徐彥楠 周晨明 張國(guó)梁 車 靜 石葛明

(河北醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生物教研室，河北 石家莊 050017)

脊髓腰骶段主要控制大腸、盆底肌和生殖器官的功能〔1〕。在衰老的過程中，脊髓腰骶段呈現(xiàn)與年齡相關(guān)的衰老性變化，同時(shí)也出現(xiàn)腸、膀胱和生殖器官等盆腔臟器的器質(zhì)性和功能性改變。一氧化氮(NO) 是一種重要的神經(jīng)信息物質(zhì)，在外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中起著重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用〔2〕。有研究顯示盆腔臟器的功能或器質(zhì)異常可能與老年脊髓腰骶段的NO表達(dá)改變有關(guān)〔3〕。在衰老的過程中脊髓腰骶段的出現(xiàn)NO表達(dá)變化，特別是還原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷磷酸黃遞酶(NADPH-d)陽性體的表達(dá)改變〔3〕。機(jī)體衰老體內(nèi)性激素減少，NO特別是NADPH-d陽性體的表達(dá)變化是否與體內(nèi)性激素的減少有關(guān)目前尚無定論。本實(shí)驗(yàn)擬NADPH-d組織化學(xué)法，觀察老年大鼠脊髓腰骶段NADPH-d陽性體的表達(dá)及鼻腔給予睪酮后對(duì)其的影響。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)分組和動(dòng)物模型 選取6月齡和21月齡健康雄性Wistar大鼠15只，由河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。大鼠分為6月齡組、21月齡組和21月齡滴鼻組，每月齡組5只。6月齡組和21月齡組鼻腔給予芝麻油(2 mg/kg)，21月齡滴鼻組鼻腔給予睪酮(2 mg/kg)，連續(xù)給藥3個(gè)月(6月齡組從3月齡時(shí)開始給藥，21月齡組和21月齡滴鼻組從18月齡開始給藥)。

1.2灌注切片 所有大鼠經(jīng)10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)腹腔注射麻醉后，經(jīng)左心室灌注固定，取出脊髓后固定4 h(4℃)。取脊髓腰骶段(L6-S1)后置入30%的蔗糖中過夜。在恒冷切片機(jī)上進(jìn)行連續(xù)切片，片厚40 μm。

1.3染色 將切片在0.1 mol/L PB緩沖液漂洗兩次后。浸入孵育液(孵育液組成：0.3%Triton X-100，1.0 mmol/L β-NADPH，0.2 mmol/L NBT)置于37℃ 90～120 min，緩沖液終止反應(yīng)，裱片制片。在顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)6月齡組、21月齡組和21月齡滴鼻組分布在后角淺層(SDH)、利紹爾束(LT) 、中間外側(cè)核(ILN) 、DCN和中央管(CC)NADPH-d陽性體的數(shù)目。

2 結(jié) 果

顯微鏡下，在NADPH-d染色的方法顯色的脊髓腰骶段可以看到被染成藍(lán)色的NOS神經(jīng)元，細(xì)胞呈高爾基樣，其胞體和突起清晰可見。并且在21月齡組以及21月齡給滴鼻組均可見高密度球形或不規(guī)則形的NADPH-d陽性體。見圖1。6月齡組雄性Wistar大鼠脊髓腰骶段未出現(xiàn)NADPH-d陽性體21月齡組老年大鼠脊髓腰骶段出現(xiàn)較多的NADPH-d陽性體，老年大鼠鼻腔給予睪酮后此陽性體數(shù)目減少(圖1，表1)。而與21月齡組相比，21月齡滴鼻組SDH、LT、ILN、DCN和CC分別減少19%、26%、42%、31%、27%，21月齡滴鼻組與21月齡組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖1 各組NADPH-d染色結(jié)果(Bar=100 μm)

表1 21月齡組和21月齡滴鼻組NADPH-d陽性體數(shù)目

3 討 論

本文提示大鼠在衰老過程中NADPH-d陽性體逐漸增多，而睪酮可能能夠抑制它的增多。

SDH(Ⅰ層和Ⅱ?qū)?及DCN和ILN分別是內(nèi)臟傷害性信息向中樞傳遞以及中樞對(duì)外周傷害性信息進(jìn)行神經(jīng)調(diào)控的主要部位〔4〕。腰骶髓DCN和ILN是位于脊髓的重要核團(tuán),它們參與盆腔內(nèi)臟傷害性信息的傳遞〔5〕。脊髓腰骶段與腸、膀胱和生殖器官功能障礙聯(lián)系密切〔7〕。NO是由一氧化氮合酶(NOS)合成，是一種重要的神經(jīng)遞質(zhì)在外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)中起著重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用〔2〕。NADPH-d的分布與的NOS分布基本一致，所以可以用NADPH-d 組化技術(shù)對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的NOS進(jìn)行定位和定量分析。分布在脊髓的大量的NADPH-d陽性神經(jīng)元參與內(nèi)臟的調(diào)節(jié)〔7〕。有研究報(bào)道老年大鼠脊髓腰骶部的NADPH-d陽性體數(shù)量和分布較成年大鼠增多，并集中在脊髓腰骶部背側(cè)部如：SDH、LT、ILN、DCN、CC等〔3〕，與本研究結(jié)果相同。老年大鼠盆腔內(nèi)臟功能減弱，可能與脊髓腰骶部NADPH-d陽性體的出現(xiàn)有關(guān)〔3〕。在衰老的過程中，大鼠的性激素水平逐漸降低。本文顯示老年大鼠鼻腔給予睪酮后NADPH-d陽性體數(shù)目明顯減少，說明睪酮可能抑制了NADPH-d陽性體增多。所以給予睪酮可能會(huì)對(duì)盆腔內(nèi)臟的功能起到改善作用。

綜上，由NADPH-d陽性體導(dǎo)致的老年人盆腔臟器功能障礙可能與體內(nèi)性激素水平降低有關(guān)，其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

4 參考文獻(xiàn)

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