朱小兵 石翊颯 劉志龍

(中山市中醫(yī)院麻醉科，廣東 中山 528411)

利多卡因減輕大鼠腎臟缺血再灌注損傷與其抑制腎組織CD44和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的表達(dá)有關(guān)〔1〕，但確切機(jī)制尚不清楚。研究表明，氧化應(yīng)激反應(yīng)在腎缺血再灌注(IR)損傷中起重要作用〔2〕。15-F2t-isoprostance是氧化應(yīng)激的特異性產(chǎn)物，可通過激活血栓烷A2受體產(chǎn)生血管收縮〔3～9〕，但其是否參與利多卡因減輕腎IR損傷過程中尚不明確。本研究評(píng)價(jià)利多卡因預(yù)先給藥對(duì)腎臟缺血再灌注損傷大鼠血清15-F2t-isoprostance濃度的影響。

1 材料與方法

1.1動(dòng)物與分組 健康雄性Wistar大鼠36只，體重300～350 g，甘肅中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，隨機(jī)分為：假手術(shù)組、IR組和利多卡因組，每組12只。

1.2大鼠腎臟缺血再灌注模型的建立 實(shí)驗(yàn)室溫度為25℃，大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，自由進(jìn)水。腹腔注射3%戊巴比妥50 mg/kg麻醉下，股靜脈穿刺置管，注射肝素400 U/kg后，輸注林格氏液20 ml·kg-1·h-1。參照文獻(xiàn)〔10〕采用的方法建立大鼠腎臟IR模型。于脊柱兩旁0.5 cm肋弓下0.5 cm各縱向切開皮膚1 cm，鈍性分離腰大肌，暴露雙側(cè)腎臟，分離腎動(dòng)脈，用無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾閉雙側(cè)腎動(dòng)脈，腎臟由紅褐色短時(shí)間內(nèi)變成蒼白色再逐漸變成暗紫色為缺血成功的標(biāo)志；60 min后松開動(dòng)脈夾，恢復(fù)血流灌注4 h，腎臟由暗紫色變?yōu)榧t褐色為再灌注成功的標(biāo)志。若松開動(dòng)脈夾5 min后，腎臟仍未轉(zhuǎn)變?yōu)榧t褐色，則為再灌注未成功，剔出研究。

1.3分組處理 利多卡因組于夾閉雙側(cè)腎動(dòng)脈前60 min靜脈注射利多卡因(批號(hào)：110411，上海朝暉藥業(yè)有限公司)5 mg/kg，隨后以2 mg·kg-1·h-1速率靜脈輸注，輸注時(shí)間為60 min；IR組于夾閉雙側(cè)腎動(dòng)脈前60 min注射等容量生理鹽水，利多卡因組；假手術(shù)組不夾閉雙側(cè)腎動(dòng)脈，余同IR組。

1.4測(cè)定指標(biāo) 于再灌注4 h時(shí)，打開胸腔，經(jīng)心尖抽取血樣2 ml，4℃下，離心后取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法測(cè)定15-F2t-isoprostance、ET-1濃度。取腎臟組織，沿長(zhǎng)軸切開分為兩半，置于4%多聚甲醛中固定，石蠟包埋，制成厚6 μm的連續(xù)切片，取3張相鄰的切片，分別進(jìn)行HE染色，光鏡下觀察腎組織病理學(xué)結(jié)果；將剩余心肌組織，加入生理鹽水制成10%組織勻漿，參照試劑盒說(shuō)明書，采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)活性，硫代巴比妥酸法測(cè)定丙二醛(MDA)含量。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0進(jìn)行單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1腎組織HE染色結(jié)果 光鏡下假手術(shù)組腎小球和腎小管結(jié)構(gòu)完整；IR組腎小球毛細(xì)血管擴(kuò)張、充血，部分腎小球體積縮小，大量腎小管細(xì)胞水腫、顆粒樣變性，管腔縮小，部分腎小管腔閉合；利多卡因組腎小球毛細(xì)血管輕度擴(kuò)張、充血，病理學(xué)損傷輕于IR組。

2.2腎組織SOD活性降低，MDA含量和血清15-F2t-isoprostance及ET-1濃度 與假手術(shù)組比較，IR組SOD活性降低，MDA含量、15-F2t-isoprostance及ET-1濃度升高(P<0.05)，利多卡因組SOD活性、MDA含量、15-F2t-isoprostance及ET-1濃度差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與IR組比較，利多卡因組SOD活性升高，MDA含量、15-F2t-isoprostance及ET-1濃度降低(P<0.05)，見表1。

表1 三組大鼠腎組織SOD活性、MDA含量及血清15-F2t-isoprostance、 ET-1濃度的比較(n=12，±s)

3 討 論

以往研究多采用腹腔正中切口分離腎動(dòng)脈建立IR模型，而本研究采用脊柱旁切口分離腎動(dòng)脈，因不進(jìn)入腹腔，減少了對(duì)大鼠的創(chuàng)傷，降低了死亡率。本研究中，IR組腎臟缺血60 min再灌注4 h后，提示大鼠腎臟缺血再灌注損傷模型制備成功。本研究參考文獻(xiàn)〔11〕結(jié)合預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選擇利多卡因給藥方法，利多卡因5 mg/kg靜脈注射后以2 mg·kg-1·h-1速率靜脈輸注60 min后大鼠腎組織SOD活性上調(diào)、MDA含量降低，提示利多卡因可減輕腎臟缺血再灌注損傷大鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)，王紅梅等〔12〕研究表明，利多卡因可減輕冠狀動(dòng)脈搭橋術(shù)患者炎性反應(yīng)。ET-1是一種內(nèi)源性的強(qiáng)血管收縮因子。研究表明，心肌缺血再灌注期間產(chǎn)生的15-F2t-isoprostance可誘導(dǎo)ET-1基因表達(dá)，促進(jìn)其的產(chǎn)生和釋放，加重心肌細(xì)胞的損傷。本研究提示利多卡因減輕大鼠腎臟缺血再灌注損傷與其抑制15-F2t-isoprostance、ET-1釋放有關(guān)，具體機(jī)制有待于進(jìn)一步探討。

綜上，利多卡因減輕大鼠腎臟IR損傷與其抑制15-F2t-isoprostance、ET-1釋放有關(guān)。

4 參考文獻(xiàn)

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12王紅梅,戴安盧,周海燕,等.利多卡因?qū)跔顒?dòng)脈搭橋術(shù)患者體外循環(huán)致全身炎性反應(yīng)的影響〔J〕.中華麻醉學(xué)雜志,2006；26(4):326-8.