魏卓文，黨冬梅

(1.延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院2009級臨床醫(yī)學(xué)；2.延安大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室，陜西 延安 716000)

胃癌是常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)生發(fā)展是一個極其復(fù)雜的過程，是多因素、多階段、多基因共同作用而致的結(jié)果。p16、細(xì)胞周期素(Cyclin D1)是G1期細(xì)胞周期相關(guān)蛋白，當(dāng)Cyclin D1表達(dá)失控時，引起細(xì)胞增殖周期失調(diào)，從而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。生存素(Survivin)是一種癌基因，高表達(dá)于多數(shù)腫瘤組織中。胃粘膜病變組織中p16、Cyclin D1和Survivin聯(lián)合檢測報道少見，因此本實驗采用免疫組化(S-P法)檢測胃癌及癌前病變組織中p16、Cyclin D1及Survivin的表達(dá)，探討它們在胃癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

收集2012-09～2013-12本院病理科包埋蠟塊組織120例，均經(jīng)病理科確診。其中，正常胃黏膜組織20例，不典型增生38例，胃癌組織62例，男39例，女23例，平均年齡50.6歲。

1.2 方法

1.2.1 免疫組織化學(xué)染色 鼠抗人單克隆抗體Cyclin D1、兔抗人多克隆抗體Survivin均購自SantaCruz公司，鼠抗人單克隆抗體p16、S-P試劑盒、DAB顯色試劑盒均購于北京中山金橋生物技術(shù)公司。實驗步驟嚴(yán)格按試劑盒說明書進(jìn)行，用PBS代替一抗作陰性對照，已知陽性組織作陽性對照。

1.2.2 結(jié)果判斷 p16陽性細(xì)胞核呈棕黃色，顆粒狀，深淺不等。Cyclin D1陽性細(xì)胞核呈棕黃色。Survivin陽性為細(xì)胞漿呈棕黃褐色顆粒。每張切片隨機(jī)選擇10個視野，每個高倍視野計數(shù)100個細(xì)胞，共計1000個細(xì)胞，陽性細(xì)胞小于或等于10%為陰性，大于10%為陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 p16、Cyclin D1和Survivin在不同胃粘膜組織中的表達(dá)

正常胃黏膜和不典型增生組織中p16的表達(dá)率高于Cyclin D1和Survivin的表達(dá)，胃癌組織中p16的表達(dá)率低于二者(見表1)。

表1 p16、Cyclin D1和Survivin在不同胃粘膜組織中的表達(dá)[(n)%]

2.2 p16、Cyclin D1和Survivin的表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

p16、Cyclin D1和Survivin的表達(dá)與胃癌患者年齡、性別均無關(guān)；p16的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)；Cyclin D1的表達(dá)與組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.001;P<0.05)；Survivin的表達(dá)與組織分化程度相關(guān)(P<0.05)(見表2)。

表2 p16、Cyclin D1和Survivin的表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系[(n)%]

a.vs無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，x2=5.68，P<0.05；b.vs高中分化，x2=8.02，P<0.001；c.vs無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，x2=5.14，P<0.05；d.vs高中分化，x2=6.43，P<0.05.

2.3 p16、Cyclin D1和Survivin的相關(guān)性分析

經(jīng)相關(guān)性分析，p16與Cyclin D1和Survivin在胃癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.486,P<0.05)，(r=-0.518,P<0.05)，Cyclin D1與Survivin呈正相關(guān)(r=0.431,P>0.05)。

3 討論

p16是一個新型的抑癌基因，直接參與細(xì)胞生長增值負(fù)調(diào)控，p16基因突變、缺失和甲基化引起p16蛋白表達(dá)異常時，細(xì)胞增殖失控，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞無限制生長[1,2]。本研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中p16蛋白表達(dá)顯著低于正常胃粘膜組織和不典型增生，p16蛋白的低表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，提示p16基因的表達(dá)與胃癌的形成、轉(zhuǎn)移均有關(guān)。

Cyclin D1在細(xì)胞周期G1-S期轉(zhuǎn)換過程中起關(guān)鍵性作用，在生理狀態(tài)下,細(xì)胞進(jìn)入S期后Cyclin D1迅速分解。Cyclin D1過度表達(dá)可使CDK4對Rb蛋白調(diào)節(jié)失常，導(dǎo)致細(xì)胞失控性生長[3]。Cyclin D1可提高轉(zhuǎn)錄水平或者抑制轉(zhuǎn)錄而影響細(xì)胞的分化導(dǎo)致腫瘤形成[4]。近來研究發(fā)現(xiàn)，過度表達(dá)Cyclin D1的腫瘤組織更具有侵襲力，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率更高[5,6]。本研究表明，Cyclin D1在胃癌組織中的表達(dá)顯著高于正常胃黏膜組織和不典型增生，Cyclin D1的過度表達(dá)與胃癌的分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示Cyclin D1參與胃癌形成和進(jìn)展。

Survivin在位于caspase存在的胞漿中具有抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞分裂的功能,Survivin的過表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀況密切相關(guān)，Survivin過表達(dá)預(yù)示著患者預(yù)后不良及低生存率[7]。Survivin表達(dá)于胚胎和多數(shù)惡性腫瘤組織，正常終末分化組織無表達(dá)[8]，當(dāng)組織發(fā)生惡變時，會出現(xiàn)Survivin高表達(dá)，提示Survivin與組織的正常分化、自身穩(wěn)定以及腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著相當(dāng)密切關(guān)系，與胃癌的形成和發(fā)展也有一定的相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)，Survivin在胃癌組織中的表達(dá)顯著高于正常胃黏膜和不典型增生，其表達(dá)與胃癌的分化程度有關(guān)，提示其可能與胃癌的發(fā)生相關(guān)，是胃癌形成的重要因素。

本研究結(jié)果顯示，隨著胃粘膜病變的進(jìn)展，p16蛋白的陽性表達(dá)率下降，而Cyclin D1和Survivin蛋白的陽性表達(dá)率升高，在正常胃黏膜組織和不典型增生組織中p16的表達(dá)率高于Cyclin D1和Survivin的表達(dá)，而在胃癌組織中p16的表達(dá)率低于二者；p16、Cyclin D1和Survivin的表達(dá)與胃癌患者年齡、性別均無關(guān)；p16的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，(x2=5.68,P<0.05)；Cyclin D1的表達(dá)與組織分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(x2=8.02,P<0.001;x2=5.14,P<0.05)；Survivin的表達(dá)與組織分化程度相關(guān)(x2=6.43,P<0.05)；且p16與Cyclin D1在胃癌組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.486,P<0.05),p16與Survivin也呈負(fù)相關(guān)(r=-0.518,P<0.05),Cyclin D1與Survivin呈正相關(guān)(r=0.431,P>0.05)。因此聯(lián)合檢測胃黏膜組織中p16、Cyclin D1和Survivin蛋白的表達(dá)，對胃癌早診斷、早治療及預(yù)后評估有一定的參考價值。

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