劉有恒 趙阿勐

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

抑郁癥臨床表現(xiàn)為“三低一少”，即以情感低落、思維遲緩、言語動(dòng)作減少、遲緩為主要癥狀的綜合癥候群〔1〕，每年約15%的抑郁癥患者死于自殺。近年來，由于社會(huì)各方面壓力如空巢家庭、提早退休等因素的影響，其發(fā)病年齡多見于老年患者〔2〕。本研究擬探討氟西汀影響神經(jīng)可塑性而發(fā)揮抗抑郁效應(yīng)的具體機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 90只20月齡SD清潔級雄性大鼠〔動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(津)2010-0002〕，體質(zhì)量160～220 g，由我市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。將大鼠隨機(jī)分成空白組、模型組、西藥組，每組30只。西藥組胃飼氟西汀1.8 mg·kg-1·d-1，模型組、空白組胃飼生理鹽水2 ml·kg-1·d-1，每日早晨8∶ 00開始，持續(xù)21 d。各組在實(shí)驗(yàn)第1天即開始行相對應(yīng)的干預(yù)方法。

1.2實(shí)驗(yàn)儀器及試劑

1.2.1實(shí)驗(yàn)儀器 透射電子顯微鏡(日本日立，型號(hào)：H-7650)；圖形信號(hào)采集分析系統(tǒng)(德國Leica公司，型號(hào)：Q550CW)。多功能真彩色細(xì)胞圖像分析管理系統(tǒng)(美國Media Cybernetics 公司，型號(hào)：Image-Pro Plus)。

1.2.2實(shí)驗(yàn)試劑 BrdU、抗BrdU抗體、多聚賴氨酸均購自sigma公司；一抗：兔Anti-NeuN/Cy3(貨號(hào)：bs-1613R-Cy3)、鼠Anti-BrdU/FITC 熒光素(貨號(hào)：bs-0917M-FITC)均購自北京博奧森公司。2.5%戊二醛溶液、餓酸、丙酮、二甲钅申酸鈉緩沖液、硝酸鑭、10%甲醛及10%水合氯醛等試劑、溶液均由中國中醫(yī)研究院中藥研究所提供。孤養(yǎng)結(jié)合慢性應(yīng)激制造抑郁模型〔3〕。

1.3檢測指標(biāo)與處理方法 海馬區(qū)突觸活性區(qū)長度、突觸前后膜致密物質(zhì)的厚度及突觸間隙寬度：采用常規(guī)透射電鏡標(biāo)本制作后，應(yīng)用利用Q550CW圖形信號(hào)采集分析系統(tǒng)對突觸照片進(jìn)行分析并測量。熒光雙標(biāo)細(xì)胞表達(dá)變化：取BrdU標(biāo)記大鼠，根據(jù)操作步驟依次斷頭、取腦組織，依據(jù)試劑盒說明依次進(jìn)行，采用多功能真彩色病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)NeuN/BrdU、β-tubulinⅢ/BrdU陽性細(xì)胞，取均數(shù)作為各時(shí)間點(diǎn)該指標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS14.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1統(tǒng)計(jì)學(xué)描述 在實(shí)驗(yàn)第17天時(shí)，模型組1只大鼠死亡，解剖無特殊發(fā)現(xiàn)，死亡原因不明，此鼠數(shù)據(jù)不納入統(tǒng)計(jì)。共89只大鼠進(jìn)入數(shù)據(jù)分析。

2.2各組大鼠海馬突觸結(jié)構(gòu)的體視學(xué)變化 21 d時(shí)，與空白組比較，模型組突觸活性區(qū)長度、突觸后致密物質(zhì)厚度均明顯減少，突觸間隙寬度增加(均P<0.01)；與模型組比較，西藥組突觸活性區(qū)長度、突觸后致密物質(zhì)厚度均增加，突觸間隙寬度減少(P<0.01或P<0.05)，見表1～表3。

2.3各組大鼠海馬CA3區(qū)熒光雙標(biāo)細(xì)胞表達(dá)變化 21 d時(shí)，與空白組比較，模型組NeuN/BrdU、β-tubulinⅢ/BrdU雙標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)均減少明顯(P<0.01)；與模型組比較，西藥組增加明顯(P<0.05)。見表4、表5。

表1 各組大鼠在抑郁形成不同時(shí)間段突觸活性區(qū)長度比較

表2 各組大鼠在抑郁形成不同時(shí)間段突觸后致密物質(zhì)厚度比較

表3 各組大鼠在抑郁形成不同時(shí)間段突觸間隙寬度比較

表4 各組大鼠抑郁形成不同時(shí)間段NeuN/BrdU雙標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)比較

表5 各組大鼠抑郁形成不同時(shí)間段β-tubulinⅢ/BrdU雙標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)比較

3 討 論

預(yù)計(jì)2025年我國人口中65歲以上的老年人所占比例可達(dá)15%。而近年來調(diào)查發(fā)現(xiàn)，25%的老年人有不同程度的精神障礙，其中65歲以上老年人情緒障礙發(fā)病率約占12%～25%〔4〕?？梢?，探索老年抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，進(jìn)而尋找其有效治療藥物，是現(xiàn)今需要解決的問題。

海馬CA3區(qū)上的錐體神經(jīng)元對應(yīng)激和腎上腺糖皮質(zhì)激素非常敏感〔3〕，其作為與情緒、認(rèn)知、行為密切相關(guān)的重要腦區(qū)，慢性應(yīng)激均引起海馬CA3區(qū)神經(jīng)元萎縮〔5〕，而突觸則是神經(jīng)元之間結(jié)構(gòu)和功能的接觸點(diǎn)，其結(jié)構(gòu)對于保證神經(jīng)元獲得信息，以及進(jìn)行傳遞、加工和貯存的順利進(jìn)行具有重要的作用〔6〕。相關(guān)研究已證實(shí)：神經(jīng)傳導(dǎo)和學(xué)習(xí)記憶過程均可由于突觸間隙、突觸活性帶長度等因素的變化而產(chǎn)生重要影響，較長的突觸活性帶可以增加突觸傳導(dǎo)過程中遞質(zhì)及囊泡的接觸面積，提高神經(jīng)信息傳遞和學(xué)習(xí)記憶的有效性〔2〕。

本研究結(jié)果提示，老年抑郁癥中存在海馬神經(jīng)突觸結(jié)構(gòu)損傷，神經(jīng)元再生減少的可塑性變化，氟西汀可通過增加抑郁模型大鼠海馬神經(jīng)元發(fā)生，恢復(fù)海馬的結(jié)構(gòu)與功能，從而發(fā)揮其抗抑郁的作用。

4 參考文獻(xiàn)

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2張麗萍，武 麗，張 曼.解郁1號(hào)對抑郁模型大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的影響〔J〕.遼寧中醫(yī)，2009;36(10)：1805-6.

3郭曉云，江開達(dá).慢性輕度應(yīng)激抑郁癥動(dòng)物模型研究進(jìn)展〔J〕.國際精神病學(xué)雜志，2007;34(6)：216-7.

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6肖 鵬，何勝昔，許世彤，等.海馬CA3區(qū)突觸結(jié)構(gòu)在記憶中的變化〔J〕.中國行為醫(yī)學(xué)科學(xué)，2005;14(6)：26-8.