李家娣 范桂紅 吳 迪 孫雨薇 韓 雪 張亞男

(齊齊哈爾醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院中藥局,黑龍江 齊齊哈爾 161041)

目前失眠的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年升高的趨勢，已成為嚴重影響人們身心健康的主要疾患之一〔1〕。目前，臨床對其治療仍以藥物為主，西藥以鎮(zhèn)靜、催眠類藥物為主，但需要長期服藥，影響患者的依從性及出現(xiàn)戒斷綜合征〔2〕，且由于對失眠的發(fā)病機制尚不清楚，以致臨床缺乏針對性的治療措施。本研究擬探討失眠經(jīng)典方藥酸棗仁湯對學習記憶能力的影響及干預(yù)機制。

1 材料與方法

1.1實驗動物 8周齡SPF級SD小鼠80只〔動物合格證號：SCXK(津)2013-0002〕，雌雄各半，體質(zhì)量(60±20)g，由天津?qū)嶒瀯游镏行奶峁?/p>

1.2實驗分組 依據(jù)隨機數(shù)字表法進行分組，即空白對照組(簡稱空白組)、模型對照組(簡稱模型組)、中藥酸棗仁湯治療組(簡稱中藥組)、西藥安定治療組(簡稱西藥組)，每組20只。

1.3給藥方法 每日固定時間進行灌胃，其中西藥組胃飼安定0.2 mg·kg-1·d-1，中藥組胃飼酸棗仁湯10 g·kg-1·d-1，模型組、空白組胃飼生理鹽水2 ml/(kg·d)。

1.4實驗儀器及試劑 紫外可見分光光度計(上海欣茂儀器有限公司，UV-7504型)；電熱恒溫水浴鍋(上海儀表供銷公司))；Y型迷宮(廣州威佳科技有限公司)。氯苯丙氨酸(PCPA)購自Sigma公司；一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(南京建成生物制劑研究所)；血糖(Glu)試劑北京博奧森公司。

1.5研究方法

1.5.1模型制備 采取大鼠跑臺力竭訓練+Y型迷宮十PCPA失眠的動物模型，跑臺力竭實驗主要是對除空白組之外的所有小鼠，每天進行20 min的跑臺訓練，5只/次，直到其力竭；而后進行Y型迷宮訓練，即：將小鼠放入Y型迷宮的任一支臂之中，予以小鼠電擊，直至其進入安全區(qū)后停止，而后熄燈結(jié)束測試，同時將小鼠所在支臂作為下一測試的起點，進行電擊實驗，以測試其走完迷宮所用時間、錯誤總數(shù)及首錯前正確數(shù)，上述兩項實驗開始1 w后，對小鼠進行腹腔注射PCPA，劑量為350 mg/kg，至小鼠出現(xiàn)攣縮性疼痛，約持續(xù)60 min，疼痛緩解。72 h后對小鼠進行體表特征積分評定，檢驗?zāi)Ｐ汀?/p>

1.5.2檢測指標與方法 猝死動物，取出腦組織，將其稱重，吸水紙洗盡水分后置于超低溫冰箱中，NO、SOD 、Glu檢測按照試劑盒中步驟進行。

1.6統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行分析。

2 結(jié) 果

2.1各組小鼠統(tǒng)計學描述 模型組小鼠在實驗第4天因跑臺力竭實驗死亡1只，西藥組小鼠在實驗第7天因灌胃死亡1只，故共78只小鼠進入相關(guān)數(shù)據(jù)分析。

2.2各組小鼠NO、SOD和Glu含量比較 與空白組比較，模型組的SOD含量增加明顯，Glu含量則降低明顯(P<0.05)，NO含量無明顯變化(P>0.05)；與模型組比較，西藥組、中藥組的NO、Glu含量升高明顯，SOD含量降低明顯(P<0.05)；中、西藥組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表1。

表1 各組小鼠NO、SOD和Glu含量比較±s)

2.3各組小鼠學習記憶能力比較 與空白組比較，模型組的走完迷宮所用時間、錯誤總數(shù)均增加明顯，首錯前正確數(shù)降低明顯(P<0.05)；與模型組比較，西藥組、中藥組的走完迷宮所用時間、錯誤總數(shù)均降低明顯，首錯前正確數(shù)增加明顯(P<0.05)；中、西藥組比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。見表2。

表2 各組小鼠學習記憶能力比較±s)

3 討 論

失眠在中醫(yī)學中根據(jù)其癥狀，將其隸屬于“不寐”范疇，將其分為實證與虛證兩種，其中實證多由于營衛(wèi)不和，陽不入陰而引發(fā)，虛證則多與精血虧虛，臟不藏神有關(guān)〔3〕。本研究中所用酸棗仁湯為治療失眠的經(jīng)典方劑，出自仲景的《金匱要略》，方中以酸棗仁為君藥，取其養(yǎng)血補肝、寧心安神之功，茯苓與知母共為臣藥，一則輔助君藥以加強安神除煩之功，再則取茯苓健脾利濕，知母滋陰清熱，使其清熱除煩之力強；以調(diào)暢氣機、舒暢肝氣之白芍為佐藥，與君藥相反相成，以達養(yǎng)血調(diào)肝之妙；甘草和中緩急為使藥，且能與酸棗仁相合，增強酸甘化陰之能，補充肝血不足之征，全方養(yǎng)肝血以寧心神,清內(nèi)熱以除虛煩為組方原則，諸藥相合，則失眠可望向愈。

有學者研究證實：酸棗仁湯可減少小鼠的自主活動次數(shù)，延長失眠小鼠的睡眠時間，其催眠效果與劑量具有相關(guān)性〔4〕；而通過酸棗仁湯的不同劑量進行研究，發(fā)現(xiàn)不同劑量均對于小鼠的活動具抑制作用，且可明顯抑制中樞神經(jīng)興奮，延長睡眠百分率及睡眠持續(xù)時間，呈現(xiàn)量效關(guān)系〔5〕。亦有研究表明，安神藥物可提高小鼠的學習記憶能力，尤其是記憶獲得障礙及再現(xiàn)障礙〔6〕，縱觀近年研究，對于本方的研究多針對鎮(zhèn)靜催眠效應(yīng)機制而展開，對于失眠較容易導致的學習記憶能力的降低的改善及其機制研究鮮見。

SOD作為人體內(nèi)最重要的自由基清除劑，模型組的SOD活性增高,則可能由于睡眠剝奪加重了自由基清除系統(tǒng)的反應(yīng)性升高,過度的氧自由基會滅活SOD，使得SOD活性下降，進一步加重對腦組織的損害；Glu屬于興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，由于可改變興奮性氨基酸濃度而導致機體產(chǎn)生興奮性毒性，誘發(fā)失眠〔7〕。提示酸棗仁湯可調(diào)控NO、SOD和Glu水平，其功效與西藥相似。

本研究結(jié)果顯示，酸棗仁湯可有效改善虛勞不眠小鼠的學習記憶能力，其機制可能與調(diào)控NO、SOD和Glu水平有關(guān)。

4 參考文獻

1袁拯忠，葉 人，項祖闖，等.913例失眠患者中醫(yī)證型分布規(guī)律〔J〕.中華中醫(yī)藥學刊，2011；29(7)：1508-10

2徐勁松，劉繼洪，余志映.加味酸棗仁湯治療陰虛體質(zhì)失眠癥44例臨床觀察〔J〕.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學雜志，2013；19(12)：1491-3.

3張舜波，王 平，田代志，等.酸棗仁總皂苷對失眠老年大鼠腦氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)及受體表達的影響〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2014；20(4)：124-7.

4王 慧，羅 坤，武 靜.酸棗仁湯對失眠大鼠中腦中縫背核神經(jīng)膠質(zhì)細胞的影響〔J〕.中國實驗方劑學雜志，2012；18(21):235-9.

5朱秀美，楊國松，李秀才.酸棗仁湯的藥理學作用研究進展〔J〕.中醫(yī)臨床研究，2013；5(14) ：121-2.

6王守勇，謝 鳴.酸棗仁湯組分配方對高架十字迷宮大鼠海馬單胺類遞質(zhì)及其代謝物的影響〔J〕.北京中醫(yī)藥大學學報，2012；35(2):117-20.

7張林挺.酸棗仁湯對虛勞失眠大鼠干預(yù)機理的研究〔D〕.廣州中醫(yī)藥大學博士論文，2009.