李素婷 張子俊 杜 超 吳淑彥 齊天林

(承德醫(yī)學院，河北 承德 067000)

一次性過量或短期內(nèi)反復大量飲酒是酒精性肝病發(fā)生的基礎(chǔ)。有效降低急性酒精性肝損傷的發(fā)生、發(fā)展是降低酒精性肝病發(fā)病率的有效途徑。研究表明，氧化應(yīng)激是急性酒精性肝損傷中最重要的發(fā)病機制之一，在酒精性肝損病的形成與發(fā)展中起重要作用〔1〕。山楂葉總黃酮(FMCL)是從山楂葉中提取的黃酮類化合物，含有黃酮苷、葒草素、葡荊牡黃酮等多種抗氧化成分，具有很強的清除自由基抗脂質(zhì)過氧化作用〔2〕。以抗動脈粥樣硬化、改善心肌活力、降血脂、降血糖等多種藥理作用廣泛應(yīng)用于臨床〔3〕。本研究觀察FMCL對酒精所致小鼠急性肝損傷的保護作用及其機制。

1 材料與方法

1.1材料 昆明種小鼠，雄性，清潔級，體重(22±2)g,石家莊實驗動物管理中心提供。FMCL(純度為80%)：北京中醫(yī)藥大學饋贈，臨用前以蒸餾水配置，4℃保存；56°紅星二鍋頭白酒：北京紅星釀酒廠生產(chǎn)；谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過氧化物(GSH-Px)、還原型谷胱甘肽(GSH)測定試劑盒:均購于南京建成生物工程研究所。半自動生化分析儀(MD-100)：美國Bayer公司生產(chǎn)，721W微機型分光光度計：上海光學儀器五廠，恒溫三用水浴箱：杭州中拓儀器有限公司，Olympus顯微鏡和組織切片機：德國Leica公司。

1.2動物造模與藥物處理〔4〕將60只昆明種小鼠隨機空白組、模型組、FMCL小劑量(40 mg/kg)組、大劑量(80 mg/kg)組和維生素E(100 mg/kg)陽性對照組?？瞻捉M每天給予蒸餾水0.4 ml灌胃，模型組和給藥組按每次8 ml/kg灌胃給予56°二鍋頭白酒，2次/d，連續(xù)10 d造模結(jié)束。自造模第一天起，F(xiàn)MCL組和維生素E組在每天中午灌胃給藥一次，空白組和模型組同時灌服等體積蒸餾水，實驗期間各組小鼠自由飲水、進食。最后一次灌胃結(jié)束，禁食不禁水14 h，斷頭處死小鼠。

1.3指標測定方法 取血分離血清，半自動生化分析儀測定血清ALT、AST活性，比色法檢測TG、TC含量；另取部分肝臟，用冷生理鹽水沖洗后制備成10%的肝勻漿，按試劑盒測定肝勻漿中MDA含量和SOD、GSH-Px、GSH的活性。

1.4肝組織病理學學觀察 取小鼠肝左葉，置10%中性甲醛溶液中固定，常規(guī)石蠟包埋、切片機切片，HE染色，光鏡下觀察肝組織脂肪變性和炎癥、壞死等病理改變。

2 結(jié) 果

2.1FMCL對酒精性肝損傷小鼠血清ALT、AST水平和TG、TC含量的影響 和空白組比較，模型組大鼠血清中ALT、AST活性及TG、TC含量均顯著升高(P<0.01)，而與模型組相比，F(xiàn)MCL可明顯降低酒精性肝損傷小鼠血清中ALT、AST活性，明顯減少TG、TC的含量。見表1。

2.2FMCL對酒精引起小鼠脂質(zhì)過氧化的保護作用 與空白組比較，模型組肝組織中MDA含量明顯升高，SOD、GSH-Px、GSH含量明顯降低；而與模型組相比，F(xiàn)MCL組和維生素E組均能降低肝組織MDA含量，升高SOD、GSH-Px、GSH活性。見表1。

2.3FMCL對酒精引起小鼠肝組織病理形態(tài)學改變的保護作用 空白組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝細胞呈索狀排列，肝細胞形態(tài)正常，未見炎癥細胞浸潤；模型組肝細胞胞質(zhì)疏松化彌漫存在，肝細胞明顯腫脹，大部分細胞空泡變性，肝小葉界限模糊，小葉內(nèi)有炎癥細胞浸潤；FMCL組，肝細胞胞質(zhì)疏松化明顯減輕，細胞輕度腫脹，未見明顯的脂肪變性和炎癥細胞浸潤，肝小葉形態(tài)和結(jié)構(gòu)基本正常；維生素E組可見少量肝細胞胞質(zhì)疏松化，肝細胞炎癥反應(yīng)明顯減輕，肝細胞結(jié)構(gòu)基本正常(見圖1)。

表1 FMCL對酒精性肝損傷小鼠血清ALT、AST活性和TG、TC含量及肝組織SOD、GSH-Px、GSH、MDA水平的影響

空白組

FMCL組

維生素E組

3 討 論

在急性酒精性肝損傷過程中，大量活性氧自由基使SOD活力下降，不能有效清除自由基。乙醇的代謝產(chǎn)物乙醛能與GSH結(jié)合成復合物，使肝細胞內(nèi)GSH的濃度明顯降低，乙醛還可與GSH-Px及其他抗氧化酶的巰基結(jié)合，導致GSH-Px等抗氧化酶的水平下降，機體內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)的抗氧化能力明顯減弱，難以清除過多的自由基，肝內(nèi)堆積的大量自由基介導脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，進一步加重細胞膜和細胞器的損害，引起膜通透性增大，肝細胞內(nèi)大量ALT、AST釋放入血。同時，肝臟對脂肪分解能力下降，脂肪組織中的脂肪酸向肝內(nèi)轉(zhuǎn)移，肝功能異常，脂肪代謝紊亂，肝組織內(nèi)廣泛脂肪樣和空泡樣變性，肝細胞炎癥、壞死、最終死亡〔8，9〕。本研究說明FMCL對酒精性肝損傷有一定的保護作用。FMCL具有較強的清除自由基的抗氧化能力，F(xiàn)MCL通過提高內(nèi)源性抗氧化劑水平，清除自由基，抑制自由基介導的脂質(zhì)過氧化對肝臟的損傷，保護了肝細胞結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定性，這可能是FMCL抑制酒精所致肝損傷的重要機制之一。

4 參考文獻

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