秦莉花 李 晟 鐘華美 陳曉陽 秦莉峰 吳艷飛 黃 寬

(湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長沙 410208)

骨性關(guān)節(jié)炎(OA)是一個多病因、發(fā)病機(jī)制復(fù)雜的常見病， 臨床上尚缺乏有效的根治措施。常用的治療方法為服用非甾體消炎藥消炎止痛。非甾體消炎藥長期服用往往引起副作用，且療效不理想。民間用冠蓋藤治療OA，其療效顯著，課題組前期研究對冠蓋藤進(jìn)行鑒定，屬于柔毛冠蓋藤〔1〕，但其具體機(jī)制尚未明確。本課題研究冠蓋藤水提液對大鼠血常規(guī)、白細(xì)胞介素(IL)1β、IL-6、腫瘤壞死因子(TNF)-α的影響。

1 材料與方法

1.1動物 健康SD大鼠，雄性，SPF級，體重180～220 g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動物有限公司提供，動物合格證號：SCXK(湘)2009-0004。

1.2藥物 冠蓋藤在懷化市沅陵采集，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定教研室鑒定為柔毛冠蓋藤，制備成水煎液稱取冠蓋藤藥材1 500 g，分3次提取，最后濃縮成1 g生藥/6 ml的藥液，備用；雷公藤多甙片(上海復(fù)旦復(fù)華藥業(yè)有限公司，批號Z31020415)。以上藥物用時均由生理鹽水配成所需濃度。

1.3試劑及儀器 二甲苯(天津市大茂化學(xué)試劑廠，批號：20080921)。角叉菜膠(Sigma 公司，批號：45F-0427)；冰醋酸(濰坊潤潔化學(xué)有限公司)；弗氏完全佐劑F-5881(Sigma公司)；IL-1β、IL-6和TNF-α試劑盒(美國ADL公司)。其他試劑均為市售分析純。電子天平(德國Sartorius公司產(chǎn)品，型號：BP211D)；電熱三用水箱(北京市醫(yī)療設(shè)備廠)；TGL-16高速臺式離心機(jī)(江蘇大地自動化儀器廠)。

1.4OA模型的建立 取雄性SD大鼠60只，用微量注射器于左后足跖皮內(nèi)注射弗氏完全佐劑0.1 ml致炎〔2～4〕。原發(fā)病變表現(xiàn)為致炎側(cè)的關(guān)節(jié)腫脹，致敏當(dāng)天后即可出現(xiàn)；繼發(fā)病變一般于致炎后第12～18天出現(xiàn)，表現(xiàn)為非致炎側(cè)及雙前肢的關(guān)節(jié)腫脹。

1.5分組 造模成功后的50只SD大鼠隨機(jī)分為5組：模型組，雷公藤組，冠蓋藤高、中、低劑量組，每組10只。另外取10只健康SD大鼠作為正常組。造模后，雷公藤組給予雷公藤多甙片混懸液15.44 mg/kg；冠蓋藤低、中、高劑量組分別給予冠蓋藤水提取物2.31，4.62，9.24 g生藥/kg，正常組給予等容量蒸餾水。致炎當(dāng)天，各組均采用灌胃方法給藥，1次/d，給藥時間28 d。

1.6血常規(guī)、細(xì)胞因子的檢測 治療28 d后用斷頭取血，取2份，1份置抗凝管中，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院測定血常規(guī)。另1份靜置后離心，留取血清測定IL-1β、IL-6和TNF-α水平，根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行檢測。檢測大鼠的血常規(guī)，血清中IL-1β、IL-6和TNF-α。

2 結(jié) 果

2.1冠蓋藤對OA大鼠模型血常規(guī)的影響 與正常組比較，模型組大鼠血液中的白細(xì)胞、粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞數(shù)明顯升高，兩者比較有顯著性差異(P<0.01)。與模型組比較，冠蓋藤低、中、高劑量組大鼠血液中白細(xì)胞、粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞數(shù)明顯降低，兩組比較有顯著性差異(P

表1 冠蓋藤對OA大鼠血常規(guī)的影響

2.2冠蓋藤對OA大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的影響 與正常組比較，造模后各組大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平均顯著升高(P<0.01)；與模型組比較，冠蓋藤低、中、高劑量組大鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α水平均顯著降低(P<0.01)，且冠蓋藤高劑量組的抑制效果和雷公藤組相當(dāng)，見表2。

表2 冠蓋藤水提取物對大鼠血清IL-1β、IL-6和TNF-α的影響

3 討 論

OA是由Garrod在1890年首先提出的，又名退行性關(guān)節(jié)炎、老年性關(guān)節(jié)炎、變性性關(guān)節(jié)炎等，是中老人群常見的一種退行性關(guān)節(jié)疾病，而且發(fā)病率和患病率較高，隨年齡的增長而升高〔5〕。OA的臨床表現(xiàn)主要為緩慢進(jìn)展的關(guān)節(jié)疼痛、壓痛、僵硬、腫大伴活動受限，嚴(yán)重者可導(dǎo)致關(guān)節(jié)功能障礙甚至殘疾，嚴(yán)重降低了患者的生活能力和勞動能力，增加了家庭醫(yī)療費(fèi)用，給家庭和社會帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。1983年首先在人關(guān)節(jié)炎病變滑液中發(fā)現(xiàn)了IL-1，其中以IL-1β為主，而OA軟骨組織中、上層軟骨細(xì)胞及其基質(zhì)均呈IL-1強(qiáng)陽性反應(yīng)。IL-1主要由單核巨噬細(xì)胞分泌，亦可由軟骨細(xì)胞、滑膜細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等產(chǎn)生，IL-1有IL-1a和IL-1β兩種亞型，其中IL-1β是IL-1的主要成分，是一種強(qiáng)力的致痛炎癥因子，在急、慢性炎癥時，會引發(fā)全身性癥狀如發(fā)熱，在局部則引起組織炎癥和破壞性病變。湯建平等〔6〕也研究發(fā)現(xiàn)OA發(fā)病與關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞增殖旺盛，分泌過多的IL-1并釋放入血有關(guān)。骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)病機(jī)制和疼痛與關(guān)節(jié)滑膜細(xì)胞分泌過多的IL-6并釋放人血有關(guān)〔7〕。TNF是由單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)產(chǎn)生的一種肽類激素，是一種強(qiáng)有力的促炎癥細(xì)胞因子，是機(jī)體炎癥與免疫反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)因子，它除了抗腫瘤、致熱作用外，還能促進(jìn)炎細(xì)胞黏附血管壁及游出血管外，刺激內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞釋放IL-1、黏附分子等。TNF可協(xié)同白細(xì)胞介素等細(xì)胞因子共同構(gòu)成炎癥介質(zhì)〔8〕。近年來研究認(rèn)為，細(xì)胞因子TNF-α和IL-6是參與OA發(fā)病進(jìn)程中的重要介質(zhì)，是炎癥反應(yīng)的始動因素。臨床研究表明，膝OA患者體內(nèi)中TNF-α、IL-1β、IL-6高于正常人水平，炎癥因子水平的升高在膝OA發(fā)病、發(fā)展扮演重要角色〔9～11〕。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示兔OA模型的血清IL-1β和TNF-α含量都升高〔12〕。課題組前期工作已研究證明冠蓋藤抗鎮(zhèn)痛作用，其機(jī)制尚未研究〔13〕。本實(shí)驗(yàn)通過建立OA模型，檢測血常規(guī)、血清中細(xì)胞因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的變化，研究冠蓋藤水提取物對OA的治療效果及其作用機(jī)制。本文提示冠蓋藤對弗氏完全佐劑引起大鼠血常規(guī)異常有治療作用，其抗炎鎮(zhèn)痛機(jī)制之一可能通過降低白細(xì)胞、中性粒細(xì)胞數(shù)，血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平，改善局部周圍微循環(huán)，減輕骨內(nèi)壓，緩解疼痛。

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