吳春芳 趙雪艷 陳 勇 張起順

(河南大學(xué)淮河醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，河南 開(kāi)封 475000)

近年研究表明，缺血性腦卒中與細(xì)胞凋亡有著密切關(guān)系〔1〕。細(xì)胞凋亡因子(Fas)及其配體(FasL)是在細(xì)胞凋亡過(guò)程中發(fā)揮重要調(diào)控作用的促細(xì)胞凋亡因子，且FasL能誘導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)，在調(diào)控免疫炎癥反應(yīng)過(guò)程中發(fā)揮重要中介作用〔2〕。在正常生理?xiàng)l件下，F(xiàn)as和FasL的表達(dá)有限，而在缺血應(yīng)激條件下，F(xiàn)as和FasL能夠大量表達(dá)，其中可溶性Fas(sFas)和可溶性FasL(sFasL)會(huì)分泌到胞質(zhì)中，從而發(fā)揮促細(xì)胞凋亡作用。因此，在缺血性腦卒中患者血清中能檢測(cè)到高水平的sFas和sFasL〔3〕。本研究主要探討sFas和sFasL在老年缺血性腦卒中患者的動(dòng)態(tài)表達(dá)水平及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2011年6月至2013年6月來(lái)我院就診的老年缺血性腦卒中患者63例，均經(jīng)CT檢查確診。入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)無(wú)嚴(yán)重自身免疫性疾病或心血管系統(tǒng)疾病；(2)無(wú)惡性腫瘤；(3)無(wú)嚴(yán)重感染；(4)無(wú)嚴(yán)重肝、腎等重要臟器病變；(5)無(wú)精神障礙性疾??；(6)無(wú)血液系統(tǒng)疾病。男39例，女24例；年齡60～81〔平均(73.4±10.3)〕歲；所有患者入院后均采用格拉斯哥昏迷評(píng)分(GCS)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分，輕度組23例：GCS評(píng)分>12；中度組21例：8分

1.2試劑與儀器 sFas和sFasL酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)檢測(cè)試劑盒(購(gòu)于美國(guó)R&D有限公司)；酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Thermo公司；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?/p>

1.3研究方法 抽取觀(guān)察組患者發(fā)病后24、48、72 h、7、14 d的外周靜脈血2 ml；對(duì)照組抽取外周靜脈血2 ml。所有樣品于4℃條件下，2 000 r/min離心15 min，收集血清，-70℃儲(chǔ)存待測(cè)。血清sFas和sFasL水平的檢測(cè)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，按正常人血清sFas和sFasL水平進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)袠?biāo)本均設(shè)復(fù)孔，利用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm的OD值，并根據(jù)所測(cè)數(shù)值制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，最后計(jì)算出觀(guān)察組患者血清sFas和sFasL濃度。

2 結(jié) 果

2.1sFas和sFasL標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制定 見(jiàn)圖1，本研究建立的sFas和sFasL具有很好的線(xiàn)性關(guān)系(R2=0.989，0.975)。

2.2兩組sFas和sFasL水平比較 觀(guān)察組血清中sFas和sFasL水平在發(fā)病后24 h開(kāi)始顯著升高，均于發(fā)病后48 h達(dá)到峰值，此后隨時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸下降。與對(duì)照組相比，觀(guān)察組不同病情患者血清sFas和sFasL水平均顯著升高，且在發(fā)病早期與對(duì)照組比較更為顯著?；颊卟∏樵街?，sFas和sFasL水平升高幅度越大。重度腦卒中患者均高于中度和輕度患者(P<0.05)；中度腦卒中患者均高于輕度患者(P<0.05)。見(jiàn)圖2。

2.3sFas和sFasL表達(dá)水平與腦卒中病情分級(jí)的關(guān)系 sFas和sFasL表達(dá)水平與腦卒中GCS評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.582,0.714)(P<0.05)。

圖1 sFas和sFasL標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制定

圖2 各組sFas和sFasL水平比較

3 討 論

Fas(CD95)是一類(lèi)細(xì)胞跨膜蛋白，屬于腫瘤壞死因子受體家族成員，是在免疫系統(tǒng)介導(dǎo)細(xì)胞凋亡過(guò)程中起著關(guān)鍵作用的凋亡刺激因子〔4，5〕。Fas主要表達(dá)于人成熟的T、B淋巴細(xì)胞上，廣泛分布于各種組織細(xì)胞的表面。FasL是Fas在體內(nèi)的天然配體，二者結(jié)合是Fas在體內(nèi)發(fā)揮作用的唯一途徑。Fas/FasL作為介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的重要膜蛋白分子，在正常免疫反應(yīng)、造血調(diào)控、機(jī)體細(xì)胞數(shù)量的恒定與調(diào)控、無(wú)功能或異常細(xì)胞的清除等生理功能以及多種遺傳性、獲得性疾病的病理機(jī)制中具有十分重要的意義。Fas和FasL均可分泌或脫落至細(xì)胞外，成為可溶性功能活動(dòng)分子，即sFas和sFasL〔6〕。

Zhang等〔7〕研究提示Fas信號(hào)在肺癌體內(nèi)促進(jìn)生長(zhǎng)的關(guān)鍵作用，并進(jìn)一步表明Fas信號(hào)可以通過(guò)腫瘤細(xì)胞前列腺素E2(PGE2)招募髓源性抑制細(xì)胞來(lái)促進(jìn)肺癌生長(zhǎng)。Chang等〔8〕研究表明，異烏藥內(nèi)酯可能通過(guò)誘導(dǎo)P21引起A549細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯，并誘導(dǎo)Fas和sFasL介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑。Srivastava等〔9〕，揭示了尿sFas可作為原發(fā)或復(fù)發(fā)膀胱移型細(xì)胞癌的非侵入性診斷的生物標(biāo)志物。Kim等〔10〕研究發(fā)現(xiàn)，黃芪甲苷能夠通過(guò)阻斷Fas/Fasl介導(dǎo)的凋亡途徑從而達(dá)到治療脫發(fā)的目的。Pardalis等〔11〕研究顯示，與正常組小鼠相比，模型組小鼠血清sFas和sFasL水平顯著升高，并于48 h達(dá)到高峰。

對(duì)于缺血性腦卒中患者，早在20世紀(jì)90年代Ohtsuka等〔12〕就已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了Fas/FasL系統(tǒng)與腦卒中的相關(guān)性。最近，Mahovic等〔13〕提示細(xì)胞凋亡在腦梗死發(fā)病機(jī)制中可能的作用。Gupta〔14〕研究提示，由于年齡的增高，機(jī)體細(xì)胞的凋亡進(jìn)程加速，從而引起體內(nèi)促凋亡的相關(guān)因子的表達(dá)升高。

本研究提示，腦卒中患者在發(fā)病早期由于急性缺血和缺氧，刺激了Fas基因的表達(dá)并誘導(dǎo)了sFasL的表達(dá)，隨著神經(jīng)細(xì)胞被誘導(dǎo)凋亡，F(xiàn)as和FasL開(kāi)始下降，逐漸恢復(fù)至接近正常水平，這一研究結(jié)果與時(shí)鵬等〔15〕一致。此外，本結(jié)果提示sFas和sFasL水平有望作為缺血性腦卒中患者預(yù)后的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

綜上所述，血清sFas和sFasL參與了老年缺血性腦卒中的病理發(fā)展過(guò)程，能反映腦卒中的病情發(fā)展階段，對(duì)臨床診斷、治療以及預(yù)后評(píng)判起到指導(dǎo)作用。

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