μL血漿，將卡放入專用孵育器內(nèi)孵育15 min后，置專用離心機(jī)內(nèi)離心9 min。

1.3.3 結(jié)果判定 紅細(xì)胞與相應(yīng)抗體發(fā)生凝集，不能通過凝膠的縫隙，被擋在微柱上端者，試驗結(jié)果為陽性；紅細(xì)胞未與相應(yīng)的抗體發(fā)生凝集，紅細(xì)胞通過凝膠的縫隙到達(dá)微柱底部，試驗結(jié)果為陰性。

1.3.4 抗體鑒定 用1～10號譜細(xì)胞對陽性結(jié)果進(jìn)行抗體特異性鑒定。

2 結(jié)果

2.1 待測樣本不規(guī)則抗體陽性檢出率

在29 208例輸血患者的不規(guī)則抗體篩查中，共檢出不規(guī)則抗體90例，陽性率為0.31%。

2.2 不規(guī)則抗體特異性鑒定結(jié)果

90例不規(guī)則抗體陽性標(biāo)本中，檢出同種抗體71例，其中抗-D 2例（2.22%），抗-E 19例（21.11%），抗-Ec 10 例（11.11%），抗-c 3 例（3.33%），抗-Mur 11 例（12.22%），抗-M 7 例（7.78%），抗-N 2 例（2.22%），抗-s 1例（1.11%），抗-Lea 8例（8.89%），抗-Leb 2例（2.22%），抗-JKa 1 例（1.11%），抗-JKb 2 例（2.22%），抗-P1 2例（2.22%），抗-Dia 1例（1.11%）；冷抗體 7例（7.78%）；自身抗體 12例（13.33%）。

2.3 各紅細(xì)胞血型系統(tǒng)中不規(guī)則抗體分布情況

各紅細(xì)胞血型系統(tǒng)中不規(guī)則抗體的發(fā)生分別為Rh系統(tǒng) 34例（47.89%）、MNSs系統(tǒng) 21例（29.58%）、Lewis系統(tǒng) 10例（14.08%）、Kidd系統(tǒng) 3例（4.23%）、P系統(tǒng) 2例（2.82%），Diego系統(tǒng) 1例（1.41%）。 其中，以Rh系統(tǒng)所占比例最高（47.89%）。

2.4 Rh血型系統(tǒng)中不規(guī)則抗體的分布情況

Rh血型系統(tǒng)中檢出的不規(guī)則抗體按照所占比例從高到低排列依次為：抗-E 19例（55.89%）＞抗-Ec 10例（29.41%）＞抗-c 3例（8.83%）＞抗-D 2例（5.88%）。

2.5 不規(guī)則抗體在不同性別所占比例和發(fā)生頻率

90例不規(guī)則抗體陽性標(biāo)本中，女56例（62.22%），發(fā)生頻率為0.32%；男34例（37.78%），發(fā)生頻率為0.28%。

3 討論

隨著輸血檢測技術(shù)的發(fā)展，因為血型不合而引起的溶血反應(yīng)比較少見，而血型不規(guī)則抗體引起溶血性輸血反應(yīng)成為主要原因。近年來，血型不規(guī)則抗體的篩查越來越多地應(yīng)用于臨床輸血，尤其是孕婦、多次輸血患者、自身免疫性疾病患者、腫瘤患者、嚴(yán)重消耗性疾病患者等均為血型不規(guī)則抗體的高危攜帶者，應(yīng)作為重點篩查對象，保障輸血的安全性和有效性。不規(guī)則抗體產(chǎn)生的數(shù)量和質(zhì)量變化與抗原、B細(xì)胞、T細(xì)胞及附屬細(xì)胞等多種因素密切相關(guān)。當(dāng)機(jī)體受到抗原刺激后（大部分是在T細(xì)胞的輔助作用下），B細(xì)胞增殖并分化成熟為記憶細(xì)胞或漿細(xì)胞。記憶細(xì)胞只在其細(xì)胞膜上表達(dá)抗體，當(dāng)再次受到同一抗原刺激后，則可快速引發(fā)免疫反應(yīng)。例如在輸血免疫時，尤其是多次輸血，紅細(xì)胞血型系統(tǒng)的抗原（多是少見抗原）可刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，當(dāng)再次輸血時，由于組織相容性復(fù)合體MHCⅠ和MHCⅡ分子通過調(diào)節(jié)T細(xì)胞的反應(yīng)，調(diào)控機(jī)體抗體反應(yīng)，同時還在神經(jīng)內(nèi)分泌作用、B細(xì)胞免疫耐受、細(xì)胞因子等綜合因素的作用下，在諸如多發(fā)性骨髓瘤、腫瘤、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、肺結(jié)核、肝硬化、自身免疫性疾病、嚴(yán)重消耗性疾病等疾患中，血清中的IgM和IgG類抗體會增高。在進(jìn)行臨床輸血治療時應(yīng)進(jìn)行血型不規(guī)則抗體篩查，對于篩查陽性者應(yīng)并進(jìn)一步明確不規(guī)則抗體的性質(zhì)，以最大程度減少輸血并發(fā)癥的發(fā)生[1]。

不規(guī)則抗體篩查其目的是確保輸血的安全。選用靈敏度高、特異性好、結(jié)果準(zhǔn)確的方法進(jìn)行輸血前常規(guī)的抗體檢測，可發(fā)現(xiàn)具有臨床意義的不規(guī)則抗體，對保證臨床輸血安全有著極為重要的意義。檢測紅細(xì)胞血型不規(guī)則抗體的方法很多，以往通常使用間接抗人球蛋白實驗篩查抗體，是為了解決部分抗體的劑量效應(yīng)[2]而采用的，此實驗耗時耗人工不利于常規(guī)檢測，近年來開展的微柱凝膠技術(shù)解決了上述問題，微柱凝膠技術(shù)是在傳統(tǒng)的抗人球蛋白試驗反復(fù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的，克服了傳統(tǒng)試管液體介質(zhì)Coombs試驗需多次洗滌等繁瑣、費時的缺點，其基本原理是利用微柱凝膠的微孔過濾作用及免疫化學(xué)抗原抗體特異性反應(yīng)，紅細(xì)胞若沒有被致敏或沒有遇到相應(yīng)的紅細(xì)胞抗體，則在離心過程中會直接離心到凝膠底層，表示不存在致敏紅細(xì)胞和相應(yīng)抗體；若有特異性的抗體與紅細(xì)胞結(jié)合，對于IgM類抗體，則直接形成可見的復(fù)合物，對于IgG類抗體則此復(fù)合物再與多特異的抗球蛋白結(jié)合形成可見的復(fù)合物，并被阻隔在凝膠層頂部，即表示存在致敏紅細(xì)胞和相應(yīng)抗體[3]，具有標(biāo)準(zhǔn)化程度高、重復(fù)性強、試驗結(jié)果明確可靠、標(biāo)本用量少、保存時間長等優(yōu)點[4]，不失為輸血前血型不規(guī)則抗體篩查的較好方法，本研究采用這一方法對29 208例輸血患者進(jìn)行不規(guī)則抗體檢測，檢出陽性抗體90例，不規(guī)則抗體陽性檢出率為0.31%，與相關(guān)文獻(xiàn)報道相符[5]。當(dāng)不規(guī)則抗體篩查陽性時，必須進(jìn)一步做抗體鑒定，確定其特異性后，選擇輸注無相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞，才能確保患者的輸血安全。

實驗結(jié)果顯示，檢測出的不規(guī)則抗體大多數(shù)屬于Rh血型系統(tǒng)，占陽性抗體的 37.77%（34/90），臨床輸血中Rh血型系統(tǒng)的意義僅次于ABO血型系統(tǒng)。雖然Rh血型系統(tǒng)5種抗原的免疫性強弱依次為 D＞E＞C＞c＞e[6]，但本次實驗檢出抗-D抗體比例不高，陽性者僅2例，而抗-E抗體陽性為 19例，其陽性比例遠(yuǎn)高于抗-D抗體，有文獻(xiàn)報道臨床輸血產(chǎn)生抗-E抗體的概率要比抗-D高2.5倍[7]，本實驗也呈現(xiàn)與此相符的結(jié)果，考慮其原因可能：目前各家醫(yī)院對輸血患者都開展了 Rh（D）抗原的檢測，對 Rh（D）陰性患者進(jìn)行了同型輸血，故臨床上產(chǎn)生抗-D抗體的概率及檢出率均降低，而Rh（E）抗原尚未列入常規(guī)檢查中，E抗原陰性患者的輸血則為隨機(jī)性，并未進(jìn)行配合性輸血，致使Rh（E）陰性患者通過輸血接受E抗原刺激后產(chǎn)生抗-E抗體的概率增多，臨床上檢出率也就相應(yīng)的增高，基于這一因素我國人群中Rh（E）抗原陰性頻率高于Rh（D）抗原，而E抗原是Rh血型系統(tǒng)中除D抗原之外最強的抗原之一，輸血患者中的Rh（E）抗原陰性的存在，將可能成為引起輸血不良反應(yīng)的一個隱患[8]。臨床上凡是以IgG性質(zhì)出現(xiàn)的不規(guī)則抗體，理論上都可以引起新生兒溶血病，對有輸血史和妊娠史的孕婦尤為重要，若檢出不規(guī)則抗體，應(yīng)及時作相應(yīng)的預(yù)防和治療，可避免新生兒溶血病和輸血不良反應(yīng)的發(fā)生。此次實驗也鑒定出MNSs血型系統(tǒng)不規(guī)則抗體21例，Lewis系統(tǒng)不規(guī)則抗體10例，分別占抗體陽性的29.58%（21/90）和 14.08%（10/90），據(jù)文獻(xiàn)資料提示 MNSs系統(tǒng)的復(fù)雜性僅次于Rh系統(tǒng)[9]，抗M及抗N抗體多數(shù)以IgM形式存在，其反應(yīng)溫度為4～22℃，因而對于輸血而言，只有在37℃或抗球蛋白試驗陽性時，該抗體才具臨床意義[10]，除了抗M及抗N抗體外，抗Mur抗體也可引起交叉配血困難和溶血性輸血反應(yīng)發(fā)生[11]。篩查中檢出Lewis系統(tǒng)為抗-Lea抗體8例，抗-Leb 2例。Lewis血型抗體以IgM類為主，在37℃抗球蛋白介質(zhì)中有反應(yīng)，可以結(jié)合補體導(dǎo)致體內(nèi)溶血的發(fā)生，此抗體的檢出具有臨床意義。由于Lewis血型系統(tǒng)的抗體的效價及親和力較低，在日常工作中容易漏檢[12]，當(dāng)檢測結(jié)果出現(xiàn)弱陽性或可疑情況時，應(yīng)高度注意是否有此類抗體的存在，最好重復(fù)試驗或改用抗球蛋白試驗等其他方法進(jìn)一步證實，以免漏檢。

本次抗體篩查檢出非特異性自身抗體陽性12例，占陽性抗體的13.33%，此類情況以自身免疫性疾病患者、惡性血液病和惡性腫瘤患者居多，其次為感染性疾病患者。自身抗體陽性多見于自身免疫性溶血性貧血、特發(fā)性血小板減少性紫癜等疾病，大部分為溫抗體，在本實驗中常出現(xiàn)多凝集現(xiàn)象，造成交叉配血困難。當(dāng)患者存在較強的溫自身抗體時，需鑒別是否同時存在同種抗體，在37℃體內(nèi)由于自身抗體的作用，使自身紅細(xì)胞上的所有抗原位點都可封閉而掩蓋同種抗體，有可能引發(fā)嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)發(fā)生[13]。此時應(yīng)建議臨床醫(yī)師盡量不采用輸血治療，先疾病治療，待患者抗體效價降低或消失后再輸血。

此次研究發(fā)現(xiàn)，90例抗體陽性患者中，男性患者34例，女性患者 56例，男性陽性檢出率 0.28%（34/11 932），女性陽性檢出率 0.32%（56/17 276），與文獻(xiàn)報道相近[14]，提示女性產(chǎn)生不規(guī)則抗體的概率高于男性。這可能與女性在妊娠或流產(chǎn)等生理或非生理的因素影響下，機(jī)體受到免疫刺激有關(guān)，且同時存在著輸血和妊娠雙重免疫機(jī)會，所以女性的不規(guī)則抗體檢出率高于男性患者[15]。

從29 208例次輸血患者中篩查出的90例抗體陽性患者，均采用Diagnostic Coomns檢測卡進(jìn)行抗體鑒定和交叉配血，輸血時選擇了各自對應(yīng)抗原陰性的血液制品給予輸注，患者在輸血過程中和輸血后均未發(fā)生不良反應(yīng)，達(dá)到了安全輸血的療效。

綜上所述，在輸血前對輸血患者進(jìn)行不規(guī)則抗體篩查，可及時發(fā)現(xiàn)患者體內(nèi)存在具有臨床意義的不規(guī)則抗體，特別對女性患者尤為重要。抗體篩查對保證輸血安全，避免輸血反應(yīng)的發(fā)生起著非常重要的作用。

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