史 江 蔣軍廣 劉瑞芬 田 蕊 安金路 楚玉潔 崔永亮 張艷梅

(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院 河南省呼吸疾病研究所 河南省高等學(xué)校臨床醫(yī)學(xué)重點(diǎn)學(xué)科開放實(shí)驗(yàn)室，河南 鄭州 450052)

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移與凋亡過程的平衡被打破有著密切關(guān)系。促凋亡基因、抑凋亡基因、凋亡效應(yīng)基因相互作用共同完成凋亡過程〔1〕。本文主要研究P53的臨床生物學(xué)意義及在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)發(fā)生、發(fā)展中的作用，期望為NSCLC的預(yù)防、診斷、臨床治療和預(yù)后判斷提供依據(jù)。

1 對象與方法

1.1對象 收集鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2010～2012年由胸外科手術(shù)切除的手術(shù)標(biāo)本，且這些標(biāo)本已經(jīng)病理證實(shí)為NSCLC，共60例作為實(shí)驗(yàn)組，女23例，男37例，年齡45～87〔平均(62.7±17.6)〕歲，腺癌29例，鱗狀細(xì)胞癌31例；按組織學(xué)分級:高分化14例、中分化29例、低分化17例；按照2002年美國聯(lián)合癌癥分類委員會(huì)和國際抗癌聯(lián)盟制定的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ期19例、Ⅱ期21例、Ⅲ期17例、Ⅳ期3例；伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者34例，不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者26例；有胸腔積液者10例，無胸腔積液者50例。所選患者均為首次發(fā)現(xiàn)，之前未接受任何方式的抗癌治療。對照組20例均為已經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為NSCLC的癌旁正常組織(即距腫瘤邊緣超過3 cm)。

1.2方法

1.2.1主要試劑 兔抗人P53單克隆抗體購于北京博奧森生物技術(shù)公司；凋亡試劑盒購于美國羅氏公司；SP試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑，購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2.2檢測方法 采用免疫組化染色檢測P53表達(dá)。采用TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡。

1.2.3陽性結(jié)果判定 P53陽性為細(xì)胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。①細(xì)胞顯色程度：無棕黃色顆粒，顏色與背景無明顯區(qū)別為0分；有棕黃色顆粒，顏色高于背景底色為1分；有染色較清晰的棕黃色顆粒，介于1分與3分之間為2分；深棕黃色顆粒多，顏色明顯比背景顏色強(qiáng)的為3分。②陽性細(xì)胞比例：0分：無陽性細(xì)胞；1分：陽性細(xì)胞比例<10%；2分：陽性細(xì)胞比例10%～50%；3分：陽性細(xì)胞比例>50%。①+②結(jié)果所得分值綜合判斷陽性表達(dá)，最后得分≥4分為表達(dá)陽性，<4分為表達(dá)陰性。

1.2.4凋亡細(xì)胞的陽性結(jié)果判定及凋亡指數(shù)(AI)的計(jì)算 凋亡細(xì)胞經(jīng)TUNEL法處理后，細(xì)胞核被染為棕黃色，使用光學(xué)顯微鏡，計(jì)數(shù)每1 000個(gè)腫瘤細(xì)胞中凋亡細(xì)胞的個(gè)數(shù)。AI的計(jì)算方法:在400倍視野下任意選取10個(gè)視野，計(jì)數(shù)所測的凋亡細(xì)胞，AI=凋亡細(xì)胞總數(shù)/計(jì)數(shù)總細(xì)胞的數(shù)×100%。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件采用χ2檢驗(yàn)及直線相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1P53陽性表達(dá) P53在60例NSCLC中表達(dá)的陽性率為58.3%(35/60)，在正常肺組織中不表達(dá)(0/20)，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=20.741，P=0.000)。P53在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的表達(dá)陽性率高于不伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(χ2=4.848，P=0.028)。P53的表達(dá)與NSCLC患者的性別、年齡、是否吸煙以及腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、病理分型、有無胸膜轉(zhuǎn)移無關(guān)。見表1。

2.2P53與細(xì)胞凋亡的關(guān)系 P53分值0、1～2、3～4、5～6分的患者AI分別為(4.65±1.68)%、(3.43±1.47)%、(2.22±0.83)%、(1.54±0.56)%,P53與AI呈負(fù)相關(guān)(r=-0.684,P=0.000)。

表1 NSCLC中P53的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

3 討 論

P53基因是重要的抑癌基因，主要通過調(diào)節(jié)細(xì)胞周期以及凋亡過程從而達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞無限增殖的功能。P53包括野生型、突變型，野生型P53半衰期短，穩(wěn)定性較差，用免疫組化法(S-P法)不易檢測〔2〕。而突變型P53是一種促癌基因，其喪失了特異性結(jié)合DNA的能力，并且可以和野生型P53結(jié)合形成結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的四聚體，以致野生型P53失去促進(jìn)可能發(fā)生癌變的細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞失活或凋亡的作用。

突變型P53在肺癌、胃癌、食管癌等腫瘤中均有高表達(dá)，也是人類遺傳病Li-Fraumeni綜合征的重要病因〔3〕。王岸柳等〔4〕研究結(jié)果顯示在人神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的表達(dá)比在腦的正常組織中的表達(dá)高，且在Ⅲ、Ⅳ期的表達(dá)明顯高于Ⅰ、Ⅱ期的表達(dá)。焦悅〔5〕研究發(fā)現(xiàn)P53在正常組織中無表達(dá)，卵巢癌中的表達(dá)較高，隨分化程度降低表達(dá)升高，隨臨床分期升高表達(dá)升高。本實(shí)驗(yàn)對NSCLC及正常肺組織中表達(dá)差異性的研究結(jié)果與上述研究中的結(jié)果一致，在不同腫瘤中的表達(dá)均高于在正常組織中的表達(dá)，提示P53的表達(dá)與腫瘤的發(fā)生有關(guān)。在對臨床病理特征關(guān)系的研究與楊錫貴等〔6〕的研究結(jié)果一致，即與伴或不伴淋巴結(jié)有關(guān)，與Uramoto等〔7〕的研究結(jié)果不一致，其認(rèn)為P53的表達(dá)與組織分型有關(guān)(P=0.03)，而與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，這可能與病例的選擇、種族差異等多種因素有關(guān)。有文獻(xiàn)研究P53高表達(dá)更易產(chǎn)生化療耐藥或放療不敏感〔8〕，有文獻(xiàn)認(rèn)為P53表達(dá)與NSCLC預(yù)后的有關(guān)系〔9〕，本實(shí)驗(yàn)尚未涉及關(guān)于治療方面的研究，因此P53與NSCLC的治療及預(yù)后的關(guān)系有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，P53的表達(dá)與NSCLC的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，其表達(dá)異?？赡茏鳛榕R床檢測NSCLC的指標(biāo)，提高了單基因檢測的準(zhǔn)確率。P53表達(dá)的異常與不同的臨床病理特征有關(guān)，可能作為判斷預(yù)后的指標(biāo)。

4 參考文獻(xiàn)

1鄭元元，蔣軍廣，趙 娜，等.γ-synuclein 在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)〔J〕.中國老年學(xué)雜志，2011；31(24)：4771-3.

2Rogel A,Popliker M,Webb CG,etal.p53 cellular tumor antigen:analysis of mRNA levels in normal adult tissues,embros and tumors〔J〕.Mol Cell Biol,1985;5(10):2581-855.

3李大虎，張令強(qiáng)，賀福初，等.突變體p53研究進(jìn)展〔J〕.遺傳,2008；30(6):697-704.

4王岸柳，劉朝霞，李 光，等.p53和Ki67在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及意義〔J〕.河北醫(yī)藥,2010；32(22):3116-7.

5焦 悅.卵巢上皮性腫瘤中P27和P53蛋白的表達(dá)及其相關(guān)性研究〔D〕.河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文,2010.

6楊錫貴，張學(xué)德，崔立獻(xiàn).非小細(xì)胞肺癌組織COX-2和p53表達(dá)及其臨床意義的探討〔J〕.中華腫瘤防治雜志,2009；16(10):752-4.

7Uramoto H,Sugio K,Oyama T,etal.Expression of the p53 family in lung cancer〔J〕.Anticancer Res,2006；26(3A):1785-90.

8武珊珊，劉吉福，李 琳，等.人肺癌組織中Ki67核抗原、p53和MDR-1基因表達(dá)的臨床病理特征觀察〔J〕.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2009；25(16):2677-9.

9王 艷，白淑平，王曉紅，等.非小細(xì)胞肺癌組織中VEGF與P53蛋白的表達(dá)及意義〔J〕.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2007；7(11):1684-6.