郭家娟 張 爽 李亦男 黃永生

(長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130021)

黃永生教授在多年的臨床診治過程中，發(fā)現(xiàn)非常多的患者存在頑固性的足涼或手足涼的癥狀，這些患者通常會(huì)在不同年齡段規(guī)律性出現(xiàn)相似的病癥〔1，2〕，針對(duì)這種證候的規(guī)律性，同時(shí)基于前人伏邪理論及《靈樞·天年》的理論假說〔3〕，創(chuàng)立先天伏寒病因?qū)W說，總結(jié)出先天伏寒證的病因病機(jī)及癥候特點(diǎn)，提出診治方案，組方用藥應(yīng)用于臨床，取得滿意的療效。以此為基礎(chǔ)，本課題組前期已完成“973計(jì)劃中醫(yī)伏邪病因?qū)W說的整理與創(chuàng)新研究”，初步規(guī)范了先天伏寒證的概念和診療，并證實(shí)臨床辨證時(shí)如果能夠針對(duì)先天伏寒病因特點(diǎn)進(jìn)行治療，會(huì)明顯提高臨床療效。同時(shí)，課題組初步探索了先天伏寒的微觀生物學(xué)指標(biāo)，推測(cè)先天伏寒證候的亞健康人群具有潛在性炎癥紊亂，同時(shí)還伴有神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)功能低下。但因?yàn)榕R床上病人從先天不足、伏寒于內(nèi)到臨床發(fā)病，可能需要幾十年的時(shí)間，所以目前深入研究先天伏寒致病的微觀機(jī)制有一定難度。鑒于此，本實(shí)驗(yàn)以制備穩(wěn)定的先天伏寒動(dòng)物模型為目的，試圖為先天伏寒病因理論提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物 4周齡雌性、雄性Wistar大鼠各25只，體重(23±2)g；正常6周齡10只Wistar大鼠，體重(30±2)g，雌雄各半。實(shí)驗(yàn)鼠均由吉林大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)：SCXK-(J)2011-0003。

1.2藥物 氫化可的松注射液(批號(hào)：13031011)，天津藥業(yè)焦作有限公司。

1.3試劑及儀器 FAIO04電子分析天平，上海精密科學(xué)儀器有限公司；酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀，南京華東電子集團(tuán)醫(yī)療裝備有限責(zé)任公司；京立LDZ5-2離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠；TH-212智能數(shù)字測(cè)溫儀，北京鴻鷗成運(yùn)科技有限公司。

1.4方法

1.4.1給藥及分組方法 氫化可的松腹腔注射，每只3.6 mg/100 g，連續(xù)14 d；同時(shí)附加寒冷因素：將大鼠分別置于2℃～4℃的冰水中游泳，5 min/次，1次/d，共14 d，制備腎陽(yáng)虛大鼠模型。通過模型評(píng)估，證明成功的腎陽(yáng)虛模型大鼠20只，雌雄各半。另取正常的6周齡Wistar大鼠10只，用摸球法隨機(jī)平均分配至正常雄加陽(yáng)虛雌組，陽(yáng)虛雄加陽(yáng)虛雌組，陽(yáng)虛雄加正常雌組，每組5對(duì)，分別同籠產(chǎn)子。

1.4.2一般狀態(tài)觀察 先天伏寒癥候表現(xiàn)類似腎陽(yáng)虛，但其程度較腎陽(yáng)虛更重〔1〕。一般狀態(tài)觀察包括體溫，反應(yīng)靈敏度，活動(dòng)情況，體重變化，體態(tài)，皮毛光澤度，豎毛現(xiàn)象，是否怕冷，是否喜歡擁擠在一起，飲食、大小便情況等，并與腎陽(yáng)虛大鼠的一般狀態(tài)進(jìn)行對(duì)比。

1.4.3指標(biāo)測(cè)定 主要檢測(cè)大鼠下血腦-垂體-腎上腺(HPA)軸相關(guān)指標(biāo)，包括皮質(zhì)醇(Cortisol)、促腎上腺皮質(zhì)(ACTH)、三碘甲狀原氨酸(T3)、甲狀腺素(T4)、促甲狀腺激素(TSH)。

2 結(jié) 果

2.1各組大鼠一般狀態(tài) 在同籠產(chǎn)子過程中，陽(yáng)虛雄加陽(yáng)虛雌組從同籠開始到乳鼠產(chǎn)下平均耗時(shí)48 d，遠(yuǎn)長(zhǎng)于正常雄加陽(yáng)虛雌組和陽(yáng)虛雄加正常雌組的平均耗時(shí)34 d，且陽(yáng)虛雄加陽(yáng)虛雌組有2對(duì)沒有產(chǎn)子。先天伏寒鼠相比同周齡腎陽(yáng)虛鼠體重稍有減輕，飲食減少，皮毛光澤度更差，豎毛現(xiàn)象更加明顯，反應(yīng)靈敏度下降，喜歡擁擠在一起相互取暖。

2.2四組大鼠生長(zhǎng)至4周齡時(shí)口腔、上肢、下肢溫度比較 新生鼠的口腔溫度，上、下肢溫度與腎陽(yáng)虛大鼠及正常大鼠比偏低(P<0.01)。腎陽(yáng)虛大鼠與正常大鼠比較下肢溫度有顯著差異(P<0.01)，口腔溫度和上肢溫度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3組新生鼠口腔溫度，上、下肢溫度之間對(duì)比差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.3各組大鼠Cortisol、ACTH、T3、T4、TSH水平比較 先天伏寒大鼠血清Cortisol、ACTH、T3、T4、TSH水平比腎陽(yáng)虛大鼠均降低(P<0.05)，其中陽(yáng)虛雄加正常雌組Cortisol、T4水平降低顯著(P<0.01)。見表2。

表1 各組大鼠各部位溫度比較℃)

表2 先天伏寒鼠與腎陽(yáng)虛鼠血清激素水平比較

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)利用先天伏寒證“男女媾精，陽(yáng)氣不足，寒伏于內(nèi)”的病機(jī)理論，從模型的母代入手，遵循先天伏寒證的形成原因制備動(dòng)物模型，基本保持了與臨床上先天伏寒證形成的一致性，因此能夠較好反映先天伏寒證的實(shí)質(zhì)。

本實(shí)驗(yàn)用腎陽(yáng)虛鼠同籠產(chǎn)子，分別為父輩或母輩單方陽(yáng)虛和父輩母輩雙方皆陽(yáng)虛。產(chǎn)子后通過觀察新生鼠體溫、體重、體態(tài)、皮毛光澤度、豎毛現(xiàn)象、是否怕冷、是否喜歡擁擠在一起、反應(yīng)靈敏度、自主活動(dòng)情況、飲食、大小便等中醫(yī)癥狀為主導(dǎo)，結(jié)合分子生物學(xué)指標(biāo)，對(duì)先天伏寒大鼠進(jìn)行評(píng)價(jià)〔4～6〕。結(jié)果顯示，先天伏寒證鼠體重比腎陽(yáng)虛鼠低，增長(zhǎng)速度更加緩慢，精神狀態(tài)更加萎靡，活動(dòng)度差，豎毛現(xiàn)象更加明顯，飲水量增加，常喜歡擁擠在一起，常有稀便。

有研究顯示，先天伏寒證患者可表現(xiàn)為HPA 軸功能及潛性炎癥因子異常，其中炎性因子白細(xì)胞介素(IL)-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α、高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)水平均明顯升高，血清Cortisol、ACTH水平均下降，且下降程度較腎陽(yáng)虛患者更明顯〔7，8〕。據(jù)此，我們推測(cè)先天伏寒鼠表現(xiàn)亦有相同趨勢(shì)。結(jié)果顯示，與同周齡腎陽(yáng)虛鼠比較，先天伏寒鼠血清Cortisol、ACTH、T3、T4、TSH均降低，這是從分子生物學(xué)角度對(duì)模型組鼠一般狀態(tài)進(jìn)行了解釋，從而確定先天伏寒動(dòng)物模型制備成功。

另外，正常雄加陽(yáng)虛雌組，陽(yáng)虛雄加陽(yáng)虛雌組，陽(yáng)虛雄加正常雌組3組之間相互比較，大鼠的一般狀態(tài)及血清Cortisol、ACTH、T3、T4、TSH水平差異不明顯，但陽(yáng)虛雄加陽(yáng)虛雌組產(chǎn)子耗時(shí)長(zhǎng)，產(chǎn)子數(shù)量少，不利于先天伏寒大鼠模型的復(fù)制，故推斷正常雄加陽(yáng)虛雌或陽(yáng)虛雄加正常雌的組合方式更加適合先天伏寒鼠模型的制備。

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2崔英子，郭家娟，黃永生.從先天伏寒論治冠心病心絞痛126例臨床觀察〔J〕.中醫(yī)雜志,2010;51(6)：516-9.

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7崔英子.從“先天伏寒”論治冠心病及其與神經(jīng)內(nèi)分泌免疫相關(guān)因子關(guān)系的研究〔D〕.長(zhǎng)春：長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

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