趙 娟 宋成軍 姜菊花 毛曉霞 苗光新 于海榮 李 穎 劉莎莎

(承德醫(yī)學(xué)院病理生理學(xué)教研室，河北 承德 067000)

動脈粥樣硬化(AS)時(shí)由于血脂水平明顯升高，超過了肝臟的代謝能力，導(dǎo)致脂肪肝。Schwimmer等〔1〕認(rèn)為脂肪肝不僅僅是AS的檢測指標(biāo)，而且還是AS早期調(diào)節(jié)因子，促進(jìn)AS發(fā)生發(fā)展。Urantide是在人尾加壓素Ⅱ(hUⅡ)基礎(chǔ)上衍生的肽類尾加壓素Ⅱ(UⅡ)受體拮抗劑，本課題組已證實(shí)urantide對AS大鼠胸主動脈有一定的抗損傷作用〔2～4〕，本實(shí)驗(yàn)擬進(jìn)一步研究urantide對AS大鼠肝臟的作用及其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物、藥品及高脂飼料的配制 健康雄性Wistar大鼠160只，體質(zhì)量180～200 g，由吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)部動物部提供〔許可證號：SCXK(吉)-2009-0004〕。urantide由上海華大天源生物科技有限公司合成；氟伐他汀(Flu)購自北京諾華制藥有限公司。高脂飼料的配制：基礎(chǔ)飼料，3.5%膽固醇，10%豬油，0.2%丙硫氧嘧啶、0.5%膽酸鈉，5%白糖。

1.2方法

1.2.1大鼠AS模型復(fù)制及實(shí)驗(yàn)分組 Wistar大鼠隨機(jī)分為2組：①正常(NC)組，飼以普通飼料；②模型組，實(shí)驗(yàn)開始時(shí)在飼以高脂飼料基礎(chǔ)上，每只大鼠給予腹腔注射維生素D3(Vit D3)70 U/kg，連續(xù)3 d，實(shí)驗(yàn)周期為6 w。AS模型復(fù)制成功后，模型組再隨機(jī)分3組：AS組、陽性藥(Flu)組、urantide組。正常組和AS組每日尾靜脈注射生理鹽水30 μg/kg，連續(xù)14 d；陽性藥組每日給予Flu 5 μg/kg，連續(xù)14 d；urantide組每日尾靜脈注射urantide 30 μg/kg，給藥時(shí)間分別為3、7、14 d。

1.2.2標(biāo)本采集 ①一般狀態(tài)：每周觀察大鼠精神狀態(tài)及飲食。②胸主動脈標(biāo)本的采集：大鼠取血后，取胸主動脈約1 cm，用4%多聚甲醛固定，待形態(tài)學(xué)檢測。③肝臟標(biāo)本采集：大鼠取血后，立即摘取肝臟，生理鹽水洗去血跡后稱重，計(jì)算肝系數(shù)(肝系數(shù)=肝臟重量/體重)，4%多聚甲醛固定，待形態(tài)學(xué)檢測。

1.2.3肝形態(tài)學(xué)檢測結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 按肝臟變性細(xì)胞或泡沫細(xì)胞的數(shù)量分以下4級：①Ⅰ級：正常肝細(xì)胞；②Ⅱ級(輕度)：變性細(xì)胞或泡沫細(xì)胞數(shù)﹤25%；③Ⅲ級(中度)：變性細(xì)胞或泡沫細(xì)胞數(shù)≥25%(﹤50%)；④Ⅳ級(重度)：變性細(xì)胞或泡沫細(xì)胞數(shù)≥50%。

2 結(jié) 果

2.1urantide對AS大鼠胸主動脈的影響 實(shí)驗(yàn)6 w，NC組大鼠胸主動脈內(nèi)膜、中膜和外膜分界清楚，血管內(nèi)皮完整，中膜可見梭形平滑肌細(xì)胞，彈力纖維層結(jié)構(gòu)清晰完整，呈環(huán)行排列，外膜為疏松結(jié)締組織。模型組大鼠胸主動脈內(nèi)膜下出現(xiàn)明顯的鈣化、炎細(xì)胞浸潤、VSMC增生及泡沫樣細(xì)胞，彈力纖維發(fā)生變性、斷裂和崩解，中膜萎縮，為典型AS病理變化。表明成功建立AS大鼠模型。見圖1。

2.2urantide對AS大鼠肝系數(shù)的影響 AS組(6.13±0.23)與NC組(3.13±0.15)相比，肝系數(shù)明顯增加(P<0.01)；urantide組(3 d：5.36±0.13，7 d：4.93±0.06，14 d：4.60±0.20)〕及Flu組(4.42±0.02)肝系數(shù)較AS組明顯減少(P<0.01)，但各給藥組間比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3Urantide對AS大鼠肝臟形態(tài)學(xué)改變的影響 NC組大鼠肝臟形態(tài)規(guī)則，邊緣銳利，色紅有光澤；HE染色切片觀察，肝細(xì)胞排列正常，細(xì)胞核大而圓、居中，胞質(zhì)中無泡沫細(xì)胞，無炎癥細(xì)胞浸潤，為Ⅰ級。AS組和各給藥組大鼠肝臟體積較正常組不同程度增大，包膜緊張，邊緣較鈍，質(zhì)地略軟，切面均呈淡黃色而稍隆起，包膜外翻，觸之油膩感；鏡下AS組肝細(xì)胞內(nèi)泡沫細(xì)胞大而多，散布在整個(gè)胞質(zhì)中，肝細(xì)胞出現(xiàn)重度的脂肪變性和大量的炎癥細(xì)胞浸潤，脂肪變性細(xì)胞數(shù)≥50%，為Ⅳ級(重度)脂肪變性；而Flu組肝細(xì)胞內(nèi)泡沫細(xì)胞較AS組數(shù)量減少，且大小不等，多分布在核的周圍，變形細(xì)胞數(shù)≥25%(<50%)，為Ⅲ級(中度)脂肪變性；urantide組給藥3 d時(shí)與AS組相比，脂肪變性減輕，但與Flu組相比脂肪變性減輕不明顯，變性細(xì)胞數(shù)≥25%(<50%)，為Ⅲ級脂肪變性；urantide組給藥7 d和14 d時(shí)與AS組相比，脂肪變性進(jìn)一步減輕，接近于Flu組，變形細(xì)胞數(shù)≥25%(<50%)，為Ⅲ級脂肪變性。見圖2。

圖1 NC組與模型組實(shí)驗(yàn)6 w后胸主動脈病改變(HE，×200)

圖2 各組肝臟形態(tài)學(xué)改變(HE，×200)

3 討 論

大量實(shí)驗(yàn)與臨床資料證明，脂肪肝是促進(jìn)AS形成的危險(xiǎn)因素〔5〕。脂肪肝是脂肪沉積過多引起肝內(nèi)脂肪變形細(xì)胞和泡沫細(xì)胞增多的一類臨床代謝性綜合征。它可以是一個(gè)獨(dú)立的原發(fā)性疾病，也可是AS等其他全身性疾病累及肝臟的病理表現(xiàn)，協(xié)同其他AS的致病因素一起促進(jìn)AS的發(fā)生發(fā)展〔6〕。據(jù)此，本實(shí)驗(yàn)在建立AS動物模型時(shí)，通過給大鼠喂養(yǎng)含有大量膽固醇、豬油和膽酸鈉等使血脂升高的飼料，增加大鼠出現(xiàn)脂肪肝的概率。結(jié)果顯示，模型組肝細(xì)胞內(nèi)有重度的脂肪變性和泡沫細(xì)胞、炎癥細(xì)胞浸潤。肝內(nèi)的泡沫細(xì)胞和炎癥細(xì)胞釋放大量AS的致病因子，增加血管內(nèi)膜損傷和炎癥反應(yīng)，加重AS病變，從而為成功復(fù)制AS模型發(fā)揮了重要的作用。

AS的發(fā)生是多因素、多層次及多位點(diǎn)相互作用的過程。尾加壓素Ⅱ(UⅡ)最早是從魚的脊髓尾部下垂體中分離出的生長抑素樣環(huán)肽，是促進(jìn)AS發(fā)生、發(fā)展的主要發(fā)病機(jī)制之一〔7,8〕。urantide是迄今已知作用最強(qiáng)UⅡ受體拮抗劑，拮抗效應(yīng)較其他化合物高50～100倍〔9,10〕。長期跟蹤國內(nèi)外文獻(xiàn)，有關(guān)UⅡ受體拮抗劑urantide與AS的報(bào)道極少。迄今僅有的少量信息，基本上都來自本實(shí)驗(yàn)室所做的一些工作，研究發(fā)現(xiàn) UⅡ促進(jìn)AS的發(fā)生、發(fā)展，而urantide可阻斷UⅡ這種促進(jìn)作用，對AS有一定的保護(hù)作用〔2～4〕，但其在AS中具體作用機(jī)制還尚未闡明。本文結(jié)果顯示urantide可降低肝系數(shù)，減輕大鼠肝細(xì)胞脂肪變性。由此證實(shí)了我們的假設(shè)，urantide通過對肝臟脂肪變性的抑制作用，減輕了肝損傷后AS致病因子的釋放，緩解大鼠的AS病變。

4 參考文獻(xiàn)

1Schwimmer JB, Deutsch R, Behling C,etal. Fatty liver as a determinant of atherosclerosis〔J〕.Hepatology,2005;42: 610.

2趙 娟, 曹 凱, 石 燕, 等.Urantide對實(shí)驗(yàn)性動脈粥樣硬化大鼠C反應(yīng)蛋白表達(dá)的影響〔J〕. 中國動脈硬化雜志,2011;19(8):632-6.

3趙 娟. Urantide抑制動脈粥樣硬化大鼠單核細(xì)胞趨化蛋白-1的表達(dá)〔J〕.中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志,2011;25(5):425-9.

4趙 娟.尾加壓素Ⅱ在大鼠動脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制中的作用及urantide的干預(yù)研究〔J〕.中國病理生理雜志，2010;26(10): 2018-20.

5范建高, 蔡曉波.非酒精性脂肪性肝病促進(jìn)動脈粥樣硬化的發(fā)生〔J〕.中國動脈硬化雜志,2008;16(1):1-3.

6Targher G, Bertolini L, Padovani R,etal. Relations between carotid artery wall thickness and liver histology in subjects with nonalcoholic fatty liver disease〔J〕.Diabetes Care,2006;29(6):1325-30.

7Gabunia K, Jain S, England R,etal. Autieri MV the anti-inflammatory cytokine interleukin-19 inhibits smooth muscle cell migration and activation of cytoskeletal regulators of VSMC motility〔J〕.Am J Physiol Cell Physiol, 2011；300(4)：C896-906.

8Ross B, McKendy K, Giaid A,etal. Role of urotensin Ⅱ in health and disease〔J〕.Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol,2010;298(5):R1156-72.

9Leprince J, Chatenet D, Dubessy C,etal. Structure-activity relationships of urotensin Ⅱ and URP〔J〕.Peptides,2008;29(5):658-73.

10Papadopoulos P, Bousette N, Al-Ramli W,etal. Targeted overexpression of the human urotensin receptor transgene in smooth muscle cells: effect of UT antagonism in ApoE knockout mice fed with Western diet〔J〕.Atherosclerosis,2009;204(2):395-404.